Phân tích một số acid amin bằng sắc ký lỏng tương tác thân nước

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGÂN BÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ ACID AMIN BẰNG SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGÂN BÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ ACID AMIN BẰNG SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 9720210 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận án Vũ Ngân Bình i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu thực luận án, hướng dẫn PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà, giảng viên Bộ mơn Hố phân tích - Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội tận tình hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ, truyền dạy cho kiến thức, kinh nghiệm quý báu ln động viên, chia sẻ để tơi hồn thành luận án Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học phòng ban trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tham gia học tập hoàn thành luận án thời hạn Viện Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia tạo điều kiện cho sử dụng thiết bị để hồn thành luận án thời hạn Các thầy, cô, anh, chị, em Bộ mơn Hóa phân tích - Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, động viên suốt trình làm việc, học tập nghiên cứu khoa học Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè quan tâm, động viên chia sẻ với suốt trình học tập thực luận án Tác giả luận án Vũ Ngân Bình ii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ vi ix xi Chương TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC 1.1.1 Đặc điểm pha 1.1.2 Cơ chế tách yếu tố ảnh hưởng 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁU TRÚC, SINH TỔNG HỢP, THOÁI HOÁ 3 VÀ VAI TRÒ CỦA ACID AMIN TRONG CƠ THỂ 1.2.1 Cấu trúc acid amin 1.2.2 Sinh tổng hợp thối hố acid amin 1.2.3 Vai trị acid amin thể 1.3 BỆNH DO RỐI LOẠN CHUYỂN HOÁ ACID AMIN THƠM 1.3.1 Phenylketon niệu (PKU) 1.3.2 Tăng phenylalanin huyết không PKU (HPA) 1.3.3 Tyrosin huyết (TYR) 1.4 TỔNG QUAN VỀ PHÂN TÍCH ACID AMIN 1.4.1 Tổng quan phân tích acid amin chế phẩm 1.4.2 Tổng quan phân tích acid amin dịch sinh học Chương NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.3 TRANG THIẾT BỊ 2.4 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng tới thời gian lưu số acid amin HILIC 2.4.2 Xây dựng phương pháp phân tích chế phẩm chứa acid amin HILIC 2.4.3 Xây dựng phương pháp phân tích phenylalanin, tryptophan tyrosin huyết tương HILIC-MS 16 16 18 20 21 21 22 23 25 25 29 iii 36 36 37 38 39 39 40 44 2.4.4 Thẩm định phương pháp phân tích chế phẩm 2.4.5 Thẩm định phương pháp phân tích huyết tương 2.4.6 Một số tính toán thống kê Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 SƠ BỘ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ ĐẾN SỰ LƯU GIỮ CỦA ACID AMIN 3.2 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM CHỨA ACID AMIN BẰNG HILIC 3.2.1 Phân tích đồng thời acid amin thơm chế phẩm tiêm truyền 3.2.2 Xây dựng phương pháp định lượng acid amin hoạt chất khác chế phẩm 46 47 48 50 50 58 58 66 3.3 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ ACID AMIN THƠM TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG HILIC KẾT NỐI KHỐI PHỔ 3.3.1 Xây dựng phương pháp 3.3.2 Thẩm định phương pháp Chương BÀN LUẬN 4.1 BÀN LUẬN VỀ PHÂN TÍCH ACID AMIN TRONG CHẾ PHẨM BẰNG HILIC-DAD 4.1.1 Chế phẩm chứa đa acid amin 4.1.2 Chế phẩm chứa acid amin thành phần khác 99 99 108 118 4.1.3 Bàn luận ưu nhược điểm phương pháp HILIC-DAD 123 4.2 BÀN LUẬN VỀ PHÂN TÍCH ACID AMIN TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG HILIC-MS/MS 4.2.1 Bàn luận lựa chọn 4.2.2 Bàn luận ưu nhược điểm phương pháp HILIC-MS/MS 4.3 BÀN LUẬN VỀ CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ LƯU GIỮ, HÌNH DÁNG PIC CỦA ACID AMIN TRONG HILIC 4.3.1 Ảnh hưởng pha tĩnh 4.3.2 Ảnh hưởng pha động 4.3.3 Ảnh hưởng dung môi pha mẫu 4.4 MỘT SỐ ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT iv 118 118 119 124 124 125 126 126 129 135 136 137 KẾT LUẬN ĐỀ XUẤT DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC 137 137 PL PL1 PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PL3 PL38 PL61 PL73 PHỤ LỤC PL124 v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt AA Amino acid Acid amin ACN Acetonitrile Acetonitril AG Ammonium glycyrrhizinate Amoni glycyrrhizinat Ala Alanine Alanin APCI Atmospheric Pressure Chemical Ionization Ion hóa áp suất khí AQC 6-aminoquinolyl-Nhydroxysuccinimidyl carbamate 6-aminoquinolyl-Nhydroxysuccinimidyl carbamat Arg Arginine Arginin Asn Asparagine Asparagin Asp Aspatic acid Acid aspatic BEH Ethylene Bridged Hybrids Cầu liên kết etylen BSA Bovine Serum Albumin Albumin huyết bò BSTFA Heptaflorobutanol N,OBis(trimethylsilyl) trifluoroacetamide Heptaflorobutanol N,OBis(trimethylsilyl) trifluoroacetamid CE Capillary electrophoresis Điện di mao quản CPT Chất phân tích Cys Cysteine Cystein DAD Diod Array Detector Detector mảng diod DEA Diethylamine Diethylamin DMF Dimethyl formamide Dimethyl formamid ESI Electrospray Ionization Ion hóa phun điện tử FMOC 9-fluorenylmethyl chloroformate 9-fluorenylmethyl cloroformat GC Gas Chromatography Sắc ký khí Gln Glutamine Glutamin Glu Glutamic acid Acid glutamic Gly Glycine Glycin vi HFBA Heptafluorobutyric acid Acid heptaflorobutyric HPA Non PKU hyperphenylalaninemia Tăng phenylalanin huyết không PKU HILIC Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography Sắc ký lỏng tương tác thân nước His Histidine Histidin HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HQC High quality control Dung dịch kiểm tra nồng độ cao HSA Human Serum Albumin Albumin huyết người HT Huyết tương IEC Ion Exchange Chromatography Sắc ký trao đổi ion Ile Isoleucine Isoleucin Leu Leucine Leucin LLOQ Lower Limit of Quantitation Giới giạn định lượng LOD Limit of Detection Giới hạn phát LQC Low quality control Dung dịch kiểm tra nồng độ thấp Lys Lysine Lysin MeOH Methanol Methanol Met Methionine Methionin MQC Medium quality control Dung dịch kiểm tra nồng độ MS Mass Spectrometry Khối phổ MSA Methane sulfonic acid Acid metan sulfonic NBD-F 4-fluoro-7-nitro-2,1,3benzoxadiazole 4-floro-7-nitro-2,1,3benzoxadiazol NPLC Normal Phase Liquid Chromatography Sắc ký lỏng pha thuận OPA o-phthalaldehyde o-phthalaldehyd PĐ Pha động PITC Phenylisothiocyanate phenylisothiocyanat Phe Phenylalanine Phenylalanin vii PKU Phenylketonuria Phenylketon niệu Pro Proline Prolin PT Pha tĩnh RLCH Rối loạn chuyển hoá RPLC Reversed Phase Liquid Chromatography Sắc ký lỏng pha đảo Ser Serine Serin SSA 5-sulfosalicylic acid Acid 5-sulfosalicylic TCA Trichloroacetic acid Acid tricloroacetic TFA Trifluoroacetic acid Acid trifloroacetic TLTK Tài liệu tham khảo Thr Threonine Threonin TMCS Trimethylclorosilane trimethylclorosilan Trp Tryptophan Tryptophan Tyr Tyrosine Tyrosin TYR Tyrosinemia Tyrosin huyết UV-VIS Ultraviolet – visible Tử ngoại – khả kiến Val Valine Valin ZIC Zwitterionic Lưỡng cực viii ... HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGÂN BÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ ACID AMIN BẰNG SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 9720210 Người hướng dẫn... SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ ĐẾN SỰ LƯU GIỮ CỦA ACID AMIN 3.2 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHẾ PHẨM CHỨA ACID AMIN BẰNG HILIC 3.2.1 Phân tích đồng thời acid amin thơm chế phẩm... (HPA) 1.3.3 Tyrosin huyết (TYR) 1.4 TỔNG QUAN VỀ PHÂN TÍCH ACID AMIN 1.4.1 Tổng quan phân tích acid amin chế phẩm 1.4.2 Tổng quan phân tích acid amin dịch sinh học Chương NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT