GIÁO TRÌNH THỰC TẬP DƯỢC LÝ ĐỐI TƯỢNG DƯỢC HỆ ĐẠI HỌC

UỶ BAN NHÂN DÂN TPHCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y KHOA PHẠM NGỌC THẠCH KHOA DƯỢC BỘ MÔN DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG GIÁO TRÌNH THỰC TẬP DƯỢC LÝ ĐỐI TƯỢNG DƯỢC HỆ ĐẠI HỌC TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ TPHCM, tháng 10 năm 2020 THỰC TẬP DƯỢC LÝ MỤC LỤC BÀI TỰA BÀI i Một số quy định thực tập dược lý thú ii Hướng dẫn thí nghiệm động vật iii Những thủ thuật Thử kích ứng da Thử độc tính bất thường Ảnh hưởng đường đưa thuốc đến tốc độ hấp thu thuốc Ảnh hưởng pH dịch dày đến hấp thu thuốc Tác động đối kháng phenobarbital strychnin Tác dụng giảm đau diclofenac Tác dụng thuốc mê chuột nhắt Liên quan hoạt tính dược lực cấu trúc hóa học Tác dụng thuốc đồng tử 10 Tác dụng thuốc q trình đơng máu THỰC TẬP DƯỢC LÝ TRÊN THÚ MỘT SỐ QUY ĐỊNH Ở PHÒNG THỰC TẬP DƯỢC LÝ Trong phịng thí nghiệm sinh viên phải mặc áo chồng trắng, có đeo bảng tên, nhóm sinh viên chia thành tổ làm việc theo tổ Sau buổi thực tập bắt đầu 15 phút, sinh viên đến trễ thực tập bù vào buổi thực tập khác có đơn xin phép với sinh viên vắng mặt có lý Để nắm vững thực tập, sinh viên kiểm tra vào đầu buổi thực tập Sinh viên phải tôn trọng nội quy phòng thực tập trật tự, vệ sinh, dụng cụ cách thức xử lý thú sau thực tập Phải tham dự đầy đủ buổi thực hành Khơng gian lận học tập có nhiệm vụ báo cáo cho mơn có tượng khơng trung thực học tập, thi cử TRẬT TỰ Sinh viên phải giữ gìn trật tự chung, khơng trao đổi ồn ào, lớn tiếng, không di dời ghế gây tiếng động tiếng động ảnh hưởng đến thú vật làm sai lệch kết thí nghiệm Sinh viên muốn vào phịng thực tập phải chấp thuận giáo viên hướng dẫn VỆ SINH Mỗi tổ thực tập phải chuẩn bị khăn lau bàn khăn lau tay Sinh viên phải dọn dẹp vệ sinh sau thú đại, tiểu tiện Sau buổi thực tập, mặt bàn phải lau chùi trước thực tập Không đổ rác, phân vào bồn nước Rác phải bỏ vào bocal thủy tinh Cuối buổi thực tập, tập trung rác vào bocal lớn để môn xử lý Bocal đựng chuột rửa trả lại vị trí cũ vào cuối buổi tập THÚ VẬT Ln nhẹ tay với thú vật thí nghiệm, mạnh tay làm sai lệch ảnh hưởng kết thực tập làm cho thú Không đụng chạm thường xuyên vào thú vật không cần thiết Không hành hạ thú vật (bao gồm thú vật chết trình thực tập) Vi phạm điều này, sinh viên bị khiển trách, chịu kỷ luật, bị trừ điểm điểm thi kết thúc thực tập Thú vật sau thử nghiệm xong phải phân loại riêng: thú chết, thú cịn mê, thú cịn sống Khơng để chung rác với thú vật DỤNG CỤ Đầu buổi thực tập, tổ cử người nhận dụng cụ, thuốc thú vật thử nghiệm Mỗi tổ chịu trách nhiệm tất dụng cụ thực tập Không di dời dụng cụ dùng chung cho nhóm Sau buổi thực tập, tất dụng cụ phải rửa sẽ, hoàn lại đầy đủ Kim tiêm ống tiêm phải rửa sau lần dùng tráng lại nước cất Sinh viên làm hư hỏng dụng cụ, phải báo lại cho mơn có trách nhiệm bồi hoàn lại vào ngày thực tập sau QUY ĐỊNH CỦA BUỔI THỰC TẬP Sinh viên phải: - Đọc kỹ thực tập trước vào thực tập - Học lý thuyết nguyên tắc liên quan đến thực tập - Thực quy định cho sinh viên phòng thực tập Khi đến phòng thực tập phải sẵn sàng làm việc ngay, ghi chép kết về: - Các thông tin thú vật thử nghiệm (chủng loại, giống, phái, trọng lượng…) - Thời gian (tính phút) xảy phản ứng bất thường nơi thú vật thử nghiệm - Mô tả phản ứng xuất hiện, có xác nhận cán môn - Cuối buổi thực tập, sinh viên phải nộp báo cáo thực tập - Không nên ghi chép kết thực tập giấy nháp mà phải ghi trực tiếp vào tập, giáo trình Như tránh mát hay sai lầm - Khi nhiều tổ làm thực tập, tổ dùng dược phẩm với liều thử nghiệm ghi bảng theo quy định Khi thử nghiệm xong, kết tổ ghi lên bảng sinh viên làm báo cáo dựa kết chung với ghi riêng tổ hay kết hợp với nhận xét tổ khác - Sinh viên phải thận trọng thực tập - Pha chế thuốc nồng độ tiêm liều lượng cho thú vật theo quy tắc người thực người kiểm tra Nếu không dễ gây nhầm lẫn, làm sai lệch kết tổ nhóm bất cẩn cá nhân nhóm VÀI HƯỚNG DẪN VỀ THỬ NGHIỆM TRÊN ĐỘNG VẬT Các lưu ý thử nghiệm động vật - Chủng thú vật: chuột Swiss albino, thỏ New Zealand - Phái - Trọng lượng - Liều lượng thuốc sử dụng - Đường hâp thu (uống PO, tiêm da SC, tiêm bắp IM, tiêm phúc mô IP, tiêm tĩnh mạch IV) - Ngày dùng thuốc Các phản ứng phải ghi thử nghiệm thú - Tiềm thời: thời gian tính từ lúc cho thuốc vào thể đến thuốc có hiệu lực - Vận tốc tác động tốc độ để đạt phản ứng cụ thể sau dùng thuốc - Thời gian tác động: thời gian tính từ lúc thuốc bắt đầu có hiệu lực đến thuốc khơng cịn hiệu lực - Thời gian tác động trung bình: trị số trung bình thời gian tác động tìm nhóm - Cường độ tác động: mức độ phản ứng xảy thú sau dùng thuốc - Cường độ tác động tối đa: phản ứng tối đa xảy thú sau dùng thuốc Một vài phản ứng xảy dùng thuốc ngủ: - Thay đổi cử động tổng quát: liếm lông, đứng hai chân, nhịp thở thay đổi, di chuyển nhanh chậm… - Thất điều: thú di chuyển lảo đảo người say điều hòa vận động thể - Trạng thái ngủ: thú gọi ngủ ta đặt nhẹ trước mũi vật đầu que hay bút chì, khơng có phản ứng hết (hít, ngửi, quay đi…) Lưu ý: khơng chạm râu chuột, chuột mở mắt ngủ - Mất phản xạ co rút chân: vị trí nghỉ, kéo chân thú phía sau, nhanh chóng co rút chân vị trí cũ Nếu sau giây mà khơng rút chân xem phản xạ co rút chân - Mất phản xạ thăng bằng: - • Phản xạ thăng dùng đánh giá tính gây mê liều mạnh thuốc ngủ hay thuốc mê • Sau thú phản xạ co rút chân, tiến hành thử phản xạ thăng Bình thường, lật vật nằm nghiêng hay ngửa, nhanh chóng lật úp lại, sau giây khơng lật úp lại xem phản xạ thăng Mất cảm giác đau, phản xạ đau: • Sau phản xạ thăng vài phút, ta thử cảm giác đau phản xạ đau • Khi dùng kim đâm nhẹ vào chuột, bình thường phản ứng lại: bỏ chạy, quay lại cắn vào đầu kim, không tỉnh mà rung giật mạnh • Chuột xem phản xạ đau nằm n khơng rung giật Các phản ứng xảy sử dụng thuốc khác: - Chứng run - Co giật hồi (clonic) - Co giật kiểu phong đòn gánh (tonic) - Thay đổi nhịp tim - Mất phản xạ mí mắt - Dãn hay thu hẹp - Phản ứng chảy nước mắt - Phản ứng chảy nước bọt - Phản ứng dựng lông - Phản ứng Straub (dựng đuôi) - Tiêu chảy - Tiểu tiện - Chứng bì (tím tái tai, chân, niêm mạc) - Chết cấp thời: thời gian từ lúc tiêm dược phẩm đến lúc chết mà vật chưa tìm lại phản xạ thăng Sự chết cấp thời xảy lúc thực tập tiêm nhanh NHỮNG THỦ THUẬT CƠ BẢN KHI LÀM THỬ NGHIỆM DƯỢC LÝ Bắt thú vật khỏi chuồng - Thỏ: tay xách hai tai thỏ, tay cịn lại nắm phần da lưng gần thỏ - Chuột nhắt chuột cống: nắm đuôi chuột, nhẹ nhàng nhấc chuột lên, tránh làm mạnh tay, gây kích thích chuột Cân thú vật - Thỏ: đặt thỏ vào thau nhưa, dùng cân bàn để cân - Chuột (chuột nhắt, chuột cống, chuột lang): cho vào bocal, dùng cân điện tử để cân - Nếu khơng có cân điện tử, dùng tạm cân để cân chuột nhắt Đánh dấu thú vật - Trong thử nghiệm sinh học, thử nghiệm độc tính cần phải dùng nhiều thú vật, cần phải đánh dấu chúng để tránh nhầm lẫn quan sát Có thể dùng acid picric hay bút lông để đánh dấu chuột sau: Đầu Chân phải trước Chân phải sau Đuôi Chân trái sau Chân trái trước Lưng Đầu + Lưng Đầu + đuôi 10 Lưng + Đuôi 11 Hai chân phải 12 Hai chân trái 13 Hai chân trước 14 Hai chân sau 15 Đầu + chân phải 16 Đầu + chân trái 17 Đầu + chân trước 18 Đầu + chân sau 19 Đầu + Lưng + Đuôi 20 Bốn chân - Nếu số lượng chuột ít, dùng bút lơng đánh vịng trịn chuột (hay dùng) Các dụng cụ thường dùng - Bocal: dùng để đựng chuột thử nghiệm, rác, xác thú vật chết Không để chung thú vật thử nghiệm với thú vật chết rác - Vĩ lưới: dùng để giữ chuột chuẩn bị cho chuột dùng thuốc giúp hạn chế việc bị chuột cắn - Dao mổ, kéo, kẹp (pince)… dùng cho việc phẫu thuật - Kim tiêm, ống tiêm dùng đưa thuốc vào thể thú vật Chuột nhắt dùng: • • Kim số 25-27, có chiều dài từ ½ - inch (1 inch = 25.4 mm) Ống tiêm: dung tích khơng ml, có khắc độ 0.1 – 0.01 ml Có thể dùng ống tiêm loại thường dung tích ml Chuột cống dùng: • • • • Kim số 24-26, chiều dài từ ¾ - inch (1.8 – 2.45 cm) Ống tiêm: ml, ml Chuột lang dùng: Kim số 20, dài 1.5 inch (3.5 cm) Thỏ dùng: - • Kim số 19 -20 • Ống tiêm thường 10 ml, 20 ml Cách cầm kim: mặt vát chéo đầu kim ln nằm phía đưa vào thể thú Phương cách cho thuốc vào thể - - Thỏ: nhốt vào hộp thỏ, hộp cần người giúp nắm chân trước đồng thời giữ thỏ ngồi yên để tiêm tĩnh mạch tai, hay cho uống Muốn tiêm da hay phúc mô phải buộc căng thỏ mâm Chuột nhắt, chuột cống chuột lang: đặt chuột lên vĩ sắt, tay phải nắm đuôi Tùy theo đường cho thuốc vào chuột mà có cách bắt giữ thích hợp Bơm vào dày: cho uống (PO = per os) - - Chuột: Một tay nắm chuột, ngón ngón trỏ tay cịn lại nắm chặt phần da gáy lỗ tai chuột, đặt chuột nằm ngữa lịng bàn tay, ngón cịn lại nắm da lưng chuột giữ thân chuột thẳng Chuột nhắt: • Dùng ống tiêm kim đặt biệt (ống dò), cho kim đặc biệt vào mõm chuột, đẩy nhẹ từ từ vào thực quản Khi thấy ống nằm vị trí (chuột có cử động nuốt) bơm thuốc vào (0.2 – 0.5 ml) • - Khi cho chuột uống, chưa rút kim mà chuột chết ống nhựa hay kim vào nhầm khí quản làm chuột ngạt thở, gây chết tác động thuốc Chuột cống: kỹ thuật Để an tồn, sử dụng bao tay Có thể cho uống đến ml Chuột lang: cho uống – ml Thỏ: • Cố định thỏ hộp thỏ nhờ người giúp giữ yên thỏ, tay trái để đầu thỏ, dùng ngón ngón trỏ bóp bên mép miệng thỏ cho thỏ mở miệng Khi thỏ mở miệng, nhanh chóng đặt gỗ cho thỏ uống vào miệng thỏ, ngày sau lưỡi • Tay phải đưa từ từ ống nhựa mềm gắn liền với ống tiêm lấy thuốc vào lỗ khoét miếng gỗ Khi ống nhựa vào đến thực quản bơm thuốc • Thể tích bơm vào dày thỏ: – 10 ml • Miếng gỗ có kích thước 15 x x 0.6 cm, có khoét lỗ nhỏ Tiêm da (SC = sous cutané) - - - Chuột: cho chuột nằm yên vĩ sắt Kẹp ngón áp út ngón út Dùng ngón ngón trỏ kéo nếp da lưng (phía gần đi), bơi cồn để lộ phần da muốn tiêm (phần da nằm đầu ngón tay trỏ) Mặt vát kim hướng lên trên, đâm kim vào song song với mặt lưng, bơm thuốc Nghiêng kim góc 45o, rút kim để dung dịch không bị trào ngược trở lại Không dùng gịn chấm vào vết tiêm làm cho dung dịch tiêm trào ngược trở lại Chuột nhắt: • Đối với chuột – tuần (chuột con) nên tiêm vai, ta tiêm da bụng tránh đâm kim sâu xuyên qua màng phúc mơ • Có thể tim đến ml Nếu tiêm có u phẳng lên Chuột cống: kỹ thuật trên, tiêm lưng hay bụng Có thể tiêm đến 10 ml Chuột lang (Cobaye): kỹ thuật trên, tiêm tối đa ml, rải rác nhiều nơi Thỏ: • Nhốt thỏ hộp buộc thỏ nằm ngữa khay, thủ thuật • Có thể tiêm đến 10 ml hơn, da hông hay bụng tốt hết nên tiêm rải rác nhiều nơi Tiêm da (ID = Intradermique) - - Tương tự tiêm da, không đâm sâu, đâm vào phần da Chuột nhắt: thường tiêm lịng bàn chân, tiêm đến 0.05 ml Nếu tiêm thấy u lồi Chuột cống: cạo lông nơi định tiêm (thường phần sau lưng) Cạo lông lưỡi lam dùng hóa chất (sulfur strotium), hóa chất cạo nhẵn Căng da kéo nếp da, đâm thẳng kim vào lối – mm, cho u Mỗi lần tiêm 0.02 – 0.04 ml Thỏ: tiêm bụng, kỹ thuật tương tự chuột cống Tiêm bắp thịt (IM = Intramuscular) - Chuột nhắt: kim số 26 loại ngắn ½ inch - Cần người giúp kéo chân sau, giữ yên chuột Đâm kim vào đùi, mặt ngồi, tránh đâm q sâu, chạm vào xương, rút kim từ từ, tiêm đến 0.5 ml Chuột cống: kỹ thuật trên, tiêm đến ml Thỏ: kỹ thuật trên, tiêm đến 15 ml Cobaye: kỹ thuật trên, tiêm đến 15 ml Tiêm tĩnh mạch (IV = Intravenous) - - Chuột: • Đặt chuột vào hộp đặc biệt, để ló ngồi hay vĩ sắt, kéo lên Ta chà mạnh đuôi với cồn 90o, hỗn hợp cồn đốt + xylol ngâm đuôi phút nước ấm 45o C để làm trương tĩnh mạnh dễ tiêm • Đặt định tiêm lên ngón trỏ trái, giữ với ngón tay ngón Nếu tiêm tĩnh mạch ta thấy rõ ràng dung dịch đẩy máu tĩnh mạch, tiêm chậm Chuột nhắt: kim số 27, tiêm đến 0.5 ml Chuột cống: tiêm đi, kỹ thuật bộc lộ tĩnh mạch đùi để tiêm, tiêm đến ml Chuột lang (Cobaye): khó tiêm tĩnh mạch tai, người ta thường dùng cách tiêm vào tim (tối đa ml) Thỏ: chà xát tai thỏ với cồn, đặt ngón trái lên vành tai, ngón trỏ ngón vành tai Tay phải cầm kim đâm vào lối – mm Nên tiêm gần đầu tai để sử dụng lại tĩnh mạch cần tiêm nhiều lần trường hợp tiêm không tĩnh mạch lần (dung dịch tiêm khơng ngồi qua vết tiêm cũ) Có thể tiêm 10 ml cho kg thỏ Tiêm phúc mô (IP = Intraperitoneal) - - Chuột nhắt: giữ chuột cho uống kẹp đuôi ngón Tiêm ½ sau bụng (tránh đường bụng) Tiêm làm thời kỳ: • Để chuột nằm ngang, cầm nghiêng kim đâm vào da, trút đầu chuột xuống đất để quan dịch phía tránh tổn thương • Ấn thẳng kim vào lối – mm để xuyên qua vào phúc mô.Nếu không gặp trở ngại tiêm ml Trường hợp ngược lại (đụng vào quan) phải rút kim chút Thỏ: cạo lông bụng, kỹ thuật giống Có thể tiêm – 20 ml Cách nhỏ thuốc vào mắt thỏ (bao kết mạc) - Kéo mí mắt dưới, nhỏ thuốc giữ cho thuốc đừng chảy ngồi cách dùng tay khép kín mí mắt lại Cách pha dung dịch để tiêm: v Từ đặc chế: Ví dụ: Pha dung dịch đủ để tiêm cho chuột nhắt trắng nặng trung bình 18 – 22 g từ ống tiêm Nembutal chứa 250 mg pentobarbital natrium/5 ml nước vô trùng hay 50 mg/ml dung môi Biết điều kiện tiệm 0.1 ml/10 g chuột nhắt liều tiêm 50 mg/1 kg chuột Bài 2: THỬ ĐỘC TÍNH BẤT THƯỜNG v Mục tiêu Sau kết thúc thực tập sinh viên có thể: § Tính tốn pha chế dung dịch thuốc nồng độ cần thử nghiệm § Hiểu rõ bước tiến hành thử nghiệm để thử độc tính bất thường dược phẩm NGUYÊN TẮC Độc tính bất thường thuốc xác định cách theo dõi số chuột chết thời gian 48 sau cho chuột liều thuốc qua đường dùng theo qui định VẬT DỤNG - Ống tiêm ml kim số 26 - Kim đầu tù - Gòn, cồn - Cân, bocal thủy tinh đựng chuột - Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, cân nặng 18 g đến 22 g, chưa dùng vào thí nghiệm, chuột phải khơng có thai cho bú, chăn ni điều kiện bình thường - Dung dịch strychnyl sulfate 0,1 % KỸ THUẬT Chuẩn bị dung dịch thử Nếu khơng có hướng dẫn khác, chuẩn bị dung dịch thử cách hòa tan mẫu thử dung dịch natri clorid 0,9 % nước cất tiêm (nếu thử theo đường tiêm) phân tán mẫu thử nước cất (nếu thử theo đường uống) để thu dung dịch hỗn dịch có chứa lượng chất cần thử phù hợp với mức liều qui định Tiến hành thử Dùng chuột, cho 0,5 ml dung dịch thử đường dùng sau: Tiêm tĩnh mạch: Tiêm vào tĩnh mạch đuôi chuột với tốc độ định 15 giây đến 30 giây 16 Tiêm màng bụng: Tiêm qua lớp da bụng vào thẳng hốc bụng chuột Tiêm da: Tiêm da vào chỗ lưng bụng Uống: Cho uống kim cong đầu tù dụng cụ khác thích hợp, phải đảm bảo đưa thuốc vào thực quản dày Đánh giá kết Nếu khơng có hướng dẫn khác quan sát chuột 48 sau dùng thuốc Nếu khơng có chuột chết mẫu thử đạt yêu cầu Nếu có chuột chết, làm lại thử nghiệm với 10 chuột khác, dùng chuột trọng (19 ± 1) g Sau 48 giờ, khơng có chuột chết mẫu thử đạt yêu cầu 17 Tổ: Nhóm: BÁO CÁO THỰC TẬP THỬ ĐỘC TÍNH BẤT THƯỜNG NGUYÊN TẮC KẾT QUẢ THỰC TẬP 2.1 Chuẩn bị dung dịch thử 2.2 Kết theo dõi chuột Số chuột thử Cân nặng (g) Chuột số Số chuột chết Số chuột sống 2.3 Biện luận kết - kết luận 18 BÀI ẢNH HƯỞNG CỦA ĐƯỜNG ĐƯA THUỐC ĐẾN TỐC ĐỘ HẤP THU THUỐC MỤC ĐÍCH - Chứng minh đường đưa thuốc ảnh hưởng đến tốc độ hấp thu thuốc CHUẨN BỊ - Súc vật: chuột nhắt trắng, con, khỏe mạnh, có trọng lượng tương đương - Hóa chất: dung dịch strychnin sulfat 0,1% - Dụng cụ: chậu thủy tinh, bơm kim tiêm, bơm kim đầu tù cho chuột uống thuốc, đồng hồ bấm giây CÁCH TIẾN HÀNH - Cho chuột vào chậu thủy tinh, đánh dấu phân biệt chuột Dùng strychnin sulfat 0,1% với liều 0,3 ml/con đưa vào chuột theo đường khác nhau: đường uống, tiêm da, tiêm phúc mạc, tiêm báp, tiêm tĩnh mạch - Dùng đồng hồ bấm giây theo dõi thời gian từ đưa thuốc vào thể đến chuột xuất co giật chết KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN - Ghi lại kết quả, giải thích rút áp dụng thực tế 19 BÀI ẢNH HƯỞNG CỦA pH DỊCH DẠ DÀY ĐẾN SỰ HẤP THU CỦA THUỐC MỤC ĐÍCH - Chứng minh pH dịch dày ảnh hưởng đến hấp thu thuốc CHUẨN BỊ - Súc vật: chuột nhắt trắng, con, khỏe mạnh, có trọng lượng tương đương nhau, cân nặng từ 18 - 20 gam, để nhịn ăn từ 18 - 20 - Hóa chất: dung dịch NaHCO3 5%, HCl 1%, strychnin sulfat 0,1% - Dụng cụ: đồng hồ bấm giây, kim đầu tù cho chuột uống thuốc CÁCH TIẾN HÀNH - Chuột 1: uống 0,3 ml dung dịch NaHCO3 5%, sau uống 0,3 ml dung dịch strychnin sulfat 0,1% Dùng đồng hồ bấm giây để xách định thời gian từ uống strychnin đến chuột co giật chết - Chuột 2: làm tương tự chuột thay dung dịch NaHCO3 5% dung dịch HCl 1% KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN - So sánh thời gian từ uống strychnin đến xuất hiện tượng co giật chết cà chuột, giải thích cho biết áp dụng thực tế thí nghiệm 20 BÀI TÁC ĐỘNG ĐỐI KHÁNG CỦA PHENOBARBITAL VÀ STRYCHNIN NGUYÊN TẮC Hai dược phẩm đối kháng hoạt tính hai dược phẩm làm giảm tiêu hủy tác động dược phẩm Trong thực tập ta quan sát tác động đối kháng strychnin sulfat phenobarbital chuột nhắt Strychnin sulfat, alcaloid hạt mã tiền, chất kích thích thần kinh trung ương chủ yếu tủy sống Phenobarbital chất ức chế hệ thần kinh trung ương, có tác dụng an thần gây ngủ chống co giật CHUẨN BỊ Thuốc thử: - Phenobarbital 1% - Strychnin sufat 0,04% Dụng cụ - bình thủy tinh - ống tiêm 1ml - Cân lồng chuột - Đồng hồ TIẾN HÀNH - Mỗi nhóm khảo sát chuột - Đánh dấu chuột, cân chuột, đếm nhịp thở, tính liều - Tiêm màng bụng: Chuột A: tiêm phenobarbital liều 40 mg/kg, 25 phút sau tiêm strychnin liều mg/kg Chuột B: tiêm strychnin liều mg/kg Chuột C: tiêm phenobarbital liều 70 mg/kg, 25 phút sau tiêm strychnin liều mg/kg - Ghi lại thời điểm tiêm chuột - Quan sát chuột ghi nhận thời điểm: lông chuột dựng đứng, tứ chi co quắp, đứng khó khăn, co giật tồn thân, co giật kiểu tetanos, tứ chi duỗi thẳng, chết (nếu có) KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN Bảng kết tác động đối kháng phenobarbital strychnin sulfat Chuột A Chuột B Chuột C 21 Phái Trọng lượng (g) Thuốc sử dụng Strychnin Phenobarbital Thể tích tiêm Đường sử dụng Thời điểm tiêm (T0) Thời gian từ lúc Co giật clonic (kích thich) tiêm strychnin Co giật clonic đến bắt đầu Co giật tonic Chết có Tần số co giật / phút Nhịp thở chuột/ phút Thời gian từ lúc Thất điều (phút) tiêm thuốc (T0) Ngủ (phút) đến Mất phản xạ co rút chân (phút) Mất phản xạ thăng (phút) Mất phản xạ đau Dựa triệu chứng chuột A B so với chuột C để kết luận tác dụng đối kháng phenobarbital strychnin sulfat 22 BÀI TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA DICLOFENAC MỤC ĐÍCH Chứng minh tác dụng giảm đau ngoại vi Diclofenac phương pháp gây đau quặn acetic acid CHUẨN BỊ - Động vật: chuột nhắt trắng, khỏe mạnh, có trọng lượng tương đương (20,0 ± 2,0g), khơng phân biệt giống - Hóa chất: + Dung dịch diclofenac 1,0% + Dung dịch natri clorid 0,9% + Dung dịch acid acetic 1,0% - Dụng cụ: phễu thủy tinh, bơm - kim tiêm loại, bơm kim đầu tù cho chuột uống thuốc, lồng nhốt chuột, đồng hồ bấm giây TIẾN HÀNH - Chia chuột làm nhóm, nhóm con, đánh dấu để phân biệt chuột + Nhóm 1: tiêm phúc mạc dung dịch natri chlorid 0,9% với liều 0,1 ml/10g + Nhóm 2: tiêm phúc mạc dung dịch diclofenac 1,0% với liều 0,1 ml/10g - Chờ sau 10 phút, đồng thời tiêm phúc mạc nhóm dung dịch acid acetic 1,0%, liều 0,1 ml/10g Tiêm xong, nhốt chuột vào phễu thủy tinh Khi chuột xuất đau quặn thả chuột khỏi phễu để quan sát KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN - Xác định thời gian xuất đau quặn chuột (là thời gian từ lúc tiêm acid acetic cho chuột xuất đau quặn chuột, tính giây) - Tính kết trung bình nhóm - Cường độ đau quặn chuột (đếm số đau quặn phút) Tính kết trung bình nhóm - So sánh kết thu từ nhóm - Nêu đặc điểm tác dụng giảm đau diclofenac giải thích chế - Nêu ứng dụng lâm sàng diclofenac 23 BÀI TÁC DỤNG CỦA THUỐC MÊ TRÊN CHUỘT NHẮT Thuốc mê thuốc làm ý thức, cảm giác phản xạ mà không làm xáo trộn chức hô hấp tuần hoàn Gây mê chuột nhắt thuốc mê bay ether, chloroform Các thuốc có độ sơi thấp áp suất cao nên hấp thu dễ dàng qua đường hơ hấp Các thuốc mê hịa tan tốt chất béo, cộng thêm lưu lượng máu đến não cao nên chúng phân phối ưu tiên vào não nên khởi phát tác dụng nhanh Thuôc mê ức chế trục não tủy theo thứ tự từ vỏ não, nhân xám trung ương, tủy sống cuối hành tủy Quy trình hồi phục theo thứ tự ngược lại MỤC ĐÍCH - Nhận biết giai đoạn trình gây mê giai đoạn trình hồi phục thuốc mê ether - Chứng minh độ mê tăng theo nồng độ thuốc mê - So sánh tác dụng gây mê ether chloroform - Giải thích kết thí nghiệm bình C D với chloroform CHUẨN BỊ - Thuốc thử: Ether, Chloroform, dầu parafin dầu khoáng - Dụng cụ: bình thủy tinh lít có nắp đậy kín, pipet cc có chia độ, cốc 10 cc, đồng hồ bấm giây - Thú vật thử nghiệm: chuột nhắt trắng TIẾN HÀNH - Cho chuột vào bình thủy tinh, ghi nhận cử động đo nhịp thở lúc bình thường - Dùng pipet lấy ether theo thể tích yêu cầu bơm nhanh lên tờ giấy lọc lót sẵn bình, khơng để ether rơi lơng chuột - Đậy nhanh nắp bình, ghi thời điểm lúc cho thuốc - Ghi nhận tác dụng gây mê ether qua giai đoạn : Giai đoạn giảm đau Giai đoạn kích thích: tăng tần số chuột nhảy lên so với bình thường Giai đoạn bắt đầu mê: phản xạ thăng bằng, để chuột nằm nghiêng nằm ngửa để chân đưa lên trời chuột không tự lật lại Giai đoạn mê phẫu thuật: dùng pince kẹp đuôi chuột, chuột không phản ứng (tức cảm giác đau) Liệt hành tủy: nhịp thở giảm 100 nhịp/phút Đem chuột khỏi bình nhịp thở giảm 100 nhịp/phút Khơng nên để chuột bình 30 phút Nhịp thở tăng trở lại Có lại cảm giác đau: dùng pince kẹp đuôi chuột, đuôi phản ứng 24 Có lại vận động có ý thức - Thí nghiệm với ether: Bình A: 0.25 ml Bình B: 0.35 ml Bình C: 0.5 ml Bình D: 0.7 ml - Thí nghiệm với chloroform: làm thí nghiệm tương tự Bình a: 0.05 ml chloroform Bình b: 0.1 ml chloroform Bình c: 0.2 ml chloroform Bình d: 0.2 ml chloroform nhỏ vào cốc dầu parafin để sẵn bình d KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN Bình (2 L) Ether (ml) Chloroform (ml) Thởi điểm cho thuốc (t0) Kích thích Thời gia Bắt đầu mê (mất phản xạ thăng bằng) n từ Mê phẫu thuật (mất cảm giác đau) t0 Liệt hành tủy (giảm nhịp thở) đến Tăng nhịp thở trở lại lúc Có lại cảm giác đau bắt Có lại vận động ý thức đầu Chết (nếu có) A B C D a b c d 25 BÀI LIÊN QUAN GIỮA HOẠT TÍNH DƯỢC LỰC VÀ CẤU TRÚC HĨA HỌC MỤC ĐÍCH • • Chứng minh định luật Richardson Theo định luật Richardson lực làm ngủ rượu mạch thẳng bậc gia tăng theo số lượng ngun tử carbon cơng thức hóa học chúng • Năng lực gây ngủ rượu gia tăng đến mức tối đa với nguyên tử carbon từ từ giảm xuống đến khơng cịn hiệu lực với 14 carbon CHUẨN BỊ • Thuốc thử Dung dịch rượu metanol(CH3OH), etanol (CH3CH2OH), n-propalnol (CH3CH2OH), pentanol (alcol amylic) [( CH3)2- COH- CH2- CH3] • Dụng cụ - ống tiêm 1ml + kim số 26 - bình thủy tinh L - Cân lồng chuột - Đồng hồ - Bút lông (để đánh dấu chuột) • Súc vật: chuột nhắt có trọng lượng xấp sỉ nhau, lứa, phái tốt TIẾN HÀNH Cân chuột, đánh dấu, tiêm 0,1ml/ 10g chuột Đặt chuột vào bình thủy tinh riêng để theo dõi - Chuột A: Tiêm bắp rượu metanol - Chuột B: Tiêm bắp rượu etanol - Chuột C: Tiêm bắp rượu n- propanol - Chuột D: Tiêm bắp rượu pentanol Quan sát - Quan sát cử động chuột lúc bình thường - Quan sát ghi nhận thời điểm xảy phản ứng sau tiêm thuốc - Thất điều: chuột lảo đảo người say rượu 26 - Ngủ: dùng vật nhỏ gọn ( đầu bút chì, đầu kim chích) đăt trước mõm chuột (khơng đụng râu) Trong vịng giây chuột khơng ngửi vật xem chuột ngủ - Mất phản xạ co rút chân: Dùng đầu bút chì ( hay vật nhỏ gọn) kéo chân sau chuột ( co) cho duỗi thẳng Nếu vòng giây chuột khơng tự rút chân lại xem phản xạ co rút chân - Mất phản xạ thăng bằng: Đặt chuột vị trí nằm ngửa, chân đưa lên trời, vòng giây chuột khơng tự rút chân lại xem phản xạ co rút chân - Mất phản xạ đau: Dùng thuốc kim chích vào chuột hay dùng pence kẹp đuôi chuột đuôi không phản ứng xem phản xạ đau - Hồi phục hoàn tồn: Thời gian trở vị trí ban đầu trước tiêm thuốc (T2) Xác định tốc độ tác động - Tiềm thời thời gian từ cho thuốc vào thể (T0) đến chuột bắt đâu có phản ứng bất thường, tức bắt đầu khởi phát tác động (T1) Thí dụ bình thường chuột nằm yên sau cho thuốc chuột tăng hoạt động thời điểm T1 Vậy tiềm thời: T1- T0 Đó thời gian tác động thuốc cịn tiềm ẩn chưa thể - Tốc độ tác động tỉ lệ nghịch với tiềm thời Tức tiềm thời dài tốc độ tác động chậm • Xác định cường độ tác động: cường độ tác động tăng dần từ thất điều ngủ phản xạ co rút chân phản xạ thăng phản xạ đau • Xác định thời gian tác động = thời điểm hồi phục hoàn toàn (T2) – Thời điểm bắt đầu khởi phát tác động (T1) • So sánh chuột A, B, C, D dựa vào tiềm thời, cường độ tác động, thời gian tác động KÉT QUẢ VÀ KẾT LUẬN • Kết Chuột A B C D Phái Trọng lượng (g) Thuốc sử dụng Thể tích tiêm (ml) Đường sử dụng Thời điểm tiêm thuốc (T0) Thất điều 27 Thời gian từ Ngủ T0 đến lúc bắt Mất phản xạ co đầu rút chân Mất phản xạ thăng Mất phản xạ đau • Bảng so sánh kết Chuột A Chuột B Chuột C Chuột D Tốc độ tác động Cường độ tác động Thời gian tác động Kết thí nghiệm có nghiệm định luật Richardson khơng? Nếu khơng nghiệm giải thích lý 28 BÀI TÁC DỤNG CỦA THUỐC TRÊN ĐỒNG TỬ MỤC ĐÍCH - Chứng minh tác dụng atropin physostigmin đồng tử - Chứng minh tính đối kháng thuốc CHUẨN BỊ - Súc vật: thỏ con, khỏe mạnh, cân nặng từ 1,8 - ,2 kg - Hóa chất: dung dịch NaCl 0,9%, atropin sulfat 1%, physostigmin salicylat (eserin) 1% - Dụng cụ: hộp nhốt thỏ TIẾN HÀNH - Nhốt thỏ vào hộp Quan sát độ mở đồng tử mắt thỏ - Thử thuốc lần 1: + Thỏ 1: nhỏ vào mắt phải giọt dung dịch NaCl 0,9%, mắt trái giọt dung dịch atropin sulfat 1% + Thỏ 2: nhỏ vào mắt phải giọt dung dịch NaCl 0,9%, mắt trái giọt dung dịch physostygmin 1% Quan sát thay đổi đồng tử mắt, so sánh độ mở đồng tử mắt trái thỏ với thỏ so sánh với mắt nhỏ dung dịch NaCl 0,9% - Thử chéo: + Thỏ 1: nhỏ vào mắt trái giọt physostigmin 1% + Thỏ 2: nhỏ vào mắt trái giọt atropin sulfat 1% Quan sát thay đổi đồng tử mắt, so sánh với độ mở đồng tử mắt thử thuốc lần so sánh với mắt nhỏ dung dịch NaCl 0,9% KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN Ghi kết vào bảng rút kết luận tác dụng thuốc đồng tử Bảng kết Thử thuốc lần Thỏ Thử chéo Đồng tử Mắt phải: NaCl 0,9% Mắt trái: atropin 1% Thỏ Đồng tử physostigmin 1% Mắt phải: NaCl 0,9% Mắt trái: physostigmin 1% atropin 1% 29 BÀI 10 TÁC DỤNG CỦA THUỐC TRÊN Q TRÌNH ĐƠNG MÁU Mục đích - Chứng minh tác dụng heparin thời gian đông máu - Chứng minh tác dụng đối lập heparin protamin thời gian đông máu Chuẩn bị - Súc vật: thỏ con, khỏe mạnh, cân nặng từ 1,8 - ,2 kg - Hóa chất: dung dịch heparin 100 I.U./ml, protamin sulfat 1% - Dụng cụ: hộp nhốt thỏ, bơm kim tiêm, lam kính, đồng hồ bấm giây Cách tiến hành - Nhốt thỏ vào hộp, dùng kim chích vào tĩnh mạch tai thỏ hứng giọt máu lam kính, đường kính giọt máu vào khoảng mm Theo dõi thời gian đông máu bình thường, khoảng thời gian tính từ lấy giọt máu lam kính đến giọt máu đơng lại hoàn toàn Ghi lại kết - Tiêm heparin vào tĩnh mạch tai thỏ với liều 100 đơn vị/kg thể trọng Sau - - 10 phút, xác định lại thời gian đông máu làm - Tiếp tục tiêm vào tĩnh mạch tai thỏ dung dịch protamin sulfat với liều - ml/kg thể trọng Chờ sau - 10 phút, xác định lại thời gian đông máu Cách tiến hành - So sánh thời gian đông máu lần tiêm thuốc, giải thích, rút kết luận nêu ý nghĩa thực tế thí nghiệm 30 ... ngày thực tập sau QUY ĐỊNH CỦA BUỔI THỰC TẬP Sinh viên phải: - Đọc kỹ thực tập trước vào thực tập - Học lý thuyết nguyên tắc liên quan đến thực tập - Thực quy định cho sinh viên phòng thực tập. .. phịng thực tập trật tự, vệ sinh, dụng cụ cách thức xử lý thú sau thực tập Phải tham dự đầy đủ buổi thực hành Không gian lận học tập có nhiệm vụ báo cáo cho mơn có tượng khơng trung thực học tập, ... buổi thực tập bắt đầu 15 phút, sinh viên đến trễ thực tập bù vào buổi thực tập khác có đơn xin phép với sinh viên vắng mặt có lý Để nắm vững thực tập, sinh viên kiểm tra vào đầu buổi thực tập