VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - HƯỚNG DẪN CHUẨN BỊ VÀ SẢN XUẤT MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8128-2 : 2009 ISO/TS 11133-2 : 2003 VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - HƯỚNG DẪN CHUẨN BỊ VÀ SẢN XUẤT MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY - PHẦN 2: CÁC HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH VỀ THỬ HIỆU NĂNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Microbiology of food and animal fedding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performence testing of culture media Lời nói đầu TCVN 8128-2 : 2009 hoàn toàn tương đương với ISO/TS 11133-2 : 2003; TCVN 8128-2 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 8128 (ISO/TS 11133), gồm tiêu chuẩn sau: - TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi Hướng dẫn chuẩn bị sản xuất môi trường nuôi cấy - Phần 1: Hướng dẫn chung đảm bảo chất lượng việc chuẩn bị môi trường ni cấy phịng thử nghiệm; - TCVN 8128-2 : 2009 (ISO/TS 11133-2:2003), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi Hướng dẫn chuẩn bị sản xuất môi trường nuôi cấy - Phần 2: Các hướng dẫn thực hành thử hiệu môi trường nuôi cấy Lời giới thiệu Điều sử dụng mơi trường ni cấy có chất lượng xác định để tiến hành phép phân tích vi sinh thực phẩm xác thực Đối với tất môi trường nêu phương pháp chuẩn hóa để xác định nguyên tắc chấp nhận tối thiểu cần đảm bảo độ tin cậy môi trường Khuyến cáo việc xác định đặc tính hiệu môi trường nuôi cấy, phép thử thực phù hợp với quy định tiêu chuẩn Áp dụng cho: a) môi trường khô môi trường chuẩn bị để dùng ngay, có bán sẵn; b) môi trường chuẩn bị từ thành phần phòng thử nghiệm Việc xây dựng chuẩn mực hiệu tối thiểu chấp nhận rộng rãi môi trường cần dẫn đến sản phẩm bán sẵn có chất lượng ổn định giảm quy mơ thử nghiệm cần thiết phịng thử nghiệm Ngoài nguyên tắc chấp nhận tối thiểu đo phương pháp xác định tiêu chuẩn tất phịng thử nghiệm sử dụng để đánh giá khả sản xuất, tính chọn lọc và/hoặc đặc tính lựa chọn mơi trường ni cấy Trong phép phân tích vi sinh thực phẩm thức ăn chăn ni yêu cầu tiêu chuẩn có ưu tiên đánh giá chất lượng môi trường VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - HƯỚNG DẪN CHUẨN BỊ VÀ SẢN XUẤT MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY - PHẦN 2: CÁC HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH VỀ THỬ HIỆU NĂNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Microbiology of food and animal fedding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performence testing of culture media Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa chuẩn mực phương pháp kiểm tra hiệu môi trường nuôi cấy Tiêu chuẩn áp dụng cho: - tổ chức thương mại sản xuất và/hoặc phân phối môi trường sử dụng mơi trường hồn ngun bán hồn chỉnh mơi trường kho cho phịng thử nghiệm vi sinh; - tổ chức phi thương mại cung cấp môi trường cho bên thứ ba; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - phòng thử nghiệm chuẩn bị môi trường nuôi cấy để họ sử dụng đánh giá hiệu môi trường nuôi cấy Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi Hướng dẫn chuẩn bị tạo môi trường nuôi cấy - Phần 1: Các hướng dẫn chung đảm bảo chất lượng cho việc chuẩn bị mơi trường ni cấy phịng thử nghiệm Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa nêu TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009) Chuẩn mực kiểm soát chất lượng thường xuyên 4.1 Chuẩn mực chất lượng chung 4.1.1 Chất lượng môi trường nuôi cấy Chất lượng môi trường nuôi cấy phụ thuộc vào chất lượng thành phần bản, công thức pha chế đúng, chất lượng quy trình chuẩn bị, việc loại trừ nhiễm bẩn vi khuẩn điều kiện đóng gói bảo quản thích hợp (xem TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009)] Nhà sản xuất người sản xuất phịng thử nghiệm phải tn thủ đặc tính lý-hóa mơi trường quy định tiêu chuẩn tương ứng Ngoài ra, việc đánh giá chất lượng phải đảm bảo môi trường nuôi cấy phù hợp với khuyến cáo nêu, gồm: - lượng phân phối và/hoặc độ dày; - bề ngồi, màu sắc tính đồng nhất; - độ đông đặc; - độ ẩm; - độ pH; - khả đệm; - nhiễm bẩn vi khuẩn Các thành phần riêng rẽ thành phần bổ sung chọn lọc thành phần dinh dưỡng phải thực quy trình đánh giá chất lượng thích hợp 4.1.2 Chất lượng thành phần mơi trường Môi trường nuôi cấy mô tả tiêu chuẩn đánh giá thỏa mãn, nhiên tính biến động chất lượng chúng mà chấp nhận cho nhà sản xuất mơi trường thay đổi nồng độ số thành phần sinh học bản, như: - loại pepton chất chiết thịt chất chiết nấm men có khác đặc tính dinh dưỡng chúng; - thạch khác cường độ đông đặc; - chất đệm; - muối mật, chất chiết mật destoxycholat, thuốc nhuộm kháng khuẩn, tùy thuộc vào đặc tính chọn lọc chúng; - kháng sinh phụ thuộc vào hoạt tính chúng 4.2 Chuẩn mực chất lượng vi sinh 4.2.1 Yêu cầu chung Các phép thử hiệu vi sinh phải thực mẫu đại diện mẻ sản phẩm cuối 4.2.2 Nhiễm bẩn vi khuẩn Phải kiểm tra lượng sản phẩm thích hợp tùy thuộc vào cỡ mẻ môi trường, nhiễm bẩn vi sinh cách ủ điều kiện thích hợp Các giới hạn đích phần trăm đĩa nhiễm bẩn hộp đựng môi trường lỏng cần xây dựng cho môi trường nhà sản xuất LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn quy định Nhà sản xuất cần đưa yêu cầu dựa thành phần môi trường, giới hạn xử lý kiểu loại bao gói CHÚ THÍCH 1: Các mẫu thử nghiệm cần đĩa ống, % số lượng đĩa ống từ giai đoạn đĩa ống % số lượng đĩa ống từ giai đoạn kết thúc rót phân phối mơi trường Các đĩa ống cần ủ 18 h 37 oC điều kiện ủ sử dụng hàng ngày môi trường theo tiêu chuẩn cụ thể CHÚ THÍCH 2: Các phương án lấy mẫu thống kê, xem TCVN 7790-1 (ISO 2859-1) 4.2.3 Phát triển 4.2.3.1 Yêu cầu chung Để đánh giá mẻ mơi trường ni cấy hồn chỉnh, thành phần dinh dưỡng thành phần bổ sung, việc phát triển phải đánh giá phù hợp bởi: a) định lượng, b) bán định lượng, c) phương pháp định tính Các đánh giá, định lượng, bán định lượng định tính cần thực phương pháp quy định tiêu chuẩn kỹ thuật khác chấp nhận Để diễn giải kết phép thử nghiệm, cần so sánh lượng phát triển môi trường thử nghiệm với lượng môi trường kiểm chứng Việc sử dụng môi trường kiểm chứng bắt buộc phép thử định lượng (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) Đối với phép thử bán định lượng định tính, việc sử dụng môi trường kiểm chứng (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) môi trường nuôi cấy cho phản ứng "dương tính" giúp cho việc diễn giải kết Mơi trường đối chứng phải có chất lượng tốt biết, chọn từ mẻ sản xuất, hoặc, so sánh tính ổn định lâu dài, mẻ sản xuất, mẻ nhà cung cấp khác môi trường sẵn để sử dụng v.v Ngoài ra, phát triển chủng đích phải điển hình vẻ bề ngồi, kích thước hình thái học khuẩn lạc phát triển chủng khơng phải đích phải bị ức chế toàn phần phần 4.2.3.2 Năng suất Cấy chất cấy thích hợp (5.2.1.1) dịch cấy làm việc vi sinh vật thử nghiệm xác định vào môi trường nuôi cấy lỏng, bán đặc đặc, sử dụng dụng cụ thích hợp Năng suất phải đạt giới hạn tối thiểu xác định (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) Đối với phương pháp định lượng, hệ số suất PR xác định sau: (1) Trong Ns số đếm khuẩn lạc tổng số thu môi trường nuôi cấy phép thử (thu từ nhiều đĩa); N0 số đếm khuẩn lạc tổng số thu môi trường nuôi cấy đối chứng thu từ nhiều đĩa phải ≥100 cfu CHÚ THÍCH: Hệ số suất mơi trường khơng chọn lọc 0,7 vi sinh vật phát triển dễ dàng mơi trường PR vi sinh vật đích mơi trường chọn lọc phải 0,1 Các giá trị thơng thường đạt được, nhiên chuẩn mực khắt khe chấp nhận hỗn hợp cụ thể môi trường vi sinh vật thử nghiệm (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) Đối với phương pháp bán định lượng, ghi lại kết vùng liên tiếp đĩa kỹ thuật đo đặc điểm sinh thái để thu số phát triển G i, số thay đổi theo mơi trường ni cấy Do đó, cần so sánh chúng với số trước và/hoặc G i môi trường kiểm chứng để chắn dao động không bị vượt Dải dao động dự kiến mơi trường ni cấy thiết lập có đủ kinh nghiệm phương pháp Các đánh giá định tính phải thực mắt cách chia phần tỷ lệ sinh trưởng LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn 4.2.3.3 Tính chọn lọc Để đánh giá tính chọn lọc, cấy dịch cấy thích hợp (5.2.1.2) vi sinh vật thử nghiệm xác định vào cấy môi trường nuôi cấy chọn lọc mơi trường kiểm chứng, dùng dụng cụ thích hợp Tính chọn lọc phải đạt giá trị xác định (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) Hệ số chọn lọc SF (2), tính sau: SF = D0 - Ds (2) Trong D0 độ pha loãng cao cho thấy phát triển 10 khuẩn lạc môi trường kiểm chứng; N0 độ pha loãng cao cho thấy phát triển tương tự môi trường thử nghiệm; SF, D0 DS biểu thị đơn vị log10 CHÚ THÍCH: SF vi sinh vật khơng phải đích mơi trường chọn lọc Các giá trị thơng thường đạt Tuy nhiên chuẩn mực khắt khe chấp nhận hỗn hợp cụ thể môi trường vi sinh vật thử nghiệm (xem tiêu chuẩn cụ thể Phụ lục B) Đối với phương pháp định lượng bán định lượng, phát triển chủng đích phải bị ức chế tồn phần phần 4.2.4 Đặc trưng vật lý sinh hóa (tính chọn lọc tính đặc thù) Các đặc điểm hình thái chẩn đoán khuẩn lạc với mức độ tính chọn lọc cần thiết lập để thu tranh tồn diện hiệu mơi trường Các đặc trưng tính đặc thù phải xác định phải đạt Đối với mơi trường phân biệt chất lượng đặc trưng vật lý/sinh hóa vi sinh vật đích mức độ ức chế sinh vật đích cần xác định chủng thử nghiệm thích hợp 4.2.5 Đặc trưng thử nghiệm kháng khuẩn Tác dụng kháng khuẩn kháng sinh phụ thuộc vào đặc trung khuếch tán chúng thạch ảnh hưởng đối kháng thành phần có mặt Mơi trường phải kiểm tra có mặt chất kháng khuẩn mẫu thực phẩm theo phương pháp chuẩn 4.3 Đánh giá hiệu diễn giải kết Mẻ môi trường nuôi cấy cho thấy thỏa mãn yêu cầu tất vi sinh vật thử nghiệm sử dụng thể yêu cầu nêu Mẻ môi trường chấp nhận đáp ứng hai chuẩn mực chung chất lượng vi sinh vật Phương pháp sử dụng thử nghiệm hiệu môi trường ni cấy 5.1 u cầu chung Các ví dụ phép thử định tính, bán định lượng định lượng môi trường nuôi cấy đặc môi trường lỏng mô tả Trong phần lớn trường hợp, kỹ thuật định tính bán định lượng phòng thử nghiệm sử dụng đáp ứng yêu cầu thử nghiệm hiệu mẻ môi trường nuôi cấy Đối với trường hợp đặc biệt, ví dụ: đánh giá mơi trường nhà sản xuất v.v phương pháp thử định lượng phải phòng thử nghiệm sử dụng thực Sự hiểu biết kỹ thuật vi sinh giả định đó, phương pháp không đưa chi tiết Các vi sinh vật thử nghiệm thích hợp liệt kê Phụ lục B [xem TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009)] CHÚ THÍCH: Chú ý sau tiêu chuẩn riêng lẻ soát xét tiêu chuẩn phát định lượng vi sinh vật cụ thể nhóm vi sinh vật mơ tả vi sinh vật có liên quan cần sử dụng, với nguyên tắc chấp nhận loại môi trường nuôi cấy tiêu chuẩn Trong môi trường lỏng, tương tác dẫn đến phát triển thành công vi sinh vật phức tạp hơn, việc xác định phương pháp thử hiệu xác so với mơi trường đặc Để phân lập thành cơng vi sinh vật đích phương pháp nhiều giai đoạn, ví dụ: phát Salmonella, giai đoạn phát triển xảy vài tương tác phức tạp Do đó, phép thử kiểm chứng sử LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn dụng mẫu thích hợp, dịch cấy chất chuẩn cần thiết lập, cho thể suất độ nhạy tương ứng toàn phương pháp Điều bổ sung cho việc chứng tỏ môi trường thành phần phù hợp với mục đích sử dụng 5.2 Vi sinh vật thử nghiệm Các chủng đối chứng thích hợp vi sinh vật đích (năng suất) khơng phải đích (tính chọn lọc) mơi trường ni cấy nêu Phụ lục B Các vi sinh vật thử nghiệm cần đáp ứng yêu cầu 5.2.2 TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1:2009), ví dụ: phát triển khỏe, phát triển yếu, chủng bị tổn thương bất hoạt sinh hóa Hướng dẫn bảo quản trì chủng kiểm chứng nêu Phụ lục B TCVN 81281 : 2009 (ISO/TS 11133-1 : 2009) 5.2.1 Chuẩn bị dịch cấy làm việc Các dịch cấy làm việc phải chuẩn bị dịch cấy pha tĩnh khiết canh thang không chọn lọc từ dịch cấy gốc đối chứng Có thể sử dụng kỹ thuật khác nhau, phải đảm bảo độ khiết chất cấy, việc chuẩn hóa chúng để chúng sử dụng cho giai đoạn CHÚ THÍCH: Chất cấy đơng khơ sử dụng cho thấy vi sinh vật sống khoảng thời gian chọn 5.2.1.1 Chất cấy làm việc để thử nghiệm suất Đối với phép thử định lượng môi trường đổ đĩa vi sinh vật yêu cầu, sử dụng chất cấy chứa khoảng 102 cfu Đối với phép thử bán định lượng định lượng môi trường đổ đĩa vi sinh vật yêu cầu, sử dụng chất cấy chứa khoảng 103 cfu đến 104 cfu Đối với phép thử suất môi trường lỏng, sử dụng chất cấy chứa khoảng 10 cfu đến 100 cfu 5.2.1.2 Dịch cấy làm việc để thử nghiệm tính chọn lọc Đối với phép thử tính chọn lọc mơi trường ni cấy, cấy huyền phù vi sinh vật khơng phải đích chứa 104 cfu đến 106 cfu lên đĩa vào ống môi trường 5.2.1.3 Điều kiện ủ Ủ môi trường cấy theo điều kiện mô tả tiêu chuẩn tương ứng bảng thích hợp Phụ lục B 5.3 Phương pháp môi trường nuôi cấy đặc 5.3.1 Phương phát đổ đĩa định lượng 5.3.1.1 Yêu cầu chung Đây phương pháp chung thích hợp cho nhiều mơi trường ni cấy đặc Phương pháp khơng thích hợp để thử nghiệm số loại nấm mốc 5.3.1.2 Cách tiến hành - Sử dụng dịch cấy làm việc 5.2.1 - Chọn số lượng đĩa thích hợp đại diện cho mẻ cần thử nghiệm đảm bảo bề mặt đĩa đủ khô Các đĩa đựng môi trường kiểm chứng cần chuẩn bị theo cách tương tự [xem 4.4.4 TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1 : 2009] - Dàn bề mặt đĩa thử đĩa kiểm chứng chất cấy dịch cấy làm việc pha loãng số đếm nằm giới hạn khuyến cáo 5.2.1 CHÚ THÍCH 1: Có thể sử dụng phương pháp nhỏ giọt bề mặt Miler-Misra cải biến hệ thống nhỏ giọt khác đĩa xoắn ốc CHÚ THÍCH 2: Cũng sử dụng phương pháp rót đĩa cho mơi trường ni cấy thường sử dụng để định lượng theo cách - Ủ đĩa điều kiện thích hợp nêu tiêu chuẩn riêng - Đếm khuẩn lac có mặt đĩa từ giọt thích hợp Đánh giá kích thước hình thái khuẩn lạc LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 5.3.1.3 Tính tốn Dựa vào thể tích dàn đĩa hệ số pha lỗng, tính số đếm trung bình mơi trường Đối với trường hợp dùng phương pháp nhỏ giọt số giọt thể tích chúng phải xem xét 5.3.1.4 Diễn giải kết Để diễn giải kết quả, hệ số suất PR (4.2.3.2) thích hợp hệ số chọn lọc SF (4.2.3.3) cần tính 5.3.2 Phương pháp cấy vạch bán định lượng dựa đo đặc điểm sinh thái 5.3.2.1 Yêu cầu chung Phương pháp cấy vạch thích hợp cho phép thử hiệu môi trường nuôi cấy lỏng đặc phương pháp bán định lượng Do số phát triển cho thấy liên quan đến phép thử bổ sung môi trường nuôi cấy đặc Khi sử dụng phương pháp mơi trường ni cấy thử nghiệm phải làm khơ tồn quy trình cần chuẩn hóa cho kết thu mẻ khác so sánh 5.3.2.2 Cách tiến hành - Các đĩa thạch chuẩn bị theo cách thông thường với khoảng 15 ml thạch Các mơi trường sử dụng cho kỹ thuật rót đĩa, ví dụ Thạch Đếm Đĩa (PCA) thử nghiệm phủ bề mặt lên môi trường đông đặc - Sử dụng dịch cấy làm việc 5.2.1 - Các đĩa cấy vạch Hình sử dụng que cấy vịng µl Bốn đường song song vạch que cấy vòng cách khoảng 0,5 cm toàn vùng A Cấy vạch lặp lại cho vùng B vùng C kết thúc vùng D với đường đơn Khuôn mẫu sử dụng đĩa để thuận tiện cho cấy vạch xác - Thời gian ủ nhiệt độ ủ nêu phương pháp chuẩn sử dụng CHÚ THÍCH: Chỉ sử dụng que cấy vịng, khơng dùng que cấy thẳng để nhúng vào dịch cấy Vòng cấy phải làm đầy dịch cấy Lượng chất lỏng dư thừa loại cách ấn phần rộng vòng ba lần vào mép hộp chứa Khi cấy vạch vào đĩa góc tạo thành vòng cấy bề mặt thạch phải từ 20o đến 30o Tạo sức ép vòng cấy vào bề mặt thạch cấy vạch nhanh ổn định khắp bề mặt thạch Nhúng vòng que cấy vào dịch cấy mà khơng làm sủi bọt và/hoặc bọt khí bề mặt canh thang Thông thường sử dụng vòng que cấy để cấy cho tất phần A đến D mà không cần phải hơ lửa sau phần cấy vạch Trong số trường hợp, số phát triển G i thấp dự đốn cho thấy có chênh lệch rõ, thay khử trùng que cấy lần cấy vạch phần A B LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Cơng ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn Hình - Mẫu cấy phương pháp cấy vạch cải biến góc tạo vịng que cấy 5.3.2.3 Tính tốn Sau ủ, đánh giá vẻ bề ngồi kích thước khuẩn lạc cường độ phát triển tính số phát triển Gi Mỗi đường vạch cấy cho thấy phát triển ghi điểm Điểm tối đa đĩa 16 Nếu phát triển dọc theo nửa chiều dài vạch ghi 0,5 Vạch khơng có khuẩn lạc phát triển phát triển (ít nửa chiều dài vạch ấy) ghi Tổng cộng điểm thu số phát triển Gi Ví dụ: phát triển thu phần A B nửa phần C Gi cần phải 10 5.3.2.4 Diễn giải kết Chỉ số phát triển Gi chủng đích phải để kết luận mơi trường chấp nhận Trường hợp môi trường không chọn lọc G i thường cao Ngồi ra, phát triển chủng đích phải điển hình phát triển chủng khơng phải đích phải bị ức chế toàn phần phần 5.3.3 Phương pháp cấy vạch định tính 5.3.3.1 Yêu cầu chung Phương pháp thích hợp để thử nghiệm hiệu bổ sung môi trường nuôi cấy đặc Phương pháp định tính điểm ghi biểu thị 5.3.3.2 Cách tiến hành - Các đĩa thạch chuẩn bị theo cách thông thường với khoảng 15 ml thạch Môi trường thường sử dụng cho kỹ thuật rót đĩa, ví dụ Thạch Đếm Đĩa (PCA), thử nghiệm phủ bề mặt lên môi trường đông đặc - Sử dụng dịch cấy làm việc 5.2.1 - Các vi sinh vật thử nghiệm cấy vạch với đường thẳng song song que cấy vòng µl lên bề mặt môi trường thử nghiệm Một số vi sinh vật thử nghiệm cấy vạch đĩa mà không giao CHÚ THÍCH: Có thể sử dụng kỹ thuật cấy vạch chuẩn hóa khác - Thời gian ủ nhiệt độ ủ nêu phương pháp chuẩn sử dụng 5.3.3.3 Diễn giải kết Đánh giá phát triển đĩa thạch sau ủ sau: - tương ứng với không phát triển; - tương ứng với phát triển yếu; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - tương ứng với phát triển tốt Các vi sinh vật đích phải bề ngồi, kích thước hình thái khuẩn lạc điển hình Sự phát triển chủng khơng phải đích phải bị ức chế tồn phần phần (0 1) 5.4 Phương pháp môi trường nuôi cấy lỏng 5.4.1 Yêu cầu chung Để xác định suất mơi trường lỏng phải sử dụng chất cấy thích hợp Các phương pháp định tính, bán định lượng định lượng mơ tả đánh giá suất tính chọn lọc Các phương pháp phải ghi lại lượng vi sinh vật phát triển sau thời gian ủ thích hợp đổ đĩa cấy vạch từ môi trường lỏng sang môi trường thạch định lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (cfu) tính điểm từ mơi trường lỏng Đối với phương pháp định tính mơi trường lỏng cần đánh giá mắt phản ứng đặc trưng 5.4.2 Phương pháp pha loãng định lượng vi sinh vật đích vi sinh vật khơng phải đích Phương pháp thích hợp để đánh giá môi trường nuôi cấy dịch pha loãng 5.4.2.1 Cách tiến hành - Chọn lượng ống thích hợp phần 10 ml mẻ môi trường lỏng cần thử nghiệm - Cấy vi sinh vật đích Cấy lượng nhỏ canh thang thử nghiệm canh thang kiểm chứng vi sinh vật thử nghiệm (ví dụ: 10 cfu đến 100 cfu vào ống; để chuẩn bị chất cấy, xem 5.2.1) trộn - Cấy vi sinh vật khơng phải đích Cấy số lượng lớn vào canh thang thử nghiệm canh thang kiểm chứng sinh vật thử nghiệm (> 1000 cfu vào ống; để chuẩn bị chất cấy, xem 5.2.1) trộn - Cấy hỗn hợp vi sinh vật đích vi sinh vật khơng phải đích: Để thử nghiệm dịch cấy hỗn hợp môi trường chọn lọc, cấy lượng nhỏ vi sinh vật đích vào canh thang thử nghiệm canh thang kiểm chứng (ví dụ: 10 cfu đến 100 cfu vào ống; để chuẩn bị chất cấy, xem 5.2.1) cấy vào ống nghiệm lượng lớn vi sinh vật khơng phải đích (> 000 cfu vào ống; để chuẩn bị chất cấy, xem 5.2.1) trộn - Cấy vi sinh vật đích vi sinh vật khơng phải đích vào dịch pha lỗng mơi trường vận chuyển Cấy vi sinh vật thử nghiệm vào dịch pha lỗng (ví dụ: 100 cfu đến 000 cfu vào ống; để chuẩn bị chất cấy, xem 5.2.1) trộn - Thời gian ủ nhiệt độ ủ nêu phương pháp chuẩn sử dụng Cần ủ dịch pha loãng 45 nhiệt độ phịng đổ đĩa Mơi trường vận chuyển cần ủ nhiệt độ thích hợp khoảng thời gian theo sử dụng thông thường đổ đĩa - Lấy lượng chất lỏng pha loãng từ canh thang sau ủ dàn vào đĩa thạch không ức chế 5.3.1, cần CHÚ THÍCH 1: Có thể sử dụng phương pháp nhỏ bề mặt Miles-Misra cải biến hệ thống nhỏ giọt khác đĩa xoắn ốc CHÚ THÍCH 2: Để thử nghiệm dịch cấy trộn, nên dàn tốt đĩa thạch không chọn lọc để phân biệt vi sinh vật dịch cấy trộn (ví dụ: Thạch Đếm Đĩa có MUG để đếm Escherichia coli Salmonella spp.) Khi phân biệt dịch cấy trộn mơi trường thạch khơng chọn lọc, cần sử dụng môi trường thạch chọn lọc với điều kiện hiệu môi trường kiểm tra 5.4.2.2 Đọc, tính diễn giải kết Sau ủ, đếm khuẩn lạc vi sinh vật đích vi sinh vật khơng phải đích, trường hợp dịch cấy trộn phân biệt loại khác Tính diễn giải kết theo mục đích việc kiểm tra a) diễn giải so sánh giữ canh thang kiểm chứng canh thang thử nghiệm sử dụng giá trị P R SF 4.2.3.2 4.2.3.3: - vi sinh vật đích PR không nhỏ 0,1 (sự khác việc phát triển không vượt mức khuếch đại); - vi sinh vật đích SF phải 2; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - hỗn hợp chủng cấy từ vi sinh vật đích khơng bị ức chế vi sinh vật khơng phải đích, nghĩa vi sinh vật đích ln ln trội b) trường hợp khác, việc đạt số đếm tối thiểu cố định vi sinh vật đích số đếm tối da vi sinh vật khơng phải đích thích hợp hơn: - vi sinh vật đích phải đạt 106 cfu/ml đến 108 cfu/ml; - vi sinh vật khơng phải đích không vượt 104 cfu/ml canh thang chọn lọc; c) dịch pha lỗng mơi trường vận chuyển yêu cầu số lượng vi sinh vật đích và/hoặc vi sinh vật khơng phải đích khơng giảm không cao Số lượng vi sinh vật sau ủ môi trường phải khoảng ± 50 % số đếm ban đầu CHÚ THÍCH: Chất lượng mơi trường lỏng với hy vọng có đặc tính phát triển tối ưu cho thấy thích hợp phần đầu pha sinh trưởng Quan sát độ dài pha log phát triển phần đầu pha log cho thấy hầu hết thông tin độ nhạy suất tính chọn lọc vi sinh vật đích vi sinh vật khơng phải đích canh thang thử nghiệm canh thang kiểm chứng 5.4.3 Phương pháp ống đơn bán định lượng dùng cho vi sinh vật đích, khơng phải đích hỗn hợp 5.4.3.1 Cách tiến hành - Chọn số ống phần 10 ml mẻ thử nghiệm (xem 4.2.2) - Cấy vi sinh vật đích khơng phải đích làm dịch cấy hỗn hợp: Cấy vào ống canh thang thử nghiệm khoảng 10 cfu đến 100 cfu vi sinh vật đích cấy vào ống lượng vi sinh vật khơng phải đích cao (> 1000 cfu) trộn - Cấy vi sinh vật khơng phải đích: Cấy vào ống nghiệm canh thang thử nghiệm lượng vi sinh vật có số đếm cao (> 1000 cfu) trộn - Thời gian ủ nhiệt độ ủ nêu phương pháp chuẩn sử dụng - Lấy 10 µl từ dịch cấy hỗn hợp cấy vạch lên đĩa đựng môi trường chọn lọc cụ thể vi sinh vật đích - Lấy que cấy vịng (10 µl) từ dịch cấy vi sinh vật khơng phải đích cấy vạch lên đĩa đựng mơi trường khơng chọn lọc (ví dụ: TSA) - Ủ hai đĩa theo điều kiện thời gian nhiệt độ thích hợp tiêu chuẩn riêng lẻ 5.4.3.2 Tính diễn giải kết Năng suất canh thang thử nghiệm lỏng thỏa mãn khuẩn lạc 10 khuẩn lạc vi sinh vật đích có phát triển đĩa thạch chọn lọc Tính chọn lọc cang thang thử nghiệm lỏng thỏa mãn khơng có khuẩn lạc vi sinh vật khơng phải đích xuất đĩa thạch không chọn lọc 5.4.4 Phương pháp ống đơn định tính 5.4.4.1 Yêu cầu chung Phương pháp thích hợp để thử nghiệm hiệu môi trường nuôi cấy lỏng Phương pháp định tính điểm ghi để biểu thị Mơi trường đục, ví dụ: canh thang tetrathionat, không thử nghiệm phương pháp 5.4.4.2 Cách tiến hành - để thử nghiệm hiệu mơi trường ni cấy lỏng dùng vịng cấy µl cấy dịch cấy làm việc trực tiếp vào môi trường - thời gian ủ nhiệt độ ủ nêu phương pháp chuẩn sử dụng 5.4.4.3 Diễn giải kết Việc đánh giá định tính phải thực trực quan dùng điểm ghi phát triển, ví dụ: đến 2: - tương ứng với không đục; - tương ứng với đục; LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn - tương ứng với đục; Các vi sinh vật đích phải CHÚ THÍCH 1: Đơi phát triển vi sinh vật quan sát tập trung tế bào/lắng đọng đáy ống chai Trong trường hợp này, lắc cẩn thận giúp cho việc đánh giá diễn giải kết tốt CHÚ THÍCH 2: Các đặc trưng khác sinh khí, đổi màu đánh giá phương pháp Hệ thống tài liệu kết thử nghiệm 6.1 Thông tin từ nhà sản xuất Nhà sản xuất nhà cung cấp môi trường nuôi cấy phải cung cấp, có yêu cầu, đặc trưng phát triển vi sinh vật cụ thể thông tin chung liên quan đến mẻ môi trường nuôi cấy cụ thể, xem 4.1.1 TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1 : 2009) 6.2 Truy nguyên nguồn gốc Tất số liệu từ thử nghiệm hiệu thông thường cần lập văn theo cách thích hợp giữ khoảng thời gian đủ theo hệ thống chất lượng sử dụng Khuyến cáo sử dụng biểu mẫu kiểm soát tài liệu đánh giá kết thử nghiệm (xem Phụ lục A) Phụ lục A (Tham khảo) Ví dụ biểu mẫu ghi kết thử nghiệm môi trường nuôi cấy phịng thử nghiệm chuẩn bị Bảng A.1 - Ví dụ biểu mẫu Biểu mẫu kiểm soát thử nghiệm chất lượng nội môi trường nuôi cấy Mơi trường ni cấy: Thể tích chuẩn bị: Ngày rót: Số mẻ nội bộ: Mơi trường khơ (và mã số): Người cung cấp: Mẻ Lượng: Ngày/ký tên: Bổ sung: Người cung cấp: Mẻ Lượng: Ngày/ký tên: Chi tiết trình Kiểm sốt chất lượng tiêu vật lý Giá trị pH chấp nhận: pH đo được: Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Khiếm khuyết: Ngày/ký tên: Lượng rót và/hoặc bề dày dự kiến Quan sát được: Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Khiếm khuyết: Ngày/ký tên: Màu sắc dự kiến Quan sát Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Khiếm khuyết: Ngày/ký tên: Độ trong/có mặt giả quang dự kiến: Quan sát Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Khiếm khuyết: Ngày/ký tên: Độ ổn định gel/ổn định/độ ấm dự kiến: Quan sát Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Khiếm khuyết: Ngày/ký tên: Kết quả: Chất lượng xác nhận: Số lượng đĩa/ống bị nhiễm bẩn: Ngày/ký tên: Nhiễm bẩn vi khuẩn Số lượng đĩa ống thử nghiệm: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Biểu mẫu kiểm soát thử nghiệm chất lượng nội môi trường ni cấy Ủ: Có  Khơng  Phát triển vi sinh vật - Năng suất Phương pháp kiểm soát: Định lượng  Định tính  Chủng: Kết quả: Ngày/ký tên: Chuẩn mực: Ủ: Chất lượng xác nhận: Môi trường kiểm chứng: Phát triển vi sinh vật - Tính chọn lọc Phương pháp kiểm sốt: Định lượng  Định tính  Chủng: Kết quả: Ngày/ký tên: Chuẩn mực: Ủ: Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Mơi trường kiểm chứng: Phát triển vi sinh vật - Tính chọn lọc Phương pháp kiểm sốt: Định lượng  Định tính  Chủng: Kết quả: Ngày/ký tên: Ủ: Chuẩn mực: Chất lượng xác nhận: Có  Khơng  Mơi trường kiểm chứng: Biên lai mẻ hàng Chi tiết bảo quản Biên lai mẻ hàng Có  Khơng  LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Ngày/ký tên: Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Phụ lục B (Quy định) Các vi sinh vật thử nghiệm khuyến cáo dùng cho môi trường nuôi cấy thông dụng (đưa thông tin môi trường nuôi cấy, điều kiện cấy, vi sinh vật thử nghiệm, số lượng sưu tập chủng cấy sinh vật thử nghiệm phản ứng dự kiến) Bảng B.1 đến B.6 thiết lập có tính đến chủng kiểm chứng sử dụng Dược điển Châu Âu (European Parmacopoeia) Dược điển Châu Âu khuyến cáo môi trường nuôi cấy cho vi sinh vật thực phẩm (Nhóm cơng tác ICFMH) Các chuẩn đưa vào tiêu chuẩn cụ thể chuẩn bị soát xét tương lai (tiêu chuẩn sốt xét tiêu chuẩn) Mẻ mơi trường đánh giá hiệu lực mẻ môi trường cho thấy hiệu phù hợp Cho phép sử dụng chủng giống từ sưu tập kiểm chứng khác (ví dụ: NCTC, CIP ) Tất mơi trường trích dẫn nằm tiêu chuẩn ISO EN Bảng B.1 - Môi trường chọn lọc để định lượng vi sinh vật Môi trường Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Mơi trường kiểm chứng Barid Parker Sa Staphylococci dương tính coagulaza TCVN 48301 (ISO 68881) Năng suất 24-48 h/37 oC S aureus ATCC 6538 S aureus ATCC 25923b TSA Tính chọn lọc 48 h/37 o C E coli ATCC 25922 8739b - Tính đặc thù 24-48 h/37 oC S epidermidis ATCC 12228b - Năng suất 24-48 h/37 oC S aureus ATCC 6538 or 6538 P S aureus ATCC 25923o TSA Tính chọn lọc 48 h/37 o C E coli ATCC 25922 8739b - Tính đặc thù 24-48 h/37 oC S epidermidis ATCC 12228b - Năng suất 3-5 ngày/25 o C C aibicans ATCC 10231 A niger ATCC 16404b P cyclopium ATCC 16025 S cerevisiae ATCC 9763b Mẻ môi trường SDA (Thạc Dextroza Sabouraud) OGA Thạch chloramphenicol Tính chọn lọc 3-5 ngày/25 o C E coli ATCC 25922 8739" B subtilis ATCC 6633 - Năng 72 h/30 L sake ATCC Mẻ môi trường RPFA Chloramphenicol OGA (OGY) MRS S S S Staphylococci dương tính coagulaza Nấm men/ Nấm mốc Vi khuẩn sinh TCVN 4830 - (ISO 6888-2) TCVN 4993 (ISO 7954) TCVN 7906 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Môi trường MYP Oxford Kiểu S S www.luatminhkhue.vn Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức axit lactic (ISO 15214) suất Bacillus cereus Listeria monocytogen TCVN 4992 (ISO 7932) TCVN 7700 (ISO 11290) Ủ Chủng đối chứng Môi trường kiểm chứng C 15521b Ped damnosus ATCC 29358 Lc Lactis ATCC 19435b MRS đánh giá hiệu lực Tính chọn lọc 72 h/30 o C E.coli ATCC 25922 8739" - Năng suất 24-48 h/30 oC B cereus ATCC 11778" TSA Tính chọn lọc 48 h/37 o C E coli ATCC 25922 8739b - Tính đặc thù 48 h/37 o C B subtilis ATCC 6633b Năng suất 48 h/37 o C L mono 1/2a ATCC 1911 o TSA L mono 4b ATCC 13932b Tính chọn lọc 48 h/37 o C E coli ATCC 25922 8739b - E faecalis ATCC 29212 19433 C albicans ATCC 10231 PALCAM S Listeria monocytogen TCVN 7700 (ISO 11290) Năng suất 48 h/37 o C L mono 1/2a ATCC 19111 TSA L mono 4b ATCC 13932" Tính chọn lọc 72 h/30 o C E coli ATCC 25922 8739b - E faecalis ATCC 29212 19433 TS {C) S Clostridium perfringens TCVN 4991 (EN ISO 7937) Năng suất 20 h/30 o C mơi trường kị khí Cl perfrigens ATCC 13124 Mẻ môi trường TS (C) đánh giá hiệu lực Cl perfrigens ATCC 12916 Tính chọn lọc 20 h/30 o C môi LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 E coli ATCC 25922 - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng TSC trường kị khí 8739 Mơi trường kiểm chứng Tính đặc thù TS VRBG S Enterobacteriaceae ISO 74021 ISO 8523 Năng suất 24 h/37 o C E coli ATCC 25922 8739b TSA S typhimurium ATCC 14028 VRBL CT-SMAC BGBLB LST S S Lc L Coliforms Escherichia coli 0157 Coliforms Coliforms TCVN 6848 (ISO 4832) TCVN 7686 (ISO 16654) TCVN 4882 (ISO 4831) TCVN 4882 (ISO 4831) Tính chọn lọc 24 h/37 o C E faecalis ATCC 29212 19433" - Năng suất 24 h/30 o C E coli ATCC 25922 8739b TSA Tính chọn lọc 24 h/30 o C E faecalis ATCC 29212 19433b - Tính đặc thù 24 h/30 o C Ps aeruginosa ATCC 27853 - Năng suất 24 h/37 o C E coli 0157:H7ATCC 43894 43895b (khơng độc) TSA Tính chọn lọc 24 h/37 o C S.aureus ATCC 6538 25923b - Tính đặc thù 24 h/37 o C E coli ATCC 11775 25922 - Năng suất 24-48 h/30 oC E coli ATCC 25922 8739DC freundi ATCC 43864 - Tính chọn lọc 24-48 h/30 oC E faecalis ATCC 29212 19433b - Năng suất 24-48 h/30 oC E coli ATCC 25922 8739 C freundi ATCC 43864 - E faecalis - Tính TCVN 6847 (ISO 7402) với TCVN 5518, TCVN 7136 (ISO 5552) thay TCVN 5518-1 (ISO 21528) TCVN 5518-2 (ISO 21528) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng chọn lọc EC L Echerichia coli TCVN 6846 (ISO 7251) a S = Môi trường đặc D Các chủng phòng thử nghiệm sử dụng (tối thiểu) c L = Môi trường lỏng Môi trường kiểm chứng ATCC 29212 19433b Năng suất 24-48 h/44 oC E coli ATCC 25922 8739b - Tính chọn lọc 24-48 h/44 oC Ps aeruginosa ATCC 27853b - Chú ý: Đối với mơi trường đặc sử dụng phương pháp đổ đĩa bán định lượng Bảng B.2 - Môi trường không chọn lọc để định lượng vi sinh vật Môi trường PCA Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức Sa Tổng số hệ vi khuẩn TCVN 4884 (ISO 4833) Năng suất Ủ 72 h/30 o C Chủng đối chứng Môi trường kiểm chứng E coli ATCC 25922 8739b TSA S aureus ATCC 6538 6538P B subtilis ATCC 6633b a S = Môi trường đặc b Các chủng phòng thử nghiệm sử dụng (tối thiểu) Bảng B.3 - Môi trường tăng sinh chọn lọc Môi trường EE Half Fraser Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức La Enterbacteriac -eae ISO 74021 ISO 8523 Năng suất 24 h/ oC E coli ATCC 25922 8739b S typhimurium ATCC 14028 Tính chọn lọc 24 h/37 o C + E faecalis ATCC 29212 19433b Năng suất 24 h/30 o C L mono 1/2 a ATCC 19111 L Listeria monocytogens TCVN 7700-1 (ISO 11290-1) Ủ LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn - - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn L mono 4b ATCC 13932b + E coli ATCC 25922 8739o + E faecalis ATCC 29212 19433b Tính chọn lọc 24 h/30 o C E coli ATCC 25922 8739b - E faecalis ATCC 29212 19433 Fraser L Listeria monocytogens TCVN 7700-1 (ISO 11290-1) Năng suất 48 h/37 o C L mono 1/2a ATCC 19111 - L mono 4b ATCC 13932b + E coli ATCC 25922 8739b + E faecalis ATCC 29212 19433b Tính chọn lọc 24-48 h/37 oC E coli ATCC 25922 8739b - E faecalis ATCC 29212 19433 ITC L Yersinia enterocolitica ISO 10273 Năng suất 48 h/25 o C Y enterocolitica ATCC 23715 9610b - + E coli ATCC 25922 8739b + Ps aeruqinosa ATCC 27853b Tính chọn lọc 48 h/25 o C LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Ps aeruginosa ATCC 27853b - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn P mirabilis ATCC 29906 Park & Sanders L Campylobacter TCVN 7715 (ISO 10272) Năng suất Xem tiêu chuẩn C coli ATCC 43478" - C jejuni ATCC 33291 29428* + E.coli ATCC 25922 8739b + P mirabilis ATCC 29906b Preston L Campylobacter TCVN 7715 (ISO 10272) Tính chọn lọc See standard E coli ATCC 25922 8739b - Năng suất 18 h/42 o C C coli ATCC 43478b - C jejuni ATCC 33291 29428b + E coli ATCC 25922 8739b + P mirabilis ATCC 29906b Tính chọn lọc 18 h/42 o C E coli ATCC 25922 8739b - P mirabilis ATCC 29906 PSB L Yersinia enterocolitica ISO 10273 Năng suất 3-5 ngày/ 25 oC Y enterocolitica ATCC 23715 9610b +E coli ATCC LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn 25922 8739b + Ps aeruginosa ATCC 27853b Tính chọn lọc 3-5 ngày/ 25 oC + Ps aeruginosa ATCC 27853b - P mirabilis ATCC 29906 MKTTn L Salmonella TCVN 4829 (ISO 6579) Năng suất 24 h/ 37 o C S.typhimurium ATCC 14028 - S enteritidis ATCC 13076b + E coli ATCC 25922 8739b + Ps aeruqinosa ATCC 27853b Tính chọn lọc 24 h/ 37 o C E coli ATCC 25922 8739 - E faecalis ATCC 29212 19433 Rappaport Vassiliadis L Salmonella EN 128242 Năng suất 24 h/ 41,5 oC S.typhimurium ATCC 14028b - S enteritidis ATCC 13076b +E coli ATCC 25922 8739 + Ps aeruqinosa ATCC 27853 Tính chọn lọc 24 h/ 41,5 oC E coli ATCC 25922 EN 12824:1998 thay TCVN 4829:2009 (ISO 6579:2002, Amd 1:2007) sửa đồi 1:2008 TCVN 4829:2005 (ISO 6579:2002, Amd 1:2007) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn 8739b E faecalis ATCC 29212 19433 RVS L Salmonella ISO 6579 Năng suất 24 h/ 41,5 oC S typhimurium ATCC 14028 - P mirabilis ATCC 29906 MKTTn L Salmonella TCVN 4829 (ISO 6579) Năng suất 24 h/ 37 o C S.typhimurium ATCC 14028 - S enteritidis ATCC 13076b + E coli ATCC 25922 8739b + Ps aeruqinosa ATCC 27853b Tính chọn lọc 24 h/ 37 o C E coli ATCC 25922 8739 - E faecalis ATCC 29212 19433 Rappaport Vassiliadis L Salmonella EN 128242 Năng suất 24 h/ 41,5 oC S.typhimurium ATCC 14028b - S enteritidis ATCC 13076b + E coli ATCC 25922 8739 + Ps aeruqinosa ATCC 27853 Tính chọn lọc 24 h/ 41,5 oC LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 E coli ATCC 25922 - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trườn kiểm chứn 8739b E faecalis ATCC 29212 19433 RVS L Salmonella ISO 6579 Năng suất 24 h/ 41,5 oC S typhimurium ATCC 14028 - Môi trường kiểm chứn Bảng B.4 Môi trường tăng sinh không chọn lọc Môi trường Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng BHI I_a Staphylococcus TCVN 4830 (ISO 6888) Năng suất 24 h/ 37 o C S aureus ATCC 25923b Brucetla L Campylobacter TCVN 7715 (ISO 10272) Năng suất 2-5 ngày/25 o C C coli ATCC 43478 - C ieiuni ATCC 33291 29428b Peptone salt L Dung dịch pha loãng TCVN 6570 (ISO 6887) Dịch pha loãng 45 min/ 20 - 25 o C E coli ATCC 25922 8739b TSA S aureus ATCC 25923 Thioglycollate L Clostridium perfringens TCVN 4991 (ISO 7937) Năng suất 24 h/ 37 o C Cl perfringens ATCC 13124b - TSYEB L Listeria monocytogens TCVN 7700 (ISO 11290) Năng suất 24 h/ 25 o C L mono 1/2a ATCC 19111 - L mono 4b ATCC 13932b a L = Môi trường lỏng b Chủng phòng thử nghiệm sử dụng (tối thiểu) Bảng B.5 - Môi trường phân lập chọn lọc Môi trường Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trường kiểm chứn Butzler cải Sa Campytobacter TCVN Năng 24-72 h/ C coli ATCC - LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu Vi sinh vật biến www.luatminhkhue.vn Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng 7715 (ISO 10272) suất 42 oC 43478 Môi trường kiểm chứn CCDA Karmati C jejuni ATCC 33291 29428b Preston Skirrow Tính chọn lọc 24-72 h/ 42 oC E coli ATCC 25922 8739b - S aureus ATCC 25923 CIN S Yersinia enterocolitica ISO 10273 Năng suất 24 h/ 30 o C Y enterocolitica ATCC 23715 9610b - Tính chọn lọc 24 h/ 30 o C E coli ATCC 25922 8739b - SSDC S aureus ATCC 25923 Thạch xanh billiant (BGA) S Salmonella TCVN 4829 (ISO 6579) Năng suất 24 - 48 h/ 37 oC S typhimurium ATCC 14028D - S enteritidis ATCC 13076 XLD Tính chọn lọc 24 - 48 h/ 37 oC E coli ATCC 25922 8739b E faecalis ATCC 29212 19433 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 - Công ty luật Minh Khuê Môi trường Kiểu www.luatminhkhue.vn Vi sinh vật Tiêu chuẩn a S = Mơi trường đặc b Chủng phịng thử nghiệm sử dụng (tối thiểu) Chức Ủ Chủng đối chứng Môi trường kiểm chứn Bảng B.6 - Môi trường phân lập không chọn lọc Môi trường Kiểu Vi sinh vật Tiêu chuẩn Chức Ủ Chủng đối chứng Thạch dinh dưỡng Sa Enterobacteriaceae ISO 74021 ISO 8523 Năng suất 24 h/ 37 o C E COlI ATCC 25922 8739c Salmonella TCVN 4829 (ISO 6579) 24 h/ 37 o C S typhimurium ATCC 14028c Yersinia enterocolitica ISO 10273 24 h/ 30 o C Y enterocolitica ATCC 23715 or 9610c Listeria monocytogenes TCVN 7700 (ISO 11290) 24 h/ 37 o C L mono 1/2a ATCC 1911 L mono 4b ATCC 13932b Thạch TSYEA S a S = Môi trường đặc b Chủng phòng thử nghiệm sử dụng (tối thiểu) c Chủng tự lựa chọn theo phương pháp sử dụng Năng suất LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Môi trườ kiểm - - Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn THƯ MỰC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6507-1:2005 (ISO 6887-1:1999) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật - Phần 1: Các nguyên tắc chung để chuẩn bị huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân [2] TCVN 6263:2007 (ISO 8261:2001) Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn chung chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật [3] TCVN 6507-2:2005 (ISO 6887-2:2003) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật - Phần 2: Các nguyên tắc cụ thể để chuẩn bị mẫu thịt sản phẩm thịt [4] TCVN 6507-3:2005 (ISO 6887-3:2003) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật - Phần 3: Các nguyên tắc cụ thể để chuẩn bị mẫu thủy sản sản phẩm thủy sản [5] TCVN 6507-4:2005 (ISO 6887-4:2003, With amendment 1:2004) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật - Phần 4: Các nguyên tắc cụ thể để chuẩn bị sản phẩm khác với sữa sản phẩm sữa, thịt sản phẩm thịt thủy sản sản phẩm thủy sản [6] Thay TCVN 6404:2007 (ISO 7218:1996) Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Nguyên tắc chung kiểm tra vi sinh vật [7] ISO 2859-1:1999, Sampling proceducres for inspection by attributes - Part 1: Sampling schemes indexed by acceptance quality limit (AQL) for lot-by-lot inspection [8] Corry JEL, Curtis GDW, Baird RM, 1995, Culture Media for Food Microbiology, London: Elsevier Sciene, Volume 34 [9] Anon.1998., int J Food Microbiol 45, 65 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162