VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - YÊU CẦU CHUNG VÀ HƯỚNG DẪN KIỂM TRA VI SINH VẬT

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6404 : 2008 ISO 7218 : 2007 VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - YÊU CẦU CHUNG VÀ HƯỚNG DẪN KIỂM TRA VI SINH VẬT Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations Lời nói đầu TCVN 6404: 2008 thay TCVN 6404:2007; TCVN 6404:2008 hoàn toàn tương đương với ISO 7218:2007; TCVN 6404:2008 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - YÊU CẦU CHUNG VÀ HƯỚNG DẪN KIỂM TRA VI SINH VẬT Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa yêu cầu chung hướng dẫn/lựa chọn cho ba mục đích sử dụng sau đây: - áp dụng tiêu chuẩn Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia có liên quan để phát định lượng vi sinh vật, sau gọi “các tiêu chuẩn cụ thể”; - thực hành phòng thử nghiệm tốt phòng thử nghiệm vi sinh vật thực phẩm (có sẵn tài liệu cho mục đích khơng nêu chi tiết chúng tiêu chuẩn này); - hướng dẫn công nhận phòng thử nghiệm vi sinh thực phẩm (tiêu chuẩn mô tả yêu cầu kỹ thuật theo Phụ lục B TCVN ISO/IEC 17025 cơng nhận phịng thử nghiệm vi sinh tổ chức quốc gia) Các yêu cầu tiêu chuẩn thay yêu cầu tương ứng tiêu chuẩn cụ thể hành Các hướng dẫn bổ sung lĩnh vực kiểm tra sinh học phân tử quy định ISO 22174 Tiêu chuẩn bao gồm việc kiểm tra vi khuẩn, nấm men nấm mốc sử dụng bổ sung hướng dẫn cụ thể prion (các phần tử lây nhiễm có protein), ký sinh trùng virut Tiêu chuẩn không bao gồm việc kiểm tra độc tố chất chuyển hóa khác (ví dụ: amin) từ vi sinh vật Tiêu chuẩn áp dụng cho vi sinh vật thực phẩm, thức ăn chăn nuôi môi trường sản xuất thực phẩm môi trường sản xuất ban đầu Mục đích tiêu chuẩn giúp đảm bảo tính hợp thức cơng việc kiểm tra nhằm xác định tính đồng kỹ thuật chung sử dụng kiểm tra tất phòng thử nghiệm, giúp đạt kết đồng phòng thử nghiệm khác bảo vệ sức khỏe nhân viên phòng thử nghiệm cách ngăn ngừa nguy truyền nhiễm Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 7150 (ISO 835) (tất phần), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh – Pipet chia độ TCVN 6507 (ISO 6887) (tất phần), Vi sinh vật học – Hướng dẫn chung việc chuẩn bị dung dịch pha loãng để kiểm tra vi sinh vật LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TCVN 6263 (ISO 8261), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn chung chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật ISO 8199, Water quality – General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture (Chất lượng nước – Hướng dẫn chung định lượng vi sinh vật cách nuôi cấy) ISO 8655-1, Piston-operated volumetric apparatus – Part 1: Terminology, general requirements and user recommendations (Dụng cụ pittong định mức – Phần 1: Thuật ngữ, yêu cầu chung khuyến cáo sử dụng) ISO/TS 11133 (tất phần), Microbiology of food and animal feeding stuffs – Guidelines on preparation and production of culture media (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Hướng dẫn chuẩn bị môi trường nuôi cấy) ISO 16140, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Protocol for validation of alternative methods (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn ni – Qui trình đánh giá phương pháp thay thế) ISO/TS 19036, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Guidelines for the estimation of measurement uncertainly for quantitative determinations (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Hướng dẫn đánh giá độ không đảm bảo đo phép định lượng) ISO 22174, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens – General requirements and definitions (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Phản ứng chuỗi polymeraza (PCR) để phát sinh vật gây bệnh từ thực phẩm – Yêu cầu chung định nghĩa) Cơ sở thử nghiệm 3.1 Yêu cầu chung Điều đưa yêu cầu chung, ví dụ: nguyên tắc thiết kế tổ chức để thực phòng thử nghiệm vi sinh Việc kiểm tra mẫu giai đoạn sản xuất ban đầu (đặc biệt việc tiếp nhận mẫu chuẩn bị mẫu) phải tách riêng khỏi khu vực kiểm tra mẫu khác để giảm nguy nhiễm bẩn chéo 3.2 Các vấn đề an tồn Thiết kế phịng thử nghiệm phải tuân thủ yêu cầu an toàn tùy thuộc vào loài vi sinh vật Các vi sinh vật phân thành bốn cấp nguy sau đây: - Nguy cấp (khơng có có nguy thấp cá thể cộng đồng) Vi sinh vật không gây bệnh cho người động vật - Nguy cấp (nguy vừa phải cá thể, nguy thấp cộng đồng) Nguồn bệnh gây bệnh cho người động vật không tạo mối nguy cho nhân viên phịng thử nghiệm, cộng đồng mơi trường Phịng thử nghiệm phơi nhiễm làm lây nhiễm nghiêm trọng tới người, việc xử lý có hiệu biện pháp phịng ngừa có sẵn nguy phát tán lây nhiễm hạn chế - Nguy cấp (nguy cao cá thể, nguy thấp cộng đồng) Nguồn bệnh thường gây bệnh cho người động vật không phát tán từ người sang người khác Việc xử lý có hiệu biện pháp phịng ngừa có sẵn - Nguy cấp (nguy cao cá thể cộng đồng) Nguồn bệnh thường lây nhiễm sang người động vật tiếp gián tiếp phát tán dễ dàng từ người sang người khác trực Thường khơng có sẵn biện pháp xử lý có hiệu biện pháp phịng ngừa thích hợp CẢNH BÁO – Tham khảo quy định quốc gia để xác định cấp nguy vi sinh vật 3.3 Thiết kế phòng thử nghiệm Các hướng dẫn phịng thử nghiệm mơ tả bao gồm việc kiểm tra để phát vi sinh vật thuộc nguy cấp 1, vi sinh vật thực phẩm Trong qui định nội có thêm qui định biện pháp an toàn 3.4 Khu vực thử nghiệm 3.4.1 Yêu cầu chung LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn Phịng thử nghiệm gồm có khu vực lấy mẫu thử nghiệm (xem 3.4.2) khu vực chung (xem 3.4.3) Các khu vực phải tách biệt 3.4.2 Khu vực lấy mẫu thử nghiệm Phòng thử nghiệm thực hành tốt cần có khu vực tách biệt khu vực khoanh vùng riêng sau đây: - nơi nhận bảo quản mẫu, - nơi chuẩn bị mẫu, đặc biệt trường hợp mẫu nguyên liệu (ví dụ: sản phẩm dạng bột chứa lượng vi sinh vật cao); - kiểm tra mẫu (từ mẫu huyền phù ban đầu), gồm việc ủ vi sinh vật - thao tác với vi sinh vật gây bệnh giả định; - bảo quản chủng đối chứng chủng khác; - chuẩn bị khử trùng môi trường nuôi cấy dụng cụ; - bảo quản môi trường nuôi cấy thuốc thử; - kiểm tra độ vô trùng thực phẩm; - khử nhiễm; - làm dụng cụ thủy tinh dụng cụ khác; - bảo quản hóa chất độc hại, tốt giữ tủ, hộp, phòng kho chuyên dụng 3.4.3 Khu vực chung Các khu vực thuộc phạm trù bao gồm; - lối vào, hành lang, cầu thang, thang máy; - khu vực hành (ví dụ như: phịng thư ký, văn phòng, phòng tài liệu ); - phòng thay áo nhà vệ sinh; - phòng văn thư lưu trữ; - nhà kho; - phịng nghỉ 3.5 Bố trí lắp đặt nhà xưởng 3.5.1 Mục tiêu Mục tiêu để đảm bảo mơi trường mà tiến hành phân tích vi sinh vật khơng ảnh hưởng đến độ tin cậy phép phân tích Phải ý tới vị trí sở thử nghiệm cho tránh nguy tạp nhiễm chéo Các cách để đạt mục tiêu là: a) xây dựng phịng thử nghiệm theo nguyên tắc “đường chiều”; b) thực quy trình theo phương thức liên tiếp với phịng ngừa thích hợp để đảm bảo phép thử độ nguyên vẹn mẫu (ví dụ: sử dụng hộp chứa hàn kín); c) tách riêng hoạt động theo thời gian không gian; Tránh điều kiện vượt cho phép như: nhiệt độ, bụi, độ ẩm, nước, tiếng ồn, độ rung v.v… Mặt khu vực phải đủ rộng để giữ vệ sinh ngăn nắp Cần có khơng gian tương xứng với khối lượng phân tích, xử lý tổ chức bên phịng thử nghiệm Khơng gian cần theo qui định quốc gia, có 3.5.2 Lắp đặt Cơ sở thử nghiệm phải thiết kế trang bị để giảm bớt nguy nhiễm bẩn bụi kéo theo vi sinh vật (đối với vi sinh vật nguy cấp 3, xem quy định quốc gia) sau: a) tường, trần sàn nhà phải nhẵn, dễ rửa chịu chất tẩy rửa chất khử trùng dùng phòng thử nghiệm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn b) sàn nhà không trơn c) không để đường ống dẫn chất lỏng mặt đất ngang qua sở thử nghiệm trừ chúng bọc kín Mọi cấu trúc phía cần bọc kín dễ làm vệ sinh định kỳ d) cửa vào cửa sổ cần đóng kín tiến hành thử để ngăn gió lùa Ngồi ra, chúng phải thiết kế cho chống bụi bám dễ lau rửa Nhiệt độ môi trường xung quanh (18 °C đến 27 °C) chất lượng khơng khí (mật độ vi sinh vật, tốc độ phát tán bụi v.v ) cần tương thích với việc thực phép thử Để thực điều nên dùng hệ thống lọc khơng khí vào e) lắp hệ thống bảo vệ khỏi bụi từ khu vực xử lý môi trường nuôi cấy khô, mẫu dạng bụi dạng bột f) phép thử tiến hành mơi trường bị nhiễm bẩn, phịng thử nghiệm phải trang bị đặc biệt, với tủ cấy thổi khơng khí và/ tủ an tồn g) mơi trường phịng thử nghiệm cần bảo vệ chống xạ mặt trời phía ngồi cách sử dụng cửa chớp tầm thủy tinh xử lý thích hợp Khơng nên sử dụng rèm che phía khó làm vệ sinh trở thành nguồn tích bụi 3.5.3 Các điểm khác Các điểm khác cần xem xét là: - nguồn nước, chất lượng nước thích hợp cho mục đích sử dụng; - nguồn điện - khí đốt (đường ống bình) - ánh sáng đầy đủ phận phòng thử nghiệm; - mặt bàn trang bị phòng thử nghiệm phải chế tạo vật liệu nhẵn trơn, không thấm, dễ làm khử trùng; - trang thiết bị phòng thử nghiệm phải thiết kế để thuận tiện cho việc lau rửa sàn nhà (ví dụ, trang thiết bị thử nghiệm di chuyển được) - trang thiết bị, tài liệu không sử dụng thường xun khơng để khu vực thử nghiệm; - tính sẵn có phương tiện bảo quản tài liệu để sử dụng thao tác với mẫu, môi trường ni cấy, hóa chất v… - cung cấp bồn rửa tay phòng thử nghiệm khu vực chung cần, nên để gần cửa; - tính sẵn có dụng cụ hấp áp lực để khử nhiễm môi trường nuôi cấy vật liệu thải, trừ có sẵn có hệ thống loại bỏ vật liệu thải thích hợp cách đốt; - hệ thống an tồn phịng cháy, điện, thiết bị rửa mắt vịi tắm hoa sen; - thiết bị phụ trợ 3.6 Làm khử trùng Các điểm cần phải kiểm tra: a) Mặt sàn, tường, trần, mặt bàn trang bị phòng thử nghiệm phải bảo dưỡng thường xuyên sửa chữa để tránh nứt rạn dẫn đến bụi bẩn tích tụ gây nhiễm bẩn b) Thường xuyên lau rửa khử trùng để giữ cho phịng ln trạng thái thích hợp để tiến hành thử nghiệm Các bề mặt bị nhiễm bẩn có khả nhiễm bẩn cần khử nhiễm chất tẩy rửa biết có tính diệt nấm diệt khuẩn CHÚ THÍCH Phịng thiết bị khử nhiễm cách xông formaldehyt, luật cho phép c) Hệ thống thơng gió lọc chúng cần bảo dưỡng thường xuyên thay lọc cần d) Cần kiểm tra số lượng vi sinh vật bề mặt làm việc phòng thử nghiệm, nhân viên tiếp xúc với bề mặt khơng khí cần kiểm tra định kỳ (tần số phụ thuộc vào kết thử nghiệm trước đó) e) Độ nhiễm bẩn bề mặt đánh giá cách áp trực tiếp miếng lấy mẫu tẩm chất trung hịa thích hợp lên bề mặt (ví dụ: lexithin, natri thiosulfat) Chất lượng khơng khí LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn kiểm tra cách đặt đĩa petri mở nắp có chứa mơi trường thạch khơng chọn lọc (ví dụ: thạch đếm đĩa –PAC) thạch chọn lọc thích hợp cho sinh vật đích (ví dụ: nấm mốc) 15 CHÚ THÍCH Có thể dùng phương pháp để xác định độ nhiễm bẩn bề mặt khơng khí Xem ISO 18593 Nhân 4.1 Yêu cầu chung Các yêu cầu chung lực nhân sự, xem TCVN ISO/IEC 17025 4.2 Năng lực Đối với phương pháp kỹ thuật, chuẩn mực phải xác định để đánh giá lực thích hợp lúc ban đầu tiến hành Năng lực thiếp lập phịng thử nghiệm kiểm sốt chất lượng nội (xem 15.1.2) CHÚ THÍCH Một nguyên nhân gây sai lệch kết đếm khuẩn lạc (hút pipet, độ không đồng huyền phù ban đầu, đếm v.v…) định lượng khuẩn lạc phương pháp đếm ISO 14461-1 4.3 Kiểm tra lực thực nhân viên Việc kiểm tra lực thực nhân viên đánh giá định kỳ theo thông số mục tiêu Điều bao gồm việc tham gia vào chương trình đảm bảo chất lượng nội bộ, thử nghiệm thành thạo [xem TCVN 7777-1 (ISO/IEC Guide 43-1)], sử dụng vật liệu chuẩn, phép thử tự đánh giá định lượng vi sinh vật mô tả ISO 14461-2 4.4 Vệ sinh Về lĩnh vực vệ sinh cá nhân, phải tuân thủ lưu ý sau để tránh làm nhiễm bẩn mẫu thử môi trường nuôi cấy, đồng thời để tránh nguy lây nhiễm sang người: a) Phải mặc áo choàng thử nghiệm trạng thái tốt, sản xuất từ loại sợi hạn chế nguy cháy Khơng mang áo chồng khỏi khu vực làm việc phòng thay đồ b) Mang trang bị bảo vệ tóc râu, cần c) Giữ móng tay thật sạch, tốt cắt ngắn d) Rửa tay nước ấm, tốt nên rửa vịi khơng điều khiển tay trước sau kiểm tra vi sinh vật sau vệ sinh Sử dụng xà phòng nước xà phịng bột, nước rửa sát trùng cấp từ dụng cụ phân phối trạng thái Lau khô tay giấy khăn tay sử dụng lần Những lưu ý áp dụng cho nhân viên phòng thử nghiệm lẫn khách tham quan e) Khi tiếp xúc với mẫu trần, dịch cấy, môi trường nuôi cấy mẫu khơng nói chuyện, ho, v.v… f) Đặc biệt lưu ý người bị nhiễm trùng da bị ốm gây nhiễm sang mẫu thử làm sai lệch kết g) Không ăn uống khu vực thử nghiệm không để thức ăn nhân viên tủ lạnh tủ lạnh đông tủ đựng đồ thử nghiệm h) Không dùng miệng để hút pipet Thiết bị dụng cụ 5.1 Yêu cầu chung Theo thực hành phòng thử nghiệm tốt tất thiết bị, dụng cụ phải giữ trạng thái tốt Trước sử dụng, dụng cụ phải xác nhận theo mục đích sử dụng hiệu sử dụng phải kiểm tra suốt trình sử dụng, thích hợp Khi cần, thiết bị dụng cụ kiểm tra phải hiệu chuẩn theo chuẩn quốc gia hiệu chuẩn lại lần kiểm tra trung gian phải thực hiện, quy trình kiểm tra kết phải ghi lại Tất máy móc thiết bị phải kiểm tra định kỳ trì để đảm bảo tính an tồn phù hợp cho mục đích sử dụng Dụng cụ cần kiểm tra theo điều kiện làm việc độ xác yêu cầu kết Tần suất hiệu chuẩn kiểm tra xác nhận hạng mục thiết bị mà nhiều trường hợp khơng quy định tiêu chuẩn này, xác định phịng thử nghiệm, tùy thuộc LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn vào loại thiết bị mức độ hoạt động phòng thử nghiệm, phù hợp với dẫn nhà sản xuất Trong số trường hợp định, có quy định tần suất vấn đề coi cần thiết Thiết bị dụng cụ phải thiết kế lắp đặt thích hợp cho thao tác dễ bảo dưỡng, làm khử nhiễm hiệu chuẩn Sự không đảm bảo đo đưa điều liên quan đến thiết bị, dụng cụ có liên quan khơng cho tồn phương pháp phân tích Xun suốt điều này, yêu cầu độ xác phép đo thiết bị đo quy định Điều dựa vào dung sai thực tế yêu cầu để chứng minh việc kiểm sốt thích hợp thiết bị sử dụng hàng ngày Độ xác nêu liên quan đến độ không đảm bảo đo lường thiết bị (xem ISO guide 99) Đối với thiết bị kiểm sốt nhiệt độ kiểm tra độ ổn định tính đồng nhiệt độ trước bắt đầu sử dụng sau sửa chữa thay đổi mà làm ảnh hưởng đến việc kiểm sốt nhiệt độ 5.2 Tủ bảo vệ 5.2.1 Mơ tả Tủ bảo vệ vị trí làm việc trang bị luồng khí thổi, thổi theo chiều ngang chiều dọc để loại bỏ bụi chất hạt khác vi khuẩn từ khơng khí Số lượng hạt cho phép tối đa mét khối có cỡ lỗ lớn 0,5 µm thể cấp loại tủ an toàn Đối với tủ dùng cho vi sinh vật thực phẩm, số lượng chất hạt không 4000 mét khối Tủ dùng cho vi sinh vật thực phẩm có bốn loại: a) Tủ an toàn loại I tủ bảo vệ cửa mở trước dùng để bảo vệ người thực môi trường không bảo vệ sản phẩm khỏi nhiễm bẩn bên Khả bị nhiễm sol khí xảy buồng giữ lại lọc Khơng khí lọc thường thải mơi trường; khơng thực điều khơng khí phải cho qua hai lọc HEPA treo thành dãy Chúng không nên dùng cho sinh vật gây bệnh nguy cấp khó trì bảo vệ người thực b) Tủ an toàn loại II bảo vệ sản phẩm, người thực mơi trường Quay vịng lượng khơng khí lọc, đưa lượng khí mơi trường thay khơng khí qua lỗ hổng làm việc, bảo vệ người thực Chúng thích hợp cho việc thực với vi sinh vật gây bệnh nguy cấp c) Các tủ thổi đẩy khơng khí ngang bảo vệ nơi làm việc khỏi bị nhiễm bẩn, thổi hết sol khí vào mặt người thực Do đó, chúng khơng thích hợp cho việc xử lý dịch cấy nuôi cấy mô d) Các tủ thổi đẩy khơng khí dọc bảo vệ sản phẩm cách sử dụng dịng khơng khí lọc HEPA Chúng bảo vệ người thực qua việc sử dụng khơng khí quay vịng bên Các loại tủ đặc biệt thích hợp để có môi trường vô trùng để xử lý sản phẩm vô trùng bảo vệ người thực xử lý với sản phẩm dạng bột Sử dụng tủ bảo vệ cho tất công việc liên quan đến xử lý vi sinh vật gây bệnh sản phẩm dạng bột bị nhiễm, quy định quốc gia cho phép Việc sử dụng đầu đốt khí lị nung khơng dùng tủ bảo vệ Nếu cần đầu đốt khí cần phải có lửa nhỏ cho khơng làm nhiễu loạn dịng khơng khí Cách khác, sử dụng dụng cụ dùng lần (vòng cấy, pipet.v.v…) 5.2.2 Sử dụng Các tủ khơng nên lưu giữ dụng cụ Khi có thể, đặt tất thứ cần thiết vào tủ trước bắt đầu làm việc để giảm thiểu động tác vào lỗ hở làm việc Bố trí dụng cụ vật liệu cho tối thiểu hóa nhiễu loạn dịng khơng khí lỗ hở làm việc Người thực cần đào tạo sử dụng tủ cách để đảm bảo an toàn cho người thực đảm bảo nguyên vẹn sản phẩm dịch cấy 5.2.3 Làm khử trùng Làm khử trùng khu vực làm việc sau sử dụng, dùng chất tẩy rửa không ăn mịn thích hợp theo dẫn nhà sản xuất Thường xuyên kiểm tra lưới bảo vệ lọc sơ làm khăn vải ngâm dung dịch tẩy rửa LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Đối với tủ thổi khơng khí theo lớp bề mặt lọc phải thường xuyên làm chân không, ý không làm hỏng môi trường lọc Các tủ an tồn xông trước thay sửa chữa lọc Sau làm tủ, sử dụng đèn UV để khử trùng Đèn UV cần làm thay thường xuyên theo dẫn nhà sản xuất 5.2.4 Bảo dưỡng kiểm tra Các tủ an tồn sử dụng thích hợp với mục đích điều kiện mơi trường phịng thử nghiệm Hiệu tủ bảo vệ phải nhân viên có chun mơn kiểm tra thường xun theo dẫn nhà sản xuất, sau sửa chữa thay đổi Việc kiểm tra định kỳ không bị nhiễm bẩn vi sinh vật cần tiến hành cách kiểm tra bề mặt làm việc thành tủ Việc kiểm tra định kỳ số lượng vi sinh vật gây bệnh có mặt cần thực suốt trình thực lọc sử dụng dụng cụ thơng thường Ví dụ, tủ đặt vài đĩa petri mở nắp chứa môi trường ni cấy thạch khơng chọn lọc (ví dụ PCA) 30 Cũng dùng phương pháp khác 5.3 Cân dụng cụ pha loãng định lượng 5.3.1 Sử dụng độ không đảm bảo đo Cân thường dùng để xác định khối lượng phần mẫu thử thành phần môi trường nuôi cấy thuốc thử Ngồi ra, chúng dùng để đo thể tích dung dịch pha lỗng theo khối lượng Dụng cụ pha loãng định lượng dụng cụ điện tử gồm có cân phận phân phối dung dịch lỏng có cài đặt chương trình sử dụng trình chuẩn bị huyền phù ban đầu mẫu; chúng thực cách thêm dịch pha loãng vào mẫu theo tỷ lệ định trước Mẫu sau cân đến dung sai cho phép phận định lượng cài đặt để phân phối đủ lượng dịch pha lỗng theo tỷ lệ u cầu (ví dụ: 9:1 dung dịch pha lỗng thập phân) Phịng thử nghiệm vi sinh vật thực phẩm phải trang bị cân có dải đo độ khơng đảm bảo đo quy định sản phẩm khác cần phải cân Khi cân mẫu thử, sai số tối đa cho phép phải % tốt hơn, trừ có quy định khác Đặt dụng cụ lên mặt phẳng nằm ngang vững chắc, điều chỉnh cần để đảm bảo thăng chống rung chống trượt 5.3.2 Làm khử trùng Làm dụng cụ khử trùng sau lần sử dụng bị đổ cân chất tẩy rửa thích hợp khơng ăn mịn 5.3.3 Kiểm tra hiệu hiệu chuẩn Hiệu hệ thống cân cần kiểm tra xác nhận thường xuyên trình sử dụng sau làm cách kiểm tra khối lượng người có chun mơn thực Việc hiệu chuẩn cần kiểm tra thông qua toàn dải đo phụ thuộc vào tần suất sử dụng Việc kiểm tra khối lượng xác nhận sau hiệu chuẩn cân 5.4 Thiết bị đồng hóa, trộn máy trộn 5.4.1 Mô tả Thiết bị dùng để chuẩn bị huyền phù ban đầu từ mẫu thử sản phẩm khơng dạng lỏng Có thể dùng thiết bị sau đây: - thiết bị đồng hóa kiểu nhu động (dạng túi) với túi chất dẻo vơ trùng, kèm điều chỉnh tốc độ thời gian; - thiết bị đồng hóa kiểu quay (bộ trộn), có tốc độ quay từ 000 r/min đến 45 000 r/min, kèm theo bình chứa kim loại thủy tinh có nắp khử trùng được, - máy trộn kiểu rung (máy tạo xung) có túi vơ trùng; - hệ thống đồng hóa khác có hiệu tương tự LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Trong trường hợp cụ thể, thực việc trộn tay sử dụng viên bi thủy tinh có đường kính thích hợp [khoảng mm, xem TCVN 6507-2 (ISO 6887-2) đến TCVN 6507-4 (ISO 68844) TCVN 6263 (ISO 8261)] 5.4.2 Sử dụng Thời gian hoạt động thơng thường thiết bị đồng hóa kiểu nhu động khoảng đến [xem TCVN 6507-2 (ISO 6887-2) đến TCVN 6507-4 (ISO 6887-4) TCVN 6263 (ISO 8261) loại thực phẩm cụ thể] Loại thiết bị không dùng cho số thực phẩm như: - sản phẩm làm thủng túi (có hạt nhọn sắc, cứng, khơ); - sản phẩm khó đồng hóa cấu trúc chúng (ví dụ: xúc xích loại salami) Thiết bị đồng hóa kiểu quay vận hành khoảng thời gian với tốc độ từ 15000 r/min đến 20000 r/min Nhưng với thiết bị đồng hóa có tốc độ chậm thời gian vận hành khơng vượt q 2,5 Máy trộn rung dùng cho hầu hết loại thực phẩm, kể loại cứng sản phẩm khô Thời gian trộn thường từ 0,5 đến Nếu vi sinh vật nằm sâu cấu trúc cần cắt mẫu thành mảnh nhỏ trước thực Các bi thủy tinh dùng để chuẩn bị huyền phù ban đầu cách lắc sản phẩm có độ nhớt sản phẩm đặc định, đặc biệt sản phẩm sữa (xem tiêu chuẩn cụ thể) 5.4.3 Làm khử trùng Định kỳ làm khử trùng đồng hóa kiểu nhu động trộn kiểu rung sau túi đựng bị tràn rò rỉ Đối với đồng hóa kiểu quay, sau lần sử dụng, làm khử trùng viên bi thủy tinh bát kim loại 5.4.4 Bảo dưỡng Kiểm tra trì dụng cụ theo dẫn nhà sản xuất 5.5 Máy đo pH 5.5.1 Mô tả Máy đo pH dùng để đo hiệu điện cực đo điện cực đối chiếu nhiệt độ xác định, hai điện cực đưa vào sản phẩm Máy đo pH đo xác đến ± 0,05 đơn vị pH có độ phân giải 0,01 đơn vị pH Máy đo pH có cân nhiệt tay tự động CHÚ THÍCH Điện cực đo điện cực đối chiếu thường gắn với thành hệ thống điện cực kết hợp 5.5.2 Sử dụng Máy đo pH dùng để đo giá trị pH môi trường nuôi cấy thuốc thử để kiểm tra xem q trình chuẩn bị có cần điều chỉnh hay khơng để kiểm tra chất lượng sau khử trùng Máy đo pH sử dụng để đo giá trị pH mẫu thử huyền phù mẫu Việc sử dụng máy đo pH thảo luận tiêu chuẩn cụ thể sản phẩm cần phân tích, điều kiện xác định pH điều chỉnh pH qui định Chỉnh máy đo pH theo dẫn nhà sản xuất để đo giá trị pH nhiệt độ chuẩn, ví dụ 25 °C Đọc giá trị pH sau ổn định Ghi lại giá trị pH đến hai chữ số thập phân CHÚ THÍCH Số đọc coi ổn định giá trị pH đo 5s dao động không 0,02 đơn vị pH Sử dụng điện cực tình trạng tốt, trạng thái cân đạt khoảng 30 s 5.5.3 Kiểm tra xác nhận đánh giá Hàng ngày trước lần sử dụng, kiểm tra máy đo pH theo dẫn nhà sản xuất, sử dụng hai ba dung dịch đệm chuẩn Xác định sai số tối đa cho phép việc kiểm tra xác nhận tùy thuộc vào việc sử dụng Các dung dịch chuẩn có giá trị pH biết trước xác tới hai số thập phân nhiệt độ đo (nói chung, pH 4,00, pH 7,00 và/hoặc 9,00 nhiệt độ 25 °C, theo dẫn nhà sản xuất) Các dung dịch chuẩn phải bao trùm giá trị pH cần đo LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Sau kiểm tra xác nhận máy đo pH với hai dung dịch đệm chuẩn, pH phải kiểm tra cách sử dụng dung dịch đệm thứ ba, gọi dung dịch đệm kiểm chứng, ví dụ pH Đánh giá máy đo pH việc kiểm tra cho kết nằm dải sai số cho phép tối đa thực theo dẫn nhà sản xuất Việc đánh giá thực cách hiệu chuẩn cho phép ước tính độ không đảm bảo đo máy đo pH 5.5.4 Bảo dưỡng Kiểm tra bảo dưỡng điện cực theo dẫn nhà sản xuất Trong trường hợp cụ thể, cần phải kiểm tra thường xuyên, cần: - tình trạng điện cực mức độ bẩn lão hóa; - thời gian cho kết độ ổn định Sau lần sử dụng, tráng đầu đo điện cực nước cất nước loại ion Để đánh giá mức bẩn mức độ lão hóa điện cực đo, phải thường xuyên rửa điện cực thật theo dẫn nhà sản xuất Bảo quản điện cực theo dẫn nhà sản xuất 5.6 Nối hấp áp lực 5.6.1 Mô tả Nối hấp áp lực thiết bị đạt nhiệt độ nước bão hòa dùng để diệt vi sinh vật Nồi hấp áp lực cần trang bị kèm theo: - Ít van an toàn, - van xả, - phận trì nhiệt độ quy định buồng với khoảng ± °C nhiệt độ đích (có tính đến độ khơng đảm bảo đo liên quan đến cặp nhiệt điện); - đầu dò nhiệt độ cặp nhiệt điện tự ghi Nồi hấp áp lực gắn với lọc thời gian đọc nhiệt độ 5.6.2 Sử dụng Với phương pháp khử trùng hơi, tất khơng khí đuổi trước tạo áp lực Nếu nồi hấp áp lực không gắn liền với thiết bị hút chân không tự động, cần phải đuổi khơng khí ống phun luồng nước liên tục phát Để diệt vi sinh vật, bão hòa buồng phải có nhiệt độ 121 °C Trong chu kỳ khử trùng, nồi hấp áp lực không sử dụng để khử trùng dụng cụ (và/hoặc môi trường nuôi cấy) với khử bẩn dụng cụ sử dụng (và/hoặc môi trường nuôi cấy sử dụng) Tốt sử dụng nồi hấp áp lực riêng biệt cho hai trình Sau hấp áp lực, tất vật liệu dụng cụ phải làm nguội nồi hấp trước lấy Vì lý an tồn, không lấy đồ khỏi nồi hấp áp lực nhiệt độ chưa giảm đến 80 °C 5.6.3 Bảo dưỡng Định kỳ làm khoang chứa, lọc xả cửa kín Kiểm tra độ kín cửa Tiến hành xả cạo cặn, cần, khoảng thời gian định Tiến hành theo dẫn nhà sản xuất 5.6.4 Kiểm tra xác nhận hiệu chuẩn Phải giữ nồi hấp áp lực điều kiện làm việc tốt phải kiểm tra thường xuyên phận có lực kiểm tra theo dẫn nhà sản xuất Tất dụng cụ kiểm tra phải giữ trạng thái làm việc tốt phận có thẩm quyền kiểm tra định kỳ Việc kiểm tra đánh giá ban đầu cần bao gồm nghiên cứu hiệu chu kiểu nạp sản phẩm sử dụng thực tế Quá trình cần lặp lại sau sửa chữa LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn thay đổi Các cảm biến nhiệt cần bố trí sản phẩm biết nhiệt truyền vào tất vị trí Việc kiểm tra kiểm tra lại cần xem xét phù hợp thời gian nâng nhiệt hạ nhiệt nhiệt độ khử trùng Để kiểm tra q trình nhiệt khơng có sẵn liệu đánh giá hiệu trình, mẻ sản phẩm, cần đặt tâm sản phẩm tối thiểu thị trình 5.7 Thiết bị chuẩn bị môi trường 5.7.1 Mô tả Thiết bị chuẩn bị môi trường thiết kế theo nguyên tắc để khử trùng lượng lớn môi trường (> l) Bộ phận bao gồm bể làm nóng, túi nước dụng cụ khuấy liên tục Thiết bị lắp phận đo nhiệt độ, phận đo áp suất, đo thời gian van an toàn Ngồi ra, phận cần có khóa an tồn để không mở nhiệt độ chưa xuống đến < 80 °C 5.7.2 Sử dụng Thực theo dẫn nhà sản xuất Tồn q trình chuẩn bị thực thiết bị Sau bổ sung tất thành phần, khuấy làm nóng để hòa tan đem khử trùng 5.7.3 Bảo dưỡng Rửa thiết bị chuẩn bị môi trường tráng kỹ nước cất sau chuẩn bị mẻ môi trường 5.7.4 Kiểm tra xác nhận Phải giữ thiết bị chuẩn bị môi trường điều kiện làm việc tốt phải phận có lực kiểm tra thường xuyên theo dẫn nhà sản xuất Tất dụng cụ kiểm tra phải giữ trạng thái làm việc tốt kiểm tra định kỳ hiệu chúng Việc kiểm tra đánh giá ban đầu cần bao gồm nghiên cứu hiệu chu kiểu nạp sản phẩm sử dụng thực tế Quá trình cần lặp lại sau sửa chữa thay đổi Có thể sử dụng hai đầu dị nhiệt, để sát với đầu dò đối chứng để cách xa hẳn để biết nhiệt hay chưa Cần kiểm tra nhiệt độ thời gian chu kỳ 5.8 Tủ ấm 5.8.1 Mô tả Tủ ấm bao gồm buồng giữ nhiệt có nhiệt độ ổn định phân phối đều, với sai số nhiệt độ tối đa cho phép quy định tiêu chuẩn 5.8.2 Sử dụng Các tủ ấm cần trang bị hệ thống điều chỉnh để giữ nhiệt độ thông số khác ổn định khắp vùng làm việc Xác định thể tích làm việc để đảm bảo điều đạt Nếu nhiệt độ môi trường gần cao nhiệt độ tủ ấm, cần phải bố trí hệ thống làm mát Bảo vệ thành tủ ấm tránh ánh sáng mặt trời chiếu thẳng Nếu có thể, sử dụng loại tủ ấm (đối lưu khơng khí bắt buộc khơng), tủ ấm khơng nên để đầy q mơi trường ni cấy cần nhiều thời gian để cân nhiệt độ Tránh mở tủ ấm nhiều lần thời gian dài Khi xếp mẫu vào tủ ấm phải ý tới lưu thơng khơng khí (xem 10.2.4) 5.8.3 Làm khử trùng Định kỳ làm khử trùng thành tủ ấm, thích hợp, lau bụi hệ thống thơng gió 5.8.4 Kiểm tra xác nhận Sự ổn định nhiệt độ phân bố nhiệt đồng khoang làm việc tủ ấm phải kiểm tra nhiệt kế cặp nhiệt điện biết trước độ xác dải nhiệt thích hợp LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn f hệ số pha loãng dung dịch pha loãng (lớn 10); n số lượng ống cho dung dịch pha loãng; Các giới hạn tin cậy khoảng tin cậy 95 % tính gần cách nhân chia số ước tính MPN cho đối loga x SE Quy trình dùng để tăng nhiều giới hạn tin cậy 10.5.6.2 Các bảng MPN 10.5.6.2.1 Các bảng dùng cho hệ thống dung dịch pha loãng Các Bảng từ B.1 đến B.4 (Phụ lục B) cho giá trị MPN khoảng tin cậy 95 % phần mẫu thử 10 ống, 15 ống, 20 ống 25 ống song song (mỗi ống cấy dung dịch pha loãng) Để biểu thị kết khối lượng chuẩn mẫu (hoặc thể tích mẫu dạng lỏng), nhân MPN giá trị giới hạn 95 % cho tỷ lệ (khối lượng chuẩn)/(khối lượng phần mẫu thử) Không nhân với độ không đảm bảo chuẩn loga Khối lượng mẫu chuẩn vi sinh vật thực phẩm thường g Khối lượng phần mẫu thử tương ứng với lượng mẫu (bằng gam) có mặt thể tích dùng để cấy vào ống, ví dụ 0,1 g sử dụng ml huyền phù đồng 10 -1 VÍ DỤ ([30]) Hai mươi ống canh thang nồng độ kép cấy ml mẫu pha loãng mười lần (0,1 g/ml) Sau ủ, 16 ống cho thấy vi sinh vật có phát triển Mật độ (vi sinh vật gam) vi khuẩn có xác suất lớn mẫu? Bảng B.3 cho 1,61 số có xác suất lớn vi sinh vật ống, có 0,93 giới hạn 95 % 2,77 giới hạn 95 % Mỗi ống nhận ml phần mẫu thử tương ứng với 0,5 g mẫu Do đó, số vi sinh vật có xác suất lớn g là: MPN = gam = 3,2 gam Với khoảng tin cậy 95 % dao động từ Giới hạn 95 % = gam = 1,9 gam; Giới hạn 95 % = gam = 5,5 gam; 10.5.6.2.2 Các bảng dùng cho hệ thống nhiều dung dịch pha loãng: ba dung dịch pha lỗng liên tiếp Với hệ thống khơng đối xứng, thường sử dụng ba dung dịch pha loãng liên tiếp với ba ống (Bảng B.5) năm ống kép (Bảng B.7) Ghi lại số lượng kết dương tính cho dãy ống từ bảng MPN hệ thống cấy sử dụng, đọc số có xác suất lớn vi sinh vật có mặt thể tích chuẩn mẫu Một số tổ hợp ống dương tính có nhiều khả xuất so với tổ hợp khác Ví dụ: tổ hợp kết dương tính 0, 0, có khả xuất so với tổ hợp 3, 2, Để đếm khả tất kết dương tính quy cho cấp đến cấp Kết cấp kết có xác suất cao hơn, kết cấp thấp không dễ tái tạo Các trường hợp xấu kết thuộc cấp 0; chúng cần coi nghi ngờ Giả sử kết phân tích hy vọng 95 % tổ hợp quan sát rơi vào cấp 1, 4, % cấp 2, 0,9 % cấp 0,1 % cấp Các cấp diễn giải Bảng B.6 Trong trường hợp có nhiều ba dung dịch pha lỗng, chọn tổ hợp “phải” ba dung dịch pha lỗng liên tiếp khơng phải lúc rõ ràng Tuy nhiên, điều dễ dàng thực cách ghi lại tất tổ hợp có khả cho ống dương tính đọc cấp tương ứng từ Bảng B.5 Do đó, áp dụng nguyên tắc sau đây: 1) Chọn tổ hợp ba dung dịch pha lỗng liên tiếp có dạng cấp để thu số MPN Nếu có nhiều tổ hợp có dạng cấp sử dụng tổ hợp có số ống dương tính cao 2) Nếu khơng có tổ hợp có dạng cấp 1, sử dụng tổ hợp có dạng cấp Nếu có nhiều tổ hợp có dạng cấp sử dụng tổ hợp có số ống dương tính cao LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn 3) Nếu khơng có tổ hợp có dạng cấp 2, sử dụng tổ hợp có dạng cấp Nếu có nhiều tổ hợp có dạng cấp sử dụng tổ hợp có số ống dương tính cao Một số ví dụ nêu Bảng Bảng – Các ví dụ lựa chọn kết dương tính để tính MPN MPNb Mẫu Số lượng ống dương tính thu từ ba ống ủ đối Sản phẩm Sản phẩm với lượng mẫu thử cấy ốnga sau dạng lỏng dạng khác (ml-1) (g-1) Sản phẩm dạng lỏng: 10 ml ml 10-1ml 10-2ml 10-3ml Sản phẩm dạng khác: g 10-1g 10-2g 10-3g 10-4g 1,1 x 101 1,1 x 102 2,4 x 101 2,4 x 102 7,4 7,4 x 101 0 2,4 2,4 x 101 2,1x 10-1 2,1 3 2 3 3 2 1 3 2 a Các số gạch chân cho thấy tổ hợp chọn b Tính sử dụng số MPN (xem Bảng B.5) 10.5.6.3 Chương trình máy tính Các chương trình máy tính đa cho số có liên quan không giới hạn ống song song đối xứng hệ thống MPN Máy phân tích MPN chương trình cài sẵn theo chương trình trước (xem [29]) 10.5.7 Biểu thị kết Từ số MPN đọc từ Bảng B.5 [theo tổ hợp ba (hoặc năm) dung dịch pha loãng liên tiếp giữ lại], xác định vi sinh vật có xác suất lớn thể tích chuẩn Báo cáo kết số vi sinh vật có xác suất lớn (hoặc nhóm vi sinh vật đặc thù) gam mililit Khối lượng thể tích chuẩn khác với gam mililit (ví dụ 100 g 100 ml) 11 Phương pháp phát (phương pháp định tính) 11.1 Yêu cầu chung Phương pháp phát phương pháp xác định có mặt hay khơng vi sinh vật định có lượng qui định sản phẩm 11.2 Nguyên tắc Trộn (sản phẩm thể lỏng), đồng (sản phẩm dạng khác) lượng P sản phẩm cần thử x P ml x P g loại canh thang chọn lọc, khơng có qui định khác tiêu chuẩn riêng Để tăng độ thu hồi vi sinh vật thực phẩm, tốt nên tiến hành tăng sinh trước canh thang không chọn lọc, sau tăng sinh canh thang chọn lọc phân lập thạch khác nhau/thạch chọn lọc Việc sử dụng hai canh thang tăng sinh khác hai nhiều môi trường thạch chọn lọc làm tăng độ nhạy phương pháp Sau nuôi ấm, dàn mỏng vòng dịch cấy thu lên bề mặt môi trường thạch chọn lọc cho khuẩn lạc mọc phân tách tốt Khi khơng có quy định khác canh thang tăng sinh ủ ấm làm lạnh sau đánh giá ảnh hưởng việc làm lạnh lên kết quy định rõ báo cáo kết Số lượng (thường năm đĩa thạch) khuẩn lạc thu sau ủ nhận dạng sử dụng kỹ thuật khẳng định thích hợp Việc chọn khuẩn lạc để khẳng định cần bao trùm loại khuẩn lạc đại diện nghi ngờ 11.3 Đo độ khơng đảm bảo Ước tính độ không đảm bảo đo phép định lượng ISO/TC34/SC nghiên cứu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 12 Phương pháp khẳng định 12.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng khuẩn lạc khiết để khẳng định sinh hóa huyết học Các phép thử khẳng định mô tả tiêu chuẩn cụ thể Để thay cho phép thử sinh hóa quy định tiêu chuẩn cụ thể, sử dụng phương pháp thử khẳng định (dị ứng sinh hóa, đầu dị nucleic) điều kiện quy định điều này, trừ có quy định tiêu chuẩn cụ thể 12.2 Chuẩn bị chủng cấy khiết Bắt đầu chuẩn bị chuẩn cấy khiết cách chọn lọc khuẩn lạc môi trường thạch Cấy khuẩn lạc chọn lên môi trường thạch không chọn lọc Sau nuôi ấm, chọn lấy khuẩn lạc phân lập tốt cho việc thử khẳng định Lặp lại thao tác này, cần Nếu có thể, phép thử khẳng định cần tiến hành tế bào từ khuẩn lạc Nếu khơng có đủ lượng tế bào khuẩn lạc, trước hết cần cấy truyền vào môi trường lỏng lên môi trường thạch nghiêng, sau dịch cấy truyền dùng để thử khẳng định 12.3 Nhuộm Gram (kỹ thuật Hucker cải biến) 12.3.1 Yêu cầu chung Việc nhuộm màu tế bào vi khuẩn cho phép mô tả hình thái vi khuẩn phân loại chúng thành hai nhóm theo chức năng, chúng hay khơng thể giữ màu tím thuốc nhuộm tím tinh thể (Gram +) điều kiện thử nghiệm Các kết phân loại phần lớn dựa khác cấu trúc thành tế bào hai nhóm điểm khác biệt hai nhóm Cách thay cho nhuộm màu Gram sử dụng dung dịch kali hydroxit (KOH) % Lấy vòng đầy khuẩn lạc phát triển khuấy giọt dung dịch KOH Vi khuẩn Gram âm làm cho dung dịch trở nên sánh nhờn 30 s, tạo thành dây nhấc vòng cấy Có số cách hướng dẫn nhuộm màu Gram, tất phải theo bước đây: 12.3.2 Dung dịch 12.3.2.1 Yêu cầu chung Có thể dùng dung dịch bán sẵn Trong trường hợp này, phải tuân theo dẫn nhà sản xuất 12.3.2.2 Dung dịch tím tinh thể 12.3.2.2.1 Thành phần Tím tinh thể: 2,0 g Etanol (95 %): 20 ml Amoni oxalat (C2H8N2O4): 0,8 g Nước cất: 80 ml 12.3.2.2.2 Chuẩn bị Hịa tan tím tinh thể etanol amoni oxalat nước cất Trộn hai dung dịch để yên hỗn hợp 24 h trước sử dụng 12.3.2.3 Dung dịch iôt 12.3.2.3.1 Thành phần Iôt: 1,0 g Kali iodua (Kl): 2,0 g Nước: 100 ml 12.3.2.3.2 Chuẩn bị Hòa tan kali iodua 10 ml nước cất; thêm phần nhỏ iơt Sau hịa tan, thêm nước vạch mức 100 ml bình định mức 12.3.2.4 Dung dịch safranin LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 12.3.2.4.1 Thành phần Safranin: 0,25 g Etanol (95 %): 10 ml Nước: 100 ml 12.3.2.4.2 Chuẩn bị Hòa tan safranin dung dịch etanol sau trộn với nước cất 12.3.3 Kỹ thuật nhuộm Sau cố định lam kính màng vi khuẩn chuẩn bị từ dịch cấy từ 18 h đến 24 h, canh thang đục, phủ lên màng dung dịch tím tinh thể Để cho phản ứng xảy Tráng nhẹ lam kính để tư nghiêng nước vài giây Phủ lên lam kính dung dịch iơt Để cho phản ứng xảy Tráng nhẹ lam kính để tư thể nghiêng nước vài giây Rót cách nhẹ nhàng liên tục lớp mỏng dung dịch etanol (95 %) lên lam kính để nghiêng khoảng thời gian không 30 s khơng cịn màu tím Tráng nhẹ lam kính để tư nghiêng nước để loại etanol Phủ lên lam kính dung dịch safranin 10 s Tráng nhẹ lam kính để tư nghiêng nước Làm khơ lam kính 12.3.4 Diễn giải kết Kiểm tra lam kính vật kính dầu có độ phóng đại cao kính hiển vi Các tế bào vi khuẩn có màu xanh lam màu tím Gram dương (Gram +); có màu từ hồng thẫm đến đỏ Gram âm (Gram-) Đối với chủng khiết vài dạng vi khuẩn định, thu tế bào Gram dương Gram âm trường hiển vi CHÚ THÍCH Các tế bào vón đặc cho hình ảnh khơng đặc trưng 12.4 Sử dụng thử sinh hóa để nhận biết Có thể dùng thử sinh hóa có sẵn để nhận biết khuẩn lạc tách biệt Cần kiểm tra xác nhận thử thích hợp, nghiên cứu đánh giá tài liệu khoa học liên quan đến vi sinh vật thực phẩm 4) Việc kiểm tra quan trọng nhà sản xuất khơng có số liệu đánh giá thử Các phòng thử nghiệm cần phải thu chứng kiểm chứng cho mẻ với việc rõ chủng thử nghiệm Nhà sản xuất phải quy định chủng kiểm chứng phịng thử nghiệm sử dụng để kiểm tra việc bảo quản hiệu thử Các thử phải bao gồm tối thiểu phép thử sinh hóa quy định tiêu chuẩn cụ thể cần bổ sung phép thử khác 12.5 Sử dụng đầu dò nucleic Có thể dùng đầu dị nucleic có sẵn để nhận biết khuẩn lạc tách biệt Tuy nhiên, kiểm tra xác nhận đầu dò nucleic thích hợp, nghiên cứu đánh giá tài liệu khoa học liên quan đến vi sinh vật thực phẩm (xem ví dụ [23]) Việc kiểm tra quan trọng nhà sản xuất khơng có số liệu đánh giá đầu dò Các phòng thử nghiệm cần phải thu chứng kiểm chứng cho mẻ với việc rõ chủng thử nghiệm Nhà sản xuất phải quy định chủng kiểm chứng phòng thử nghiệm sử dụng để kiểm tra việc bảo quản hiệu đầu dò nucleic 12.6 Phương pháp huyết 4) Yêu cầu thông tin bổ sung từ tài liệu viện dẫn quốc gia, vùng quốc tế việc nhận biết vi sinh vật LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 12.6.1 Yêu cầu chung Khi cần thử khẳng định huyết thanh, tiến hành sau nhận dạng sinh hóa khuẩn lạc tách biệt 12.6.2 Các phép thử ngưng kết lam kính Các phản ứng kháng nguyên-kháng thể tạo tế bào kết thành mảng tạo thành khối kết hạt dày đặc Trong trường hợp khuẩn lạc thuộc họ Enterobacteriaceae phản ứng kháng nguyên “H” (nghĩa kháng nguyên lông) kháng huyết đồng đẳng tạo kết tụ bơng, phản ứng kéo theo kháng nguyên “O” (nghĩa kháng nguyên thân) tạo dày đặc hơn, thành mảng hạt Trước dính kết với kháng huyết thanh, cần thực phép thử để xác định xem tế bào vi khuẩn có dính kết hay khơng dung dịch natri clorua [3 % (phần khối lượng)] Nếu tế bào vi khuẩn có dính kết, chủng tự dính kết khơng cần phải dính kết với kháng huyết Có sẵn hai dạng kháng huyết thanh: kháng huyết đa giá phản ứng với vi sinh vật thuộc giống đặc hiệu với nhóm huyết thích hợp cho việc sàng lọc sơ kháng thể đơn giá, sử dụng để nhận dạng serovar đặc biệt Cần kiểm tra xác nhận phép thử ngưng kết lam kính thích hợp, nghiên cứu đánh giá tài liệu khoa học liên quan đến vi sinh vật thực phẩm 5) Khi sử dụng thuốc thử, cần sử dụng kiểm chứng dương tính âm tính thích hợp 12.6.3 Phép thử ngưng kết latex Phương pháp thử nhanh có sẵn thương mại, áp dụng hạt nhựa phủ kháng thể nhóm đặc hiệu (ví dụ Escherichia coli O157, xem TCVN 7686 (ISO 16654) Staphylococcus aureus xem TCVN 4830 (ISO 6888) Kháng nguyên dịch chiết phân tích theo dải thuốc thử latex Cần kiểm tra xác nhận phép thử ngưng kết latex thích hợp, nghiên cứu đánh giá tài liệu khoa học liên quan đến vi sinh vật thực phẩm 5) Phòng thử nghiệm cần phải thu chứng kiểm chứng cho mẻ với việc rõ chủng thử nghiệm Khi sử dụng thuốc thử, cần sử dụng kiểm chứng dương tính âm tính thích hợp 13 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ phương pháp thử sử dụng nhiệt độ ủ ấm, cần kết thu Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn này, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết Nêu rõ báo cáo thử nghiệm phép thử cần tiến hành phòng thử nghiệm chuẩn phép thử tiến hành, kết thu Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử Cũng phải bao gồm thông tin cần thiết để diễn giải kết Xác định độ không đảm bảo đo theo ISO/TS 19036, cần, cần nêu báo cáo thử nghiệm 14 Xác nhận tính hiệu lực phương pháp 14.1 Xác nhận tính hiệu lực phương pháp chuẩn Xác nhận tính hiệu lực phương pháp chuẩn ISO/TC34/SC nghiên cứu 14.2 Xác nhận tính hiệu lực phương pháp thay Xem ISO 16140 quy trình kỹ thuật để xác nhận tính hiệu lực phương pháp thay theo phương pháp chuẩn 14.3 Xác nhận tính hiệu lực phương pháp phịng thử nghiệm Xác nhận tính hiệu lực phương pháp phòng thử nghiệm ISO/TC34/SC nghiên cứu 5) Yêu cầu thông tin bổ sung từ tài liệu viện dẫn quốc gia, vùng quốc tế việc nhận biết vi sinh vật LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 15 Đảm bảo chất lượng kết quả/kiểm soát chất lượng hiệu 15.1 Kiểm soát chất lượng nội 15.1.1 Việc kiểm soát chất lượng nội bao gồm tất quy trình thực phịng thử nghiệm để đánh giá liên tục cơng việc phịng thử nghiệm Mục tiêu để đảm bảo thống kết theo ngày phù hợp với tiêu chí xác định 15.1.2 Chương trình kiểm tra định kỳ cần chứng minh độ dao động (giữa người phân tích, thiết bị vật liệu) kiểm soát Tất phép thử cần nằm phạm vi hoạt động phịng thử nghiệm Chương trình bao gồm: - sử dụng mẫu bổ sung vi sinh vật có mức nhiễm khác nhau, kể hệ sinh vật hệ mục tiêu; - sử dụng mẫu bổ sung vi sinh vật/nhiễm bẩn tự nhiên từ dải chất nền; - sử dụng chất chuẩn (kể thử nghiệm thành thạo vật liệu phối hợp); - thử nghiệm lặp lại; - đánh giá lặp lại kết thử nghiệm Khoảng thời gian lần kiểm tra bị ảnh hưởng chất phép thử thực phòng thử nghiệm tần số phép thử nghiệm Khuyến cáo phép thử nghiệm nên kết hợp với phép kiểm chứng để kiểm tra hiệu quả, 15.1.3 Trong trường hợp đặc biệt, phịng thử nghiệm thực phép thử đặc trưng Người ta cho thấy trường hợp đó, kết hợp chương trình kiểm soát chất lượng nội thực sơ đồ chứng minh hiệu thích hợp tiến hành song song với phép thử thích hợp 15.2 Các chủng chuẩn Xem ISO/TS 11133 việc trì chủng chuẩn 15.3 Đánh giá chất lượng bên ngồi (thử nghiệm thành thạo) Các phịng thử nghiệm cần định kỳ tham gia vào quy trình thử nghiệm thành thạo có liên quan đến phạm vi hoạt động Cần ưu tiên sơ đố kiểm tra hiệu sử dụng chất thích hợp Các phịng thử nghiệm cần đánh giá chất lượng từ bên ngồi khơng để đánh giá độ lệch phịng thử nghiệm cịn để kiểm tra tính hiệu lực hệ thống chất lượng tồn diện phịng thử nghiệm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn PHỤ LỤC A (Tham khảo) TÍNH CHẤT CỦA MỘT SỐ CHẤT TẨY RỬA Bảng A.1 – Tính chất số chất tẩy rửa Tác động chống lại Chất tẩy rửa Khử hoạt tính Vi khuẩn Vi Vi rút Chất Chất Chất Bào Virut Nước Nấm Gram Gram khuẩn không Protein tự tổng tẩy Da Mắt Phổi tử lipid cứng nấm lipid nhiên hợp rửa dương âm Hypoclorit + +++ +++ +++ ++ Rượu - +++ +++ +++ - Formaldehyt +++ +++ +++ + + +++ + + + C + V + + + + - a + + + + + + - b +++ +++ Glutaraldehyt +++ +++ +++ +++ +++ + + NA + + + lodopho +++ +++ +++ + + +++ + + + +++ + +++ tốt; ++ hợp lý; + không đáng kể; - khơng có; V tùy thuộc vào virut; C cation; A anion; NA khơng thích hợp; a 40 °C; b 20 °C; Độc tính Nguồn gốc: Tham khảo [17] LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 + + + + + + + NA +++ +++ +++ A + + - Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn PHỤ LỤC B (Quy định) XÁC ĐỊNH SỐ CÓ XÁC SUẤT LỚN NHẤT (MPN) Bảng B.1 – Các giá trị MPN phần mẫu thử giới hạn tin cậy 95 % dãy 10 ống, tính theo [29] Dãy 10 ống Số lượng ống dương tính Giới hạn 95% MPN Độ khơng đảm bảo chuẩn log10MPN Dưới Trên 0,11 0,435 0,02 0,75 0,22 0,308 0,06 0,89 0,36 0,252 0,11 1,11 0,51 0,220 0,19 1,38 0,69 0,198 0,28 1,69 0,92 0,184 0,40 2,10 1,20 0,174 0,55 2,64 1,61 0,171 0,75 3,48 2,30 0,179 1,03 5,16 Bảng B.2 – Các giá trị MPN phần mẫu thử giới hạn tin cậy 95 % dãy 15 ống, tính theo [29] Dãy 15 ống Số lượng ống dương tính Giới hạn 95% MPN Độ không đảm bảo chuẩn log10MPN Dưới Trên 0,07 0,434 0,01 0,49 0,14 0,307 0,04 0,57 0,22 0,251 0,07 0,69 0,31 0,218 0,12 0,83 0,41 0,196 0,17 0,98 0,51 0,179 0,23 1,15 0,63 0,167 0,30 1,33 0,76 0,157 0,37 1,55 0,92 0,150 0,47 1,80 10 1,10 0,144 0,57 2,11 11 1,32 0,141 0,70 2,49 12 1,61 0,139 0,86 3,02 13 2,01 0,142 1,06 3,82 14 2,71 0,155 1,35 5,45 Bảng B.3 – Các giá trị MPN phần mẫu thử giới hạn tin cậy 95 % dãy 20 ống, tính theo [29] Dãy 20 ống Số lượng ống dương tính Giới hạn 95% MPN Độ khơng đảm bảo chuẩn log10MPN Dưới Trên 0,05 0,434 0,01 0,36 0,11 0,307 0,03 0,42 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Dãy 20 ống Số lượng ống dương tính 0,16 0,251 0,05 0,50 0,22 0,218 0,08 0,60 0,29 0,195 0,12 0,69 0,36 0,178 0,16 0,80 0,43 0,165 0,20 0,91 0,51 0,155 0,25 1,03 0,59 0,147 0,31 1,16 10 0,69 0,140 0,37 1,30 11 0,80 0,134 0,44 1,46 12 0,92 0,130 0,51 1,65 13 1,05 0,126 0,59 1,85 14 1,20 0,123 0,69 2,10 15 1,39 0,121 0,80 2,40 16 1,61 0,121 0,93 2,77 17 1,90 0,122 1,09 3,29 18 2,30 0,127 1,30 4,08 19 3,00 0,141 1,58 5,67 Bảng B.4 – Các giá trị MPN phần mẫu thử giới hạn tin cậy 95 % dãy 25 ống, tính theo [29] Dãy 25 ống Số lượng ống dương tính Giới hạn 95% MPN Độ khơng đảm bảo chuẩn log10MPN Dưới Trên 0,04 0,434 0,01 0,29 0,08 0,307 0,02 0,33 0,13 0,251 0,04 0,40 0,17 0,217 0,07 0,47 0,22 0,195 0,09 0,54 0,27 0,178 0,12 0,61 0,33 0,165 0,16 0,69 0,39 0,154 0,19 0,77 0,45 0,146 0,23 0,86 10 0,51 0,139 0,27 0,96 11 0,58 0,133 0,32 1,06 12 0,65 0,128 0,37 1,16 13 0,73 0,123 0,42 1,28 14 0,82 0,119 0,48 1,41 15 0,92 0,116 0,54 1,55 16 1,02 0,113 0,61 1,70 17 1,14 0,111 0,69 1,88 18 1,27 0,109 0,78 2,09 19 1,43 0,108 0,88 2,33 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Dãy 25 ống Số lượng ống 20 dương tính 21 1,61 0,108 0,99 2,62 1,83 0,109 1,12 2,99 22 2,12 0,111 1,29 3,50 23 2,53 0,117 1,49 4,28 24 3,22 0,123 1,77 5,85 Bảng B.5 –Chỉ số MPN giới hạn tin cậy (95 %) sử dụng ba phần mẫu thử g (ml), ba phần mẫu thử 0,1 g (ml) ba phần mẫu thử 0,01 g (ml) Số lượng kết dương tính Chỉ sốa MPN Cấpb Giới hạn tin cậy (95 %)a,c Giới hạn Giới hạn 0,00 0,94 0 < 0,30 0 0,30 0,01 0,95 0,30 0,01 1 0,61 0,12 1,7 0,62 0,12 1,7 0,94 0,35 3,5 0 0,36 0,02 1,7 1 0,72 0,12 1,7 1,1 0,4 3,5 1 0,74 0,13 1 1,1 0,4 3,5 1,1 0,4 3,5 1,5 0,5 3,8 1,6 0,5 3,8 0 0,92 0,15 3,5 1,4 0,4 3,5 2 2,0 0,5 3,8 1,5 0,4 3,8 1 2,0 0,5 3,8 2 2,7 0,9 9,4 2 2,1 0,5 2 2,8 0,9 9,4 2 3,5 0,9 9,4 2,9 0,9 9,4 3,6 0,9 9,4 0 2,3 0,5 9,4 3,8 0,9 10,4 6,4 1,6 18,1 4,3 0,9 18,1 1 7,5 1,7 19,9 12 3 36 3 16 38 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Số lượng kết dương tính www.luatminhkhue.vn Chỉ sốa MPN 9,3 Cấpb Giới hạn tin cậy (95 %)a,c 1,8 36 15 38 2 21 40 3 29 99 3 24 99 3 46 198 3 110 20 400 3 > 110 a Nguồn gốc: tham khảo [27] b Xem Bảng B.6 c Giới hạn tin cậy đưa bảng có ý định cung cấp số khái niệm ảnh hưởng biến thiên thống kê kết Luôn ln có nguồn biến thiên khác mà đơi lúc có nghĩa Bảng B.6 – Giải thích cấp kết Cấp Định nghĩa Khi số lượng vi sinh vật sản phẩm MPN tìm được, kết số mà có khả cao thu Hầu có % trường hợp thu kết xảy xác suất nhỏ cấp Khi số lượng vi sinh vật sản phẩm MPN tìm được, kết số có khả để thu được, số xác suất thấp xảy cấp 1, tối đa có 1% khả thu kết xác suất thấp hơn, mà khả xác suất nhỏ cấp Khi số lượng vi sinh vật sản phẩm MPN tìm được, kết số mà có khả thu hơn, số xảy cấp 2, tối đa có 0,1 % khả thu kết xảy xác suất nhỏ cấp Khi số lượng vi sinh vật sản phẩm MPN tìm được, kết số mà có khả thu hơn, số xác suất thấp cấp Chỉ có khả 0,1 % thu kết cấp mà khơng có nhầm lẫn Trước bắt đầu kiểm tra, cần định xem cấp chấp nhận, là: cấp 1, kể 1, Khi định dựa sở kết quả, điều quan trọng chấp nhận kết cấp tối đa kết cấp Kết cấp cần xem xét cẩn thận Bảng – Các giá trị MPN gam mẫu giới hạn tin cậy 95 % (khi sử dụng năm phần mẫu thử g, năm phần mẫu thử 0,1 g năm phần mẫu thử 0,01 g) Số lượng ống cho phản ứng dương tính g 0,1 g 0,01 g 0 0 MPN (trên g) 95 % giới hạn tin cậy Dưới Trên < 0,2 < 0,1 0,7 0,2 < 0,1 0,7 0,4 < 0,1 1,1 0 0,2 < 0,1 0,7 1 0,4 < 0,1 1,1 1 0,4 < 0,1 1,1 1 0,6 < 0,1 1,5 0 0,5 < 0,1 1,3 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Số lượng ống cho phản ứng dương tính MPN (trên g) 0,7 2 95 % giới hạn tin cậy 0,1 1,7 0,7 0,1 1,7 0,9 0,2 2,1 0,9 0,2 2,1 1,2 0,3 2,8 0 0,8 0,1 1,9 1,1 0,2 2,5 1,1 0,2 2,5 1 1,4 0,4 3,4 1,4 0,4 3,4 1,7 0,5 4,6 3 1,7 0,5 4,6 0 1,3 0,3 3,1 1,7 0,5 4,6 1,7 0,5 4,6 1 2,1 0,7 6,3 2,6 0,9 7,8 2,2 0,7 6,7 2,6 0,9 7,8 2,7 0,9 3,3 1,1 9,3 4 3,4 1,2 9,3 0 2,3 0,7 3,1 1,1 8,9 4,3 1,5 11 3,3 1,1 9,3 1 4,6 1,6 12 6,3 2,1 15 4,9 1,7 13 2,3 17 2 9,4 2,8 22 7,9 2,5 19 11 3,1 25 14 3,7 34 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Số lượng ống cho phản ứng dương tính 3 MPN (trên g) 18 5 95 % giới hạn tin cậy 4,4 50 13 3,5 30 17 4,3 49 22 5,7 70 28 85 4 35 12 100 5 24 6,8 75 5 35 12 100 5 54 18 140 5 92 30 320 5 160 64 580 5 > 180 - - THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] BELL, C NEAVES, P and WILLIAMS, A.P Food microbiology and laboratory practice, Blackwell Science Ltd, Oxford, UK (2005) [2] ISO 9001, Quality management systems – Requirements [3] EA-Guidelines for the use of computers and computer systems in accredited laboratories, European cooperation for Accreditation (1998) [4] EA-4/10, Accreditation for microbiological laboratoties, European cooperation for Accreditation (2002) [5] Food microbiology program requirements, based upon the FLAWG document United States accreditation criteria for laboratories performing food microbiological testing, American Association for Laboratory Accreditation (A2LA) (1998) [6] AS 1766, Australian standard methods for the microbiological examination of food – Part 1: General techniques and procedures update [7] BUTTIAUX, R., BEERENS, H and TACQUET, A Manuel de techniques bacteriologiques, Editions Medicales Flammarion (4th edn.) [8] APHA Technical Committee on Microbiological Methods for Foods Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 2nd edition, Speck, M.L., editor Intersociety/Agency Committee on Microbiological Methods for Foods, American Public Health Association, Washington, DC, 1984 [9] CRUICKSHANK et a/., Medical microbiology, Vol 2,12th edn., Churchill-Livingstone, Edinburgh (1975) [10] D’AOUST, J.Y Psychrotrophy and foodborne Salmonella Int J Food Microbiol 1991, 13, pp 207-16 [11] D’AOUST, J.Y., SEWELL, A.M and MCDONALD, C Recovery of Salmonella spp From refrigerated pre-enrichment cultures of dry food composites, J AOAC Int 1995, 78, pp 1322-7 [12] D’AOUST, J.Y., SEWELL, A.M and GRECO, P Detection of Salmonella in dry foods using refrigerated pre-enrichment and enrichment broth cultures: summary of collaborative study J AOAC Int 1994, 77, pp 1490-1 [13] D’AOUST, J.Y., SEWELL, A.M and GRECO, P Detection of Salmonella in dry foods using refrigerated pre-enrichment and enrichment broth cultures – Interlaboratory study, J AOAC Int 1993, 76, pp 814-21 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn [14] DALSGAARD, A., GUARDABASSI, L, LUND, C, BAGGE, L and GRAVESEN, J Opbevaring af badevands-og drikkevandsprover ved 0-5 °C i et dogn medforer en signifikant reduktion i antal Escherichia coli og kimtal, Dansk Vet 2002 17, pp 1-9 [15] HARREWIJIN, G.A., and HARTOG, B.J Guidelines to perform microbiological analyses of food and food products (“Good laboratory practice”), De Ware(n)-Chemicus 1979, 9, pp 1-11 [16] MUIR, G.D., ed Hazards in the chemical laboratory, Royal Institute of Chemistry, London (1971) [17] Laboratory biosafety manual, WHO, Geneva, 1993 [18] LIGHTFOOT, N.F., MAIER, E.A (eds) Microbiological analysis of food and water – Guidelines for quality assurance Elsevier, Amsterdam, Netherlands (1998) [19] HARRIGAN, W.F and MCCANCE, M.E Laboratory methods in food and dairy microbiology, Academic Press (1976) [20] Laboratory safety at the Centers for Disease Control (CDC), NHEW Publication No CDC 798118, Atlanta, 1979 [21] Laboratory safety at the Centers of Disease Control, US Dept of Health, Education and Welfare (Public Health Service), Atlanta, 1979 [22] GERHARDT, P., MURRAY, R.G.E., COSTILLOW, R.N., NESTER E.W., KRIEG, N.R and PHILLIPS, G B eds Manual of methods for general bacteriology American Society for Microbiology, Washington, DC 20006 (1981) [23] GNANOU BESSE, N., AUDINET, N., BEAUFORT, A., COLIN, P., CORNU, M and LOMBARD, B A contribution to the improvement of Listeria monocytogenes enumeration in cold-smoked salmon Int J Food Microbiol 2004, 91, pp 119-27 [24] Microbiological testing laboratory accommodation guidelines, National Association of Testing Authorities, Australia [25] Microorganisms in foods – 1; Their significance and methods of enumeration, ICMSF, University of Toronto Press (1968 update) [26] SHAPTON, DA, BOARD, R.G and HAUSTER, W.J eds Safety in microbiology, Society for Applied Bacteriology Technical Series No and No 6, Academic Press (1972) [27] DE MAN, J.C MPN tables (corrected), Eur J Appl Biotechnol 1983, 17, pp 301-5 [28] COCHRAN, W.G Estimation of bacterial densities by means of the “Most Probable Number” Biometrics 1950, 6, pp 105-16 [29] HURLEY, M.A and ROSCOE, M.E Automated statistical analysis of microbial enumeration by dilution series, J Appl Bacteriol 1983, 55, pp 159-64 [30] NIEMELA, S Statistical evaluation of results from quantitative microbiological examinations, Nordic Committee on Food Analysis (NMKL) Report No 1, 2nd edition (1983) [31] TAYLOR, J The estimation of numbers of bacteria by tenfold dilution series, J Appl Bacteriol 1962, 25, pp 54-61 [32] HOLT, J.G., KRIEG, N.R., SNEATH, P.H.A., STALEY, J.T and WILLIAMS, ST Bergey’s manual of determinative bacteriology, 9th edn., Williams & Wilkins, Baltimore, MD, USA (1994) [33] KRIEG, N.R and HOLT, J.G Bergey’s manual of systematic bacteriology – Volume 1, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, USA (1984) [34] SNEATH, P.H.A., MAIR, N.S., SHARPE, M.E and HOLT, J.G Bergey’s manual of systematic bacteriology – Volume 2, 2nd edition, Springer, New York, NY, 2001 [35] KREGER-VAN RIJ, N.J.W The yeasts – A taxonomic study, 3rd edn., North-Holland Publishing Co., Amsterdam, Netherlands [36] THOMAS, H.A Bacterial densities from fermentation tube tests, J Am Water Works Assoc 1942, 34, pp 572-6 [37] ISO/IEC Guide 43-1, Proficiency testing by interlaboratory comparisons – Part 1; Development and operation of proficenciency testing schemes [38] ISO 6888 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn [39] ISO 9998, Water quality – Practices for evaluating and controlling microbiological colony count media used in water quality tests [40] ISO/TR 13843, Water quality – Guidance on validation of microbiological methods [41] ISO 14461-1, Milk and milk products – Quality control in microbiological laboratories – Part 1: Analyst performance assessment for colony counts [42] ISO 14461-2, Milk and milk products – Quality control in microbiological laboratories – Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps [43] ISO 16654, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the detection of Escherichia coli 0157 [44] ISO/IEC 17025:2005, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories [45] EN 12469, Biotechnology – Performance criteria for microbiological safety cabinets [46] ISO 17604, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Carcass sampling for microbiological analysis [47] ISO 18593, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for sampling techniques from surfaces using contact plates and swab methods [48] ISO Guide 99:1996, International vocabulary of basic and general terms in metrology [49] ISO/TC 34/SC N852, Supporting document on the change from two to one plate per dilution for colony-count techniques (revision of ISO 7218), June 2007, Marie Cornu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162