Nghiên cứu trình bày phương pháp xác định aflatoxin M1 trong sữa bò tươi và ứng dụng phân tích aflatoxin trong 20 mẫu sữa bò thô tại Củ Chi, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam. Mẫu được xử lý bằng kỹ thuật chiết lỏng lỏng dùng ethyl acetate (8 mL) và aflatoxin M1 được phân tích bằng phương pháp LC-MS/MS.
Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 19 ĐỊNH LƯỢNG AFLATOXIN M1 TRONG SỮA THÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP LC-MS/MS Nguyễn Thị Thu1,2*, Nguyễn Thị Yến1, Trần Thị Kiều Anh2 Phân Viện Chăn nuôi Nam Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM * Nguyễn Thị Thu, Email: thunguyen102287@gmail.com TÓM TẮT Nghiên cứu trình bày phương pháp xác định aflatoxin M1 sữa bị tươi ứng dụng phân tích aflatoxin 20 mẫu sữa bị thơ Củ Chi, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam Mẫu xử lý kỹ thuật chiết lỏng lỏng dùng ethyl acetate (8 mL) aflatoxin M1 phân tích phương pháp LC-MS/MS Giới hạn phát (LOD) phương pháp 0,01 μg/L giới hạn định lượng (LOQ) 0,025 μg/L Độ thu hồi trung bình phương pháp từ 82,6 % - 98,9 %, độ lệch chuẩn tương đối (RSD) từ 2,3 % - 7,3 % Khoảng tuyến tính rộng đường chuẩn từ 0,025 μg/L - μg/L với hệ số tương quan R2 = 0,998 Phương pháp phù hợp để phân tích hàm lượng vết aflatoxin M1 sữa theo qui định châu Âu quy trình đơn giản, nhanh, tốn cho độ xác Từ khóa: LC-MS/MS, sữa tươi, chiết lỏng-lỏng, Aflatoxin M1 ABSTRACT A validated analytical method for the determination of aflatoxine M1 in raw milk was described and applied to 20 raw milk samples in Cu chi, Ho Chi Minh city, Vietnam Sample preparation based on liquid – liquid extraction using ethyl acetate (8 mL) and aflatoxine M1 was analyzed by LC-MS/MS Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) of the method were 0.01 µg/L and 0.025 µg/L, respectively Average revoveries of aflatoxine M1 in milk at three spiked concentrations from 0.025 µg/L to µg/L ranged from 82.6 % to 98.9% with the relative standard deviation (%RSD) were from 2.3% to 7.3% A wide range of linearity of standard curve was obtained from 0.025 µg/L – µg/L with R2 = 0.998 The reliable, rapid, easy and cheap method permitted to determine aflatoxin M1 in raw milk, in compliance with European Regulation (No 165/2010) Keywords: LC-MS/MS, raw milk, liquid – liquid extraction, Aflatoxin M1 Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 20 TỔNG QUAN Vấn đề an toàn thực phẩm thu hút nhiều quan tâm xã hội Ngày có nhiều vụ ngộ độc ăn phải thức ăn nhiễm độc Bên cạnh chất độc mà người cố ý cho vào thực phẩm cịn có độc tố tự nhiên sản sinh bảo quản chế biến độc tố nấm mốc aflatoxin Đối với động vật, tác hại aflatoxin gây nên bệnh móng hay khớp bị sữa, giảm tăng trọng hay giảm khả sinh sản (Whitlow Hagler, 2010) Đối với người, bệnh nhiễm aflatoxin cấp tính biểu chủ yếu suy chức gan cấp, xơ gan hoại tử nhu mô gan Một loạt nghiên cứu cho thấy tỷ lệ mắc ung thư gan nguyên phát tăng vùng có tỷ lệ phơi nhiễm cao với aflatoxin, chế tác động aflatoxin gây ung thư gan người cịn nhiều tranh cãi Ngồi ra, aflatoxin cịn chứng minh có ảnh hưởng tới còi cọc, phát triển thai nhi trẻ em (Gong YY ctv, 2004) Aflatoxin độc tố tự nhiên chủ yếu sản xuất hai loại nấm mốc: Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Trong đó, Aspergillus flavus phổ biến rộng rãi tự nhiên thường tìm thấy loại ngũ cốc phát triển điều kiện nóng ẩm Có 13 loại aflatoxin khác hình thành tự nhiên với aflatoxin B1 coi độc Sau bò ăn thức ăn nhiễm aflatoxin B1 vào khoảng 0,3 – 6,2 % tiết qua sữa dạng aflatoxin M1 (AFM1) AFM1 phát sau bò ăn aflatoxin B1 đạt hàm lượng cao sau 23 ngày, không phát sau ngày không ăn thức ăn nhiễm aflatoxin [Bakirci, 2001 Hamid, 2011) Aflatoxin không bị phân hủy trình xử lý (thanh trùng, đun nấu) bảo quản sữa hay trình chế biến sản phẩm từ sữa (Galvano F, 1996) AFM1 có cơng thức phân tử C17H12O7, nhiệt độ nóng chảy 299 oC, nhiệt độ sơi 644 oC, tan nước dễ tan dung mơi hữu Hình Cơng thức cấu tạo AFM1 Giới hạn tối đa cho phép (MRL) AFM1 sữa 0,5 μg/L (0,5 ppb) theo tiêu chuẩn Việt Nam (theo Quy Chuẩn Quốc Gia giới hạn ô nhiễm độc tố vi nấm thực phẩm- QCVN 8-1:2011/BYT) 0,05 μg/L theo tiêu chuẩn Châu Âu (No 165/2010) Rất nhiều phương pháp phân tích phát triển để phân tích AFM1 sữa sản phẩm từ sữa AFM1 sữa thường chiết lỏng lỏng (LLE) với dung môi hữu (A Biancardi ctv, 2013; Nicolás Michlig ctv, 2015), chiết pha rắn (SPE) dùng cột C8 (Manetta, 2005) hay cột miễn dịch (Iha ctv, 2011) phân tích phương pháp sắc ký lỏng (LC) với đầu dị huỳnh quang (có tạo dẫn xuất) (Iha ctv, 2011) hay đầu dò khối phổ (MS) (Chen WL ctv, 2011) Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 Phương pháp LC – tạo dẫn xuất trước hay sau cột – đầu dò huỳnh quang kết hợp kỹ thuật chiết SPE nhạy với giới hạn phát (LOD) hay giới hạn định lượng (LOQ) nhỏ (vài ng/kg) (Iha ctv, 2011) Tuy nhiên, nhược điểm phương pháp phải tạo dẫn xuất để tăng độ phát quang chất phân tích.Việc xác định hợp chất dựa vào thời gian lưu nên mẫu phức tạp dễ tạo mẫu dương tính giả có hợp chất mẫu trùng thời gian lưu với chất cần phân tích LC-MS/MS định danh định lượng dựa mảnh ion phân tử (cùng với thời gian lưu) nên có khả định danh cao LOD khoảng 0,005 – 0,02 µg/kg đáp ứng u cầu phân tích độc tố (Luca Campone ctv, 2013) Hầu hết tài liệu tham khảo trình bày hiệu suất thu hồi phương pháp ≥ 70% với độ lặp lại % RSD < 20% Ưu điểm chiết pha rắn sử dụng dung mơi có khả tự động hóa chi phí cho cột cao thời gian xử lý mẫu lâu (Manetta, 2005) Phương pháp chiết dùng cột miễn dịch có độ chọn lọc cao dùng kết hợp phân tích với chất khác, góp phần làm chi phí cho cột cao Ngồi việc dùng cột miễn dịch có nhược điểm mẫu phức tạp tạp chất mẫu cạnh tranh với chất cần phân tích để liên kết với kháng nguyên làm ảnh hưởng đến kết phân tích (A Biancardi ctv, 2013) Chloroform, methanol, acetone hay ethyl acetate sử dụng để chiết aflatoxin sữa nước (Stubblefield, 1979) Năm 2011, HaoWang đồng nghiệp dùng acetonitrile để chiết AFM1 từ sữa Phương pháp 21 có LOD 0,005 µg/kg, LOQ 0,02 µg/kg với hiệu suất thu hồi trung bình 88,8 -100,6 % % RSD < 15% (Hao Wang ctv, 2011) Năm 2013, Luca Campone đồng nghiệp dùng phương pháp chiết lỏng – lỏng với thể tích nhỏ để chiết AFM1 từ sữa với acetonitrile làm dịch chiết, kết qủa cho phương pháp chiết đơn giản, chi phí thấp, dễ vận hành tiện lợi mặt thời gian (Luca Campone ctv, 2013) Cũng năm 2013, Parma, Italy, A Biancardi cộng dùng ethyl acetate để chiết AFM1 từ sữa với độ thu hồi trung bình 95% (A Biancardi ctv, 2013) Gần tháng 10/2015, Nicolás Michlig đồng nghiệp dùng phương pháp QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe - nguyên lý chiết lỏng – lỏng có thêm bước làm sạch) để chiết AFM1 sữa Phương pháp cho hiệu suất thu hồi 70–95 %, % RSD < 15 %, LOD 0,002 μg/ L LOQ 0,007 μg/ L) (Nicolás Michlig ctv, 2015) Muối cho vào trình chiết tách (A Biancardi ctv, 2013; Nicolás Michlig ctv, 2015; Luca Campone ctv, 2013) để tăng khả chiết tách làm tăng độ mạnh ion dung dịch Chiết lỏng lỏng thể tích dung mơi sử dụng nhỏ xem phương pháp rẻ tiền đơn giản Trong tất dung mơi trình bày ethyl acetate xem thân thiện với môi trường giá thành rẻ so với dung mơi cịn lại Trong nghiên cứu này, chúng nghiên cứu khảo sát định lượng AFM1 sữa tươi phương pháp LC-MS/MS dùng kỹ thuật chiết lỏng lỏng với ethyl acetate Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 22 THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP Hóa chất Chất chuẩn: Aflatoxin M1 lọ mL 10 ppm (Sigma-Aldrich Mỹ) Hóa chất: acetonitrile (Barker), methanol (Merck), nước cất lần, khử ion, lọc qua giấy Quy trình xử lý mẫu Quy trình xử lý mẫu tham khảo tác giả Biancardi (Biancardi ctv, 2013) có hiệu chỉnh cho phù hợp với điều kiện có phịng thí nghiệm Quy trình sau hiệu chỉnh sau: Lắc sữa sau rã đông, hút mL sữa cho vào ống ly tâm nhỏ Thêm 0,4 g muối NaCl (khoảng 10% mẫu) mL ethyl acetate vào ống ly tâm chứa mẫu Hỗn hợp lọc 0.45μm, acid formic (HPLC grade - Merck), acid Acetic (HPLC grade – Merck), muối NaCl (Merck) lắc 10 phút ly tâm 10 phút (4600 vòng /phút) Hút ½ thể tích dung mơi phía (4 mL) vào ống nghiệm thổi khơ khí N2 400C Phần cịn lại sau thổi khơ dung mơi ống nghiệm hịa tan lại mL dung dịch ACN:H2O 0,1% CH3COOH (10:90) sau vortex phút Dung dịch lọc vào lọ nhỏ để định lượng LC-MS/MS LC-MS/MS Hệ thống LC-MS/MS dùng nghiên cứu đầu dò khối phổ tứ cực 6430 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), phận sắc ký lỏng 1200 (Agilent) Cột sử dụng cột Luna 5µ C18 ( Phenomenex) (150 x mm) với cột bảo vệ KJ0-4282 (Phenomenex) Chương trình pha động sử dụng chương trình pha động thay đổi (bảng 1) với kênh A CH3CN 0,1% acid acetic kênh B H2O 0,1% acid acetic Bảng Chương trình gradient dung mơi Thời gian (phút) Tốc độ dòng (mL/phút) %A %B 0,4 30 70 0,4 30 70 1,5 0,4 80 20 0,4 80 20 0,4 30 70 0,4 30 70 Tổng thời gian chạy phút Tốc độ dòng pha động mL/phút Nhiệt độ cột phân tích 400C Thể tích tiêm mẫu 40 µl Định lượng MRM mode (+ESI), ion mẹ 329.50, ion con: 329.50→273.30 (ion định lượng) 329.50→259.30 (ion định tính) Thơng số đầu dị: capillary 4000V, nhiệt độ khí 3250C, tốc độ dịng khí L/phút, nebulizer 35 psi, dwell time 200 ms, fragmentor 100 V, collision energy 20 V Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 23 Khảo sát khoảng tuyến tính đường chuẩn ảnh hưởng mẫu Nền mẫu thường ảnh hưởng làm giảm tín hiệu chuẩn nên để kiểm tra mức độ ảnh hưởng đường chuẩn giống xây dựng: dung môi mẫu (mẫu sữa tươi khơng phát AFM1) Đường chuẩn gồm điểm có nồng độ 0,025 µg/L - µg/L pha từ chuẩn aflatoxin M110 µg/L (Sigma-Aldrich Mỹ) Thể tích chuẩn pha mẫu tương đương thể tích chuẩn pha dung mơi để đảm bảo xác Đánh giá phương pháp Phương pháp đánh giá thông số: độ tuyến tính, giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) độ xác Khoảng tuyến tính đánh giá thơng qua đường chuẩn từ 0,025 μg/L – μg/L pháp đánh giá tỉ lệ tín hiệu chuẩn đường (S/N = LOD S/N = 10 LOQ) LOD LOQ phương pháp xác định cách phân tích lần mẫu trắng (sữa tươi khơng phát AFM1) có thêm chuẩn AFM1 nồng độ 0,025 μg/L LOD LOQ phương Độ xác xác định cách phân tích hiệu suất thu hồi lặp lại lần mẫu trắng thêm chuẩn AFM1 thêm vào mức nồng độ 0,05 ng/ml, 0,5 μg/L μg/L Độ xác Phân tích số mẫu thực Phương pháp sử dụng để phân tích 20 mẫu sữa thơ lấy khu vực Củ Chi, thành phố Hồ Chí Minh vào khoảng thời gian từ tháng 12/2015 – 2/2016 Khu vực lấy mẫu chia làm nhóm xã có lượng bị sữa nhiều huyện Củ Chi (theo số liệu tháng 10/2012): Tân Thạnh Đông (tổng đàn: 16.850 con) 10 mẫu, Tân Thạnh Tây (tổng đàn: 4.236 con) 5mẫu , Trung An (tổng đàn: 3.905con) mẫu KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Xử lý mẫu Mục tiêu nghiên cứu phát triển phương pháp phân tích nhanh, chi phí thấp phù hợp để phân tích hàm lượng vết Một lượng muối 10% (so với khối lượng mẫu) cho vào trình xử lý mẫu để làm tăng hiệu trình chiết tách aflatoxin M1 từ sữa (A Biancardi ctv, 2013; Nicolás Michlig ctv, 2015; Luca Campone ctv, 2013) Muối chất điện ly mạnh nên cho vào trình chiết tách làm tăng độ mạnh ion giúp chất phân tích di chyển vào pha hữu tốt Dung môi dùng để chiết mẫu ethyl acetate có độ phân cực vừa hịa tan chất phân cực vừa nên khơng cần bước làm SPE để loại bỏ hợp chất phân cực mạnh phương pháp QuEChERS Hơn nữa, ethyl acetate xem thân thiện với môi trường, giá thành rẻ so với loại dung mơi khác Thí nghiệm ban đầu tiến hành theo tài liệu tham khảo Tuy nhiên, kết không mong muốn sữa bị đông tụ Rất nhiều thí nghiệm sau tiến hành với thay đổi tỉ lệ thể tích dung mơi so với thể tích mẫu kết thu khả quan (xin xem phần đánh giá phương pháp) Khoảng tuyến tính đường chuẩn ảnh hưởng mẫu Hình trình bày đường chuẩn gồm điểm với nồng độ 0,025 μg/L; 0,05 µg/L; 0,5 µg/L; µg/L 2,0 μg/L dung môi mẫu Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 24 Hình 2: Khảo sát ảnh hưởng mẫu lên đường chuẩn Hình cho thấy khơng có khác biệt đáng đáng kể đường chuẩn dung môi mẫu Đường chuẩn tuyến Đánh giá phương pháp Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) Bảng trình bày kết phân tích lặp lại lần tính khoảng nồng độ khảo sát với hệ số tương quan R2 = 0,999 0,998 tương ứng dung môi mẫu mẫu trắng (sữa tươi khơng phát AFM1) có thêm chuẩn AFM1 nồng độ 0,025 μg/L Bảng 2: Độ thu hồi AFM1 sữa thô nồng độ 0,025 μg/L STT Độ thu hồi RSD trung bình , (%) (%) S/N Ion định lượng/ion định tính Kết thu (μg/L) Độ thu hồi, (%) 0,02438 97,55 11,2 2,32 0,02393 95,74 12,6 2,40 0,02195 87,79 10,3 2,37 0,02293 91,73 10 2,87 0,02478 99,12 17,1 2,62 0,02456 98,24 14 2,34 0,02378 95,11 11,3 2,32 95,04 4,24 Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 Từ kết tỉ lệ S/N, LOD phương pháp tính khoảng 0,01 μg/L LOQ 0,025 μg/L Mức LOD đáp ứng yêu cầu FAO đánh giá phương pháp dựa vào MRL (LOD = 1/5 MRL, MRL 0,05 μg/L – theo tiêu chuẩn châu Âu, LOD = 0,01 μg/L phù hợp) Độ xác Độ xác xác định cách phân tích lặp lại lần mẫu trắng thêm chuẩn 25 mức nồng độ 0,05 ng/ml, 0,5 μg/L μg/L Độ lặp lại tốt nồng độ (% RSD 6,08; 5,78; 4,60 nồng độ 0,05 ppb, 0,5 ppb ppb) Độ thu hồi thu cao (từ 82% - 96%) đáp ứng qui định Châu Âu Ở nồng độ lớn sai lệch lần lặp lại thơng qua %RSD thấp nồng độ lớn Phân tích số mẫu thực Hình trình bày sắc ký đồ AFM1 chuẩn mẫu sữa dương tính AFM1 Hình 4a: Sắc ký đồ LC-MS/MS AFM1 mẫu dương tính Hình 4b Sắc ký đồ LC-MS/MS AFM1 chuẩn Kết phân tích 20 mẫu sữa thơ Củ chi trình bày bảng Bảng : Kết phân tích AFM1 số mẫu thực Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 Xã 26 Hàm lượng (μg/L) STT KPH KPH KPH < LOQ Tân Thạnh Đông < LOQ KPH < LOQ < LOQ KPH 10 < LOQ < LOQ < LOQ Tân Thạnh Tây 0,044 < LOQ Trung An < LOQ < LOQ 0,034 0,064 < LOQ < LOQ Kết có 15% mẫu có phát AFM1 (3/20 mẫu) với nồng độ từ 0,034 μg/L – 0,064 μg/L Khơng có mẫu vượt q giới hạn cho phép theo tiêu chuẩn Việt Nam (MRL = 0,5 μg/L) có mẫu vượt giới hạn cho phép KẾT LUẬN Đề tài nghiên cứu phân tích aflatoxin M1 sữa thô LC-MS/MS kết hợp với kỹ thuật chiết lỏng lỏng dung môi thân thiện với theo tiêu chuẩn Châu Âu (MRL = 0,05 μg/L) Kết phân tích bước đầu cho thấy AFM1 có diện sữa thô Củ Chi với nồng độ thấp (vẫn nằm giới hạn cho phép theo tiêu chuẩn Việt nam) môi trường ethyl acetate (8 mL) có thêm lượng 10% muối để hỗ trợ trình chiết Phương pháp xử lý mẫu đơn giản, nhanh Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 chóng hiệu việc phân tích AFM1 sữa thơ hàm lượng vết Phương pháp đánh giá với LOD = 0,01 μg/L, LOQ = 0,025 μg/L, độ thu hồi trung bình 88% % RSD nồng độ khảo sát nhỏ Phương pháp nghiên cứu ứng dụng phân tích 20 mẫu sữa bị thơ lấy 20 hộ gia đình khác Củ chi mùa 27 khơ khoảng từ tháng 12/2015 đến 02/2016 Kết phân tích 3/20 mẫu phát AFM1 với nồng độ giới hạn cho phép theo tiêu chuẩn Việt nam Aflatoxin thức ăn chăn ni thay đổi nhiều vào thay đổi thời tiết, khí hậu nóng ẩm vào mùa mưa Nghiên cứu tiến hành phân tích hàm lượng AFM1 sữa thơ vào mùa mưa TÀI LIỆU THAM KHẢO Biancardi.A ,Piro.R, Dall’asta.C & Galaverna.G (2013) A simple and reliable liquid chromatographytandem mass spectrometry method for the determination of aflatoxin M1 in milk, Food Additives & Contaminants: Part A,30:2, 381-388 Bakirci, I (2001) A study on the occurrence of aflatoxin M1 in milk and milk products produced in Van province of Turkey Food Control, 12-47 Chen WL, Hsu TF, Chen CY (2011) J AOAC Int 94(3):872–877 Galvano F, Galofaro V and Galvano G, 1996 Occurrence and stability of aflatoxin M1 in milk and milk products: a worldwide review Journal of Food Protection 1996; 59: 1079-1090 Gong YY, Hounsa A, Egal S, Turner PC and Sutcliffe AE, 2004 Postweaning exposure to aflatoxin results to impaired child growth: a longitudinal study In Bennin, West Africa Academic journal article from Environmental Health Perspectives, Vol 112, No 13 Hamid Mohammadi, 2011 A Review of Aflatoxin M1, Milk, and Milk Products Aflatoxins - Biochemistry and Molecular Biology ISBN 978-953-307-395-8 Hao Wang, Xiang-Juan Zhou*, Yan-Qin Liu, Hong-Mei Yang, and Qi-Lei Guo( 2011).Simultaneous Determination of Chloramphenicol and Aflatoxin M1Residues in Milk by Triple Quadrupole Liquid Chromatography−Tandem Mass Spectrometry J Agric Food Chem., 2011, 59 (8), pp 3532–3538 Iha M H, Barbosa C.B ,Fávaro R M D, Trucksess M W, 2011 Chromatographic method for aflatoxin M1 in cheese, yoghurt and dairy drinks Journal of AOAC International, 94 (5) (2011) Whitlow L W and Hagler.W M , Jr, 2010 Mycotixin Effects in Dairy Cattle 2010 Penn State Dairy Cattle Nutrition Workshop 10 Luca Campone & Anna Lisa Piccinelli & Rita Celano & Mariateresa Russo & Luca Rastrelli 2013 Rapid analysis of aflatoxin M1 in milk using dispersive liquid–liquid microextraction coupled with ultrahigh pressure liquid chromatography tandem mass spectrometry Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2013 11 Manetta, A C., Giuseppe, L D., Giammarco, M., Fusaro, I., Simonella, A., Gramenzi, A., & Formigoni, A (2005) High-performance liquid chromatography with postcolumn derivatisation and fluorescence detection for sensitive determination of aflatoxin M1 in milk and cheese Journal of Chromatography A, Vol.1083, No.1, pp 219-222 12 Nicolás Michlig, María Rosa Repetti, Carolina Chiericatti, Silvia R García, Mónica Gaggiotti, Juan C Basílico, Horacio R Beldoménico (2015) Multiclass Compatible Sample Preparation for UHPLC–MS/MS Determination of Aflatoxin M1 in Raw Milk Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2015 13 Stubblefield, R D (1979) The rapid determination of aflatoxin M1 in dairy products Journal of American Oil and Chemical Society, Vol.56, pp 800-802 ... định lượng AFM1 sữa tươi phương pháp LC-MS/MS dùng kỹ thuật chiết lỏng lỏng với ethyl acetate Bản tin Khoa học Trẻ số 2(1),2016 22 THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP Hóa chất Chất chuẩn: Aflatoxin M1. .. nhiễm aflatoxin B1 vào khoảng 0,3 – 6,2 % tiết qua sữa dạng aflatoxin M1 (AFM1) AFM1 phát sau bò ăn aflatoxin B1 đạt hàm lượng cao sau 23 ngày, không phát sau ngày không ăn thức ăn nhiễm aflatoxin. .. trắng (sữa tươi khơng phát AFM1) có thêm chuẩn AFM1 nồng độ 0,025 μg/L Bảng 2: Độ thu hồi AFM1 sữa thô nồng độ 0,025 μg/L STT Độ thu hồi RSD trung bình , (%) (%) S/N Ion định lượng/ ion định tính