TIỆT KHUẨN SẢN PHẦM CHĂM SÓC SỨC KHỎE - CHẤT CHỈ THỊ SINH HỌC - PHẦN 1: YÊU CẦUCHUNG

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9855-1:2013 ISO 11138-1:2006 TIỆT KHUẨN SẢN PHẦM CHĂM SÓC SỨC KHỎE - CHẤT CHỈ THỊ SINH HỌC - PHẦN 1: YÊU CẦU CHUNG Sterilization of health care products - Biological indicators - Part 1: General requirements Mục lục Lời nói đầu Lời giới thiệu Phạm vi áp dụng Tài liệu viện dẫn Thuật ngữ định nghĩa Yêu cầu chung sản xuất Các yêu cầu cụ thể sản xuất Xác định sức đề kháng Điều kiện nuôi cấy Phụ lục A (quy định) - Xác định số vi sinh vật sống Phụ lục B (quy định) - Xác định ức chế tăng trưởng vi sinh vật chất mang chất liệu bao gói trực tiếp tiếp xúc với trình tiệt khuẩn Phụ lục C (quy định) - Xác định giá trị D phương pháp đường cong sống sót Phụ lục D (quy định) - Giá trị D tính theo phương pháp phân số âm Phụ lục E (quy định) - Các đặc trưng đáp ứng tồn tại-tiêu diệt Phụ lục F (quy định) - Mối liên quan thành phần chất thị sinh học Thư mục tài liệu tham khảo Lời nói đầu TCVN 9855-1:2013 hồn tồn tương đương với ISO 11138-1:2006; TCVN 9855-1:2013 Viện Trang thiết bị Cơng trình y tế biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 9855:2013 Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Chất thị sinh học gồm tiêu chuẩn sau: - TCVN 9855-1:2013 (ISO 11138-1:2006) - Phần 1: Yêu cầu chung - TCVN 9855-2:2013 (ISO 11138-2:2006) - Phần 2: Chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn etylen oxit - TCVN 9855-3:2013 (ISO 11138-3:2006) - Phần 3: Chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn nhiệt ẩm - TCVN 9855-4:2013 (ISO 11138-4:2006) - Phần 4: Chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn nhiệt khơ - TCVN 9855-5:2013 (ISO 11138-5:2006) - Phần 5: Chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn nước nhiệt độ thấp trình tiệt khuẩn formaldehyd Lời giới thiệu Tiêu chuẩn đưa yêu cầu chung việc sản xuất, ghi nhãn, phương pháp thử yêu cầu hoạt động sản xuất chất thị sinh học bao gồm chất mang dịch treo dùng để đánh giá giám sát trình tiệt khuẩn TCVN 9855-1 (ISO 11138-1) đưa yêu cầu cụ thể chất thị sinh học dành cho trình tiệt khuẩn định Mơ tả hình ảnh chất thị sinh học thành phần trình bày Phụ lục F LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Phần trình bày bao gồm hai loại chất thị sinh học đề cập đến TCVN 9855 (ISO 11138) Điều cho thấy chất mang tiếp xúc trực tiếp với chất tiệt khuẩn khơng bao gói trước, bao gói trực tiếp cho phép chất tiệt khuẩn tiếp cận Đặc tính đề kháng phụ thuộc vào loại vi sinh vật thử nghiệm, số lượng nó, phương pháp chuẩn bị tác dụng việc bao gói trực tiếp Lời khuyên việc lựa chọn, sử dụng diễn giải kết chất thị sinh học tham khảo TCVN 8583 (ISO 14161)[7] Đối với trình tiệt khuẩn đơn lẽ nào, kể trình đề cập phần TCVN 9855 (ISO 11138), sức đề kháng chất thị sinh học cịn phụ thuộc vào mơi trường vi mơ trình thử nghiệm, mặt lý thuyết, sức đề kháng dẫn đến đa dạng vơ hạn chuẩn bị chất thị sinh học Hơn nữa, q trình tiệt khuẩn điều chỉnh nhiều cách khác cho phù hợp nhóm điều kiện mà sản phẩm tiếp xúc Vì vậy, thực hành thường quy, việc sản xuất chất thị sinh học mà tiếp xúc với nhóm điều kiện q trình tiệt khuẩn xác định, có đặc tính đề kháng biểu thị giá trị D giá trị z phù hợp Các giá trị trình bày phần TCVN 9855 (ISO 11138) Bộ TCVN 9855 (ISO 11138), từ phần đến phần thể thực trạng kỹ thuật theo chuyên gia đại diện cho nhà sản xuất, người sử dụng quan quản lý liên quan đến việc soạn thảo tiêu chuẩn Các chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn cụ thể khơng nói đến điều kiện thử nghiệm đối chứng phần khác TCVN 9855 (ISO 11138) cần tuân theo yêu cầu chung tiêu chuẩn này, bao gồm kỹ thuật thử sức đề kháng Các chất thị sinh học khơng mơ tả đầy đủ, sử dụng cho q trình tiệt khuẩn mới, đại diện vi sinh vật vi sinh vật tạp nhiễm phân lập Nếu vi sinh vật nằm ngồi vi sinh vật nguy nhóm (WHO.1993[27]) bao gồm chất thị sinh học này, biện pháp ngăn ngừa biện pháp an toàn phù hợp cần đáp ứng Các tiêu chuẩn cung cấp yêu cầu cho việc đánh giá kiểm sốt q trình tiệt khuẩn (xem Thư mục tài liệu tham khảo) CHÚ THÍCH Một số quốc gia khu vực ban hành tiêu chuẩn khác bao gồm yêu cầu tiệt khuẩn chất thị sinh học (xem Thư mục tài liệu tham khảo) TIỆT KHUẨN SẢN PHẦM CHĂM SÓC SỨC KHỎE - CHẤT CHỈ THỊ SINH HỌC - PHẦN 1: YÊU CẦU CHUNG Sterilization of health care products - Biological indicators - Part 1: General requirements Phạm vi áp dụng 1.1 Tổng quan 1.1.1 Tiêu chuẩn cung cấp yêu cầu chung áp dụng cho sản xuất, ghi nhãn, phương pháp thử đặc trưng tính chất thị sinh học, bao gồm chất mang, dịch treo thành phần chúng, sử dụng trình đánh giá xác nhận theo dõi thường quy trình tiệt khuẩn 1.1.2 Tiêu chuẩn quy định yêu cầu yêu cầu chung áp dụng cho tất phần khác thuộc TCVN 9855 (ISO 11138) Các yêu cầu chất thị sinh học trình cụ thể quy định có phần khác TCVN 9855 (ISO 11138) Nếu không đề cập đến phần cụ thể áp dụng tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Có thể áp dụng quy định quốc gia khu vực 1.2 Phạm vi loại trừ Tiêu chuẩn không áp dụng hệ thống thử nghiệm vi sinh trình dựa việc loại bỏ vật lý vi sinh vật, ví dụ trình lọc trình kết hợp việc loại bỏ vật lý và/hoặc học kết hợp với việc bất hoạt vi sinh vật, sử dụng chất tẩy rửa, xả rửa dùng nước để làm đường ống Tuy nhiên, tiêu chuẩn bao gồm yếu tố liên quan đến hệ thống thử nghiệm vi sinh vật Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết để áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 6196 (ISO 15223), Thiết bị y tế- Ký hiệu sử dụng nhãn ý nghĩa ký hiệu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TCVN 7392:2004 (ISO 11135:1994), Trang thiết bị y tế - Xác nhận kiểm soát thường quy tiệt trùng etylen oxit TCVN 7393-1 (ISO 11137-1), Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Bức xạ - Phần 1: Yêu cầu triển khai, đánh giá xác nhận kiểm sốt thường quy q trình tiệt khuẩn trang thiết bị y tế TCVN 7393-2 (ISO 11137-2), Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Bức xạ- Phần 2: Thiết lập liều tiệt khuẩn TCVN 7393-3 (ISO 11137-3), Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Bức xạ - Phần 3: Hướng dẫn khía cạnh đo liều lượng TCVN 7394-1 (ISO 11607-1), Bao gói trang thiết bị y tế tiệt khuẩn - Phần 1: Yêu cầu vật liệu, hệ thống bảo vệ vơ khuẩn hệ thống bao gói TCVN 7394-2 (ISO11607-2), Bao gói trang thiết bị y tế tiệt khuẩn - Phần 2: Yêu cầu đánh giá xác nhận trình tạo hình, niêm phong lắp ráp TCVN ISO 8601, Phần tử liệu dạng thức trao đổi Trao đổi thông tin Biểu diễn thời gian TCVN ISO 13485, Dụng cụ y tế - Hệ thống quản lý chất lượng - Yêu cầu mục đích chế định ISO 11737-1, Sterilization of medical devices - Microbiological methods - Part 1: Estimation of population of microorganisms on products (Tiệt khuẩn thiết bị y tế - Phương pháp vi sinh vật - Phần 1: Xác định quần thể vi sinh vật sản phẩm) ISO 17665-1, Sterilization of health care products - Moist heat - Part 1: Requirements for the development, validation and routine control of a sterilization process for medical devices (Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Ẩm nhiệt độ cao - Phần 1: Yêu cầu việc triển khai, đánh giá xác nhận kiểm soát thường quy trình tiệt khuẩn thiết bị y tế) ISO 18472, Sterilization of health care products - Biological and chemical indicators - Test equipment (Tiệt khuẩn sản phẩm chăm sóc sức khỏe - Các chất thị sinh học hóa học - Thiết bị thử nghiệm) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn này, áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau: 3.1 Chất thị sinh học (biological indicator) Hệ thống thử chứa vi sinh vật sống có sức đề kháng định trình tiệt khuẩn quy định [ISO/TS11139, định nghĩa 2.3] 3.2 Chất mang (carrier) Các chất hỗ trợ vi sinh vật thử cấy vào 3.3 Đơn vị tạo khuẩn lạc (conoly forming unit) CFU Các đơn vị nhìn thấy vi sinh vật phát triển từ nhiều tế bào 3.4 Sổ sưu tập vi sinh vật nuôi cấy (culture collection number) Mã xác định tính vi sinh vật thử nghiệm cấp sưu tập vi sinh vật công nhận cách khoa học 3.5 Điều kiện nuôi cấy (culture condition) Sự kết hợp môi trường nuôi cấy cách nuôi cấy sử dụng để thúc đẩy phát triển nhân lên vi sinh vật LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn CHÚ THÍCH Cách ni cấy bao gồm nhiệt độ, thời gian điều kiện nuôi cấy cụ thể khác [ISO/TS11139, định nghĩa 2.10] 3.6 Giá trị D (D value) Giá trị D10 (D10 value) Thời gian liều cần thiết để khử 90% hoạt tính quần thể vi sinh vật thử điều kiện quy định [ISO/TS11139, định nghĩa 2.11] 3.7 Giá trị FBIO (FBIO value) Tích logarit quần thể vi sinh vật ban đầu giá trị D, giá trị FBIO dùng để biểu thị tổng sức kháng chất thị sinh học 3.8 Bất hoạt (inactivation) Mất khả phát triển và/hoặc nhân lên vi sinh vật [ISO/TS11139, định nghĩa 2.21] 3.9 Đường cong bất hoạt (inactivation curve) Biểu đồ trình bày bất hoạt vi sinh vật thử nghiệm chống lại gia tăng tiếp xúc với chất tiệt khuẩn điều kiện định 3.10 Vật liệu mang chủng (inoculated carrier) Vật liệu phụ trợ có số lượng xác định sinh vật thử nghiệm CHÚ THÍCH Xem Phụ lục F 3.11 Quần thể danh nghĩa (nominal population) Số lượng vi sinh vật sống nhà sản xuất cơng bố CHÚ THÍCH Thường diễn giải theo hàm log10 (ví dụ: 106) 3.12 Hệ thống bao gói (packaging system) Sự kết hợp hệ thống ngăn vơ khuẩn bao gói bảo vệ [ISO/TS11139, định nghĩa 2.28] 3.13 Bao gói trực tiếp (primary package) Cơng đoạn hệ thống bao gói trì tính tồn vẹn sản phẩm CHÚ THÍCH Hệ thống bao gói bảo vệ vật liệu mang chủng khỏi bị hỏng lây nhiễm mà không ngăn cản thâm nhập chất tiệt khuẩn 3.14 Thiết bị kiểm chứng trình (process challenge device) PCD Hạng mục thiết kế để tạo nên khả xác định chịu trình tiệt khuẩn dùng để đánh giá hiệu trình [ISO/TS11139, định nghĩa 2.33] 3.15 Thiết bị đo tổ hợp đối chứng (resistometer) Thiết bị thử thiết kế để đo tổ hợp đối chứng xác định gồm biến vật lý và/hoặc hóa học LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn q trình tiệt khuẩn 3.16 Bao gói trung gian (secondary package) Vật chứa chất thị sinh học bao gói để vận chuyển bảo quản 3.17 Chất thị sinh học tích hợp sẵn (self-contained biological indicator) Chất thị sinh học có mặt theo cách bao bì bao gói trực tiếp, nhằm mục đích để nuôi cấy, chứa môi trường nuôi cấy cần thiết vi sinh vật hồi phục 3.18 Cửa sổ tồn tại-tiêu diệt (survival-kill window) Mức độ tiếp xúc với trình tiệt khuẩn điều kiện xác định có chuyển đổi từ tất chất thị sinh học thể tăng trưởng (thời gian tồn tại) sang tất chất thị sinh học thể không tăng trưởng (thời gian tiêu diệt) 3.19 Dịch treo (suspention) Sinh vật sống thử nghiệm trạng thái treo dịch CHÚ THÍCH Dịch treo chất thị sinh học trạng thái sẵn sàng cho sử dụng lọ gắn kín, thành phần trung gian sử dụng để sinh chất mang cấy chất thị sinh học 3.20 Số lượng sống (viable count) Số lượng cụ thể đơn vị khuẩn lạc hồi phục đơn vị phù hợp khác CHÚ THÍCH Xem Phụ lục A 3.21 Giá trị z (z value) Thay đổi nhiệt độ tiếp xúc trình tiệt khuẩn nhiệt, tương ứng với 10 lần thay đổi giá trị D CHÚ THÍCH Xem TCVN 9855-3 (ISO 11138-3) TCVN 9855-4 (ISO 11138-4) Yêu cầu chung sản xuất 4.1 Giám sát sản xuất 4.1.1 Hệ thống chất lượng Nhà sản xuất cần thiết lập, ghi thành văn trì hệ thống kiểm tra chất lượng thức (ví dụ, TCVN ISO 13485 (ISO 13485)), chuẩn GMP yêu cầu khác quốc gia hay khu vực) bao trùm tất công đoạn yêu cầu tiêu chuẩn Đặc biệt, nhà sản xuất cần thận trọng tất giai đoạn trình sản xuất nhằm giảm thiểu lây nhiễm ảnh hưởng xấu đến hiệu chất thị sinh học 4.1.2 Khả truy xuất nguồn gốc 4.1.2.1 Khả truy xuất nguồn gốc thành phần trình sản xuất cần trì 4.1.2.2 Sản xuất thành phần cần bao gồm chất liệu cấu thành đó, tiếp xúc trực tiếp với dịch treo chứa vi sinh vật thử nghiệm, chất mang cấy bao gói trực tiếp 4.1.3 Yêu cầu cho sản phẩm cuối Sản phẩm cuối cần tuân theo yêu cầu nêu tiêu chuẩn này, xem: a) sản xuất (Điều 5); b) ghi nhãn (Điều 4.3); c) đặc tính sức đề kháng (Điều 6.4); LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn d) bảo quản vận chuyển (Điều 4.4) CHÚ THÍCH Khuyến cáo phương pháp sử dụng chất thị sinh học nêu TCVN 8583 (ISO 14161) CHÚ THÍCH Có thể có yêu cầu riêng quốc gia và/hoặc khu vực, ví dụ dược điển quốc gia khu vực khác 4.1.4 Nhân Các quy trình phương pháp tiêu chuẩn cần thực người có kinh nghiệm phịng thí nghiệm đào tạo phù hợp (xem 4.1.1) 4.2 Vi sinh vật thử nghiệm 4.2.1 Chủng vi sinh vật 4.2.1.1 Các vi sinh vật thử nghiệm nên chủng xác định, thu cách nuôi cấy theo phương pháp công nhận cần xác định phương pháp thử nghiệm phù hợp 4.2.1.2 Vi sinh vật thử nghiệm nên chủng: a) phù hợp với việc xử lý không cần phương tiện ngăn chặn đặc biệt, khơng cần quy trình ngăn ngừa đặc biệt thao tác không cần yêu cầu gửi hay vận chuyển đặc biệt (ví dụ, Nguy nhóm WHO 1993); b) phù hợp để trì đặc tính đề kháng hạn thời gian cịn hạn dùng vận chuyển bảo quản theo dẫn bao bì CHÚ THÍCH Theo thơng lệ, vi sinh vật thử nghiệm cho chất thị sinh học vi khuẩn đơn bào, thường có nguồn gốc từ chủng Bacillus Geobacillus 4.2.1.3 Các vi sinh vật thử nghiệm khơng phải vi khuẩn đơn bào sử dụng chúng chứng minh cung cấp sức đề kháng phù hợp cho trình tiệt khuẩn 4.2.2 Nguồn vi sinh vật cho dịch treo 4.2.2.1 Nguồn vi sinh vật ban đầu cho lô vi sinh vật thử nghiệm nên là: a) truy xuất đến mơi trường ni cấy tham chiếu có sẵn thông qua sưu tập vi sinh vật cơng nhận; b) xác nhận danh tính tinh khiết 4.2.2.2 Phương pháp sử dụng để trì nuôi cấy vi sinh vật thử nghiệm nên thiết kế để bảo vệ chúng khỏi lây nhiễm giảm thiểu thay đổi đặc tính vốn có vi sinh vật thử nghiệm 4.2.2.3 Xét nghiệm xác nhận đặc hiệu chủng vi sinh vật thử nghiệm cần nhà sản xuất ghi chép xác nhận 4.2.3 Đếm số lượng vi sinh vật thử nghiệm 4.2.3.1 Số lượng vi sinh vật sống dịch treo cần xác định theo Phụ lục A 4.2.3.2 Nếu người sử dụng yêu cầu thông tin số phát triển vi sinh vật thử nghiệm thông tin cần cung cấp dạng tỷ lệ% số lượng vi sinh vật thử nghiệm tổng số lượng vi sinh vật trực tiếp đếm kính hiển vi 4.3 Các thơng tin cung cấp nhà sản xuất (ghi nhãn) 4.3.1 Các thông tin sau cần nhà sản xuất cung cấp nhãn đơn vị dịch treo, bao gói vật liệu mang chủng chất thị sinh học - mã thơng qua truy xuất nguồn gốc sản phẩm; - tên vi sinh vật thử nghiệm; - định phù hợp trình tiệt khuẩn dịch treo, vật liệu mang chủng, chất thị sinh học; - ngày hết hạn theo yêu cầu TCVN ISO 8601, (ví dụ: năm - tháng - ngày) - tên nhà sản xuất, thương hiệu sản phẩm, địa biện pháp nhận dạng khác Có thể sử dụng biểu tượng quốc tế công nhận (xem 4.1.3 TCVN 6916 (ISO 15223)) 4.3.2 Các thông tin Bảng cần cung cấp bao gói trung gian lô sản phẩm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 4.3.3 Các yêu cầu ghi nhãn đạt nhờ việc sử dụng biểu tượng phù hợp (TCVN 6916 (ISO 15223)) Bảng - Các thông tin nhà sản xuất cung cấp Thông tin yêu cầu Dịch treo Chất mang cấy Chất thị sinh học Tên tên viết tắt sưu tập chủng vi sinh vật mà từ vi sinh vật thử nghiệm lấy Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Thể tích danh nghĩa dịch treo, tính ml Yêu cầu - - Quá trình làm cho sản phẩm phù hợp để sử dụng, sức đề kháng chất mang sử dụng để xác định sức đề khánga Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Điều kiện bảo quản cụ thể Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Hướng dẫn xử lý chất thải Yêu cầu Yêu cầu Yêu cảu Hướng dẫn sử dụng đặc biệt số liệu môi trường, cách nuôi cấy điều kiện khác sử dụng để làm hồi phục vi sinh vật thử nghiệm sau tiếp xúc với trình tiệt khuẩn Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Số lượng vi sinh vật thử nghiệm ml (dịch treo), đơn vị (chất mang cấy chất thị sinh học)a Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu - Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Yêu cầu Số lượng đơn vị sản phẩm bao gói trung gian Viện dẫn tiêu chuẩn a Phương pháp thử nghiệm sử dụng để xác định sức đề kháng mật độ cần nhà sản xuất cung cấp có yêu cầu 4.4 Bảo quản vận chuyển 4.4.1 Điều kiện bảo quản vận chuyển vi sinh vật thử nghiệm nên trì cho dịch treo chứa vi sinh vật phù hợp yêu cầu tiêu chuẩn phần khác TCVN 9855 (ISO 11138) có liên quan 4.4.2 Nếu chất mang có vi sinh vật bao gói, chất nên bao gói theo phương pháp khơng làm ảnh hưởng đến mật độ danh nghĩa tính chất mang cấy 4.4.3 Điều kiện bảo quản vận chuyển chất mang có vi sinh vật cần trì cho chất mang cấy tuân theo yêu cầu tiêu chuẩn tiêu chuẩn khác TCVN 9855 (ISO 11138) có liên quan 4.4.4 Các chất thị sinh học bao gói riêng cần bao gói trung gian để vận chuyển bảo quản Bao gói để vận chuyển bảo quản cần đảm bảo chất thị sinh học tuân theo tiêu chuẩn phần khác TCVN 9855 (ISO11138) có liên quan Các yêu cầu cụ thể sản xuất 5.1 Dịch treo 5.1.1 Môi trường nuôi cấy điều kiện nuôi cấy cần sản xuất dịch treo có vi sinh vật thử nghiệm đáp ứng yêu cầu hoạt động tiêu chuẩn tiêu chuẩn khác TCVN 9855 (ISO 11138) có liên quan 5.1.2 Mơi trường treo cho dịch treo chứa vi sinh vật không ảnh hưởng đến ổn định vi sinh vật thử nghiệm tương thích với quy trình vật liệu sử dụng sản xuất chất mang cấy vi sinh vật chất thị sinh học 5.1.3 Phương pháp thu hoạch xử lý dịch treo sau để sử dụng cấy vào chất mang cần đảm bảo chất tồn dư không ảnh hưởng đến hoạt động chất mang cấy vi sinh vật chất thị sinh học 5.2 Chất mang, bao gói trực tiếp bao gói trung gian 5.2.1 Vật liệu chất mang bao gói trực tiếp trung gian không chứa nguồn lây nhiễm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn (lý, hóa vi khuẩn) ảnh hưởng đến hoạt động chất thị sinh học 5.2.2 Chất mang, bao gói trực tiếp trung gian điều kiện bảo quản cụ thể cần thiết kế cho đặc trưng tính chất thị sinh học tuân theo yêu cầu tiêu chuẩn suốt thời gian hạn dùng sản phẩm Nhà sản xuất cần cung cấp cho người mua thơng báo kích thước chiều chất mang yêu cầu 5.2.3 Trong sau trình tiệt khuẩn chất mang bao gói trực tiếp khơng lưu lại giải phóng chất nhiễm vào mơi trường ni cấy, điều kiện nuôi cấy, lượng nhỏ vi khuẩn sống sót bị ức chế phát triển Việc thử nghiệm cần tuân theo Phụ lục B 5.2.4 Chất mang, bao gói trực tiếp bao gói trung gian cần chịu tác động trình vận chuyển đến nơi sử dụng 5.2.5 Các chất liệu thô sử dụng cho chất mang bao gói trực tiếp cần chịu đựng tác động trình tiệt khuẩn mà khơng ảnh hưởng đến đặc tính hoạt động chất mang cấy vi sinh vật chất thị sinh học Sự tuân thủ nuôi cấy cần đánh giá qua quan sát chất mang bao gói trực tiếp tiếp xúc với biến đổi cực đại trị số hóa lý trình tiệt khuẩn CHÚ THÍCH Tài liệu tham khảo điều kiện tiệt khuẩn tìm phần khác TCVN 9855 (ISO 11138) 5.2.6 Điều kiện tiệt khuẩn sử dụng cần kiểm tra nhà sản xuất chất thị sinh học áp dụng để thử nghiệm khả ứng dụng chất thị sinh học 5.3 Chất mang cấy 5.3.1 Các chất mang cấy cần làm chất liệu chịu đựng tác động trình tiệt khuẩn mà khơng bị biến dạng, tan chảy, ăn mịn, hư hỏng khác làm ảnh hưởng xấu đến công dụng chất mang 5.3.2 Chỉ chủng vi sinh vật thử sử dụng lô chất mang cấy, trừ nhà sản xuất chứng minh việc sử dụng nhiều chủng vi sinh vật khơng ảnh hưởng tới tính vi sinh vật trình tiệt khuẩn cụ thể 5.3.3 Trước cấy, chất mang nên tiệt khuẩn theo ISO 17665-1, TCVN 7392 (ISO 11135), TCVN 7393 (ISO 11137) phần đến phần phương pháp tiệt khuẩn phù hợp Nếu tiệt khuẩn không thực được, giới hạn chấp nhận vi sinh vật tạp nhiễm chất mang thiết lập theo ISO 11737-1 (xem Phụ lục B) 5.3.4 Các chất mang cấy nhằm trì mật độ vi sinh vật ổn định (xem 6.3) 5.4 Chất thị sinh học 5.4.1 Các chất thị sinh học bao gói riêng rẽ cần chuẩn bị cách đặt chất mang cấy vào bao gói trực tiếp 5.4.2 Bao gói trực tiếp cần đánh giá xác nhận mục đích sử dụng (xem Phụ lục B) 5.4.3 Các tiêu chuẩn quốc gia quốc tế phù hợp bao gói nên áp dụng (xem TCVN 7394-1 (ISO 11607-1) TCVN 7394-2 (ISO 11607-2)) 5.5 Chất thị sinh học tích hợp sẵn Tính chất thị sinh học tích hợp sẵn cần đánh giá xác nhận, bao gồm khả môi trường nuôi cấy việc thúc đẩy phát triển vi sinh vật thử nghiệm sau trải qua trình tiệt khuẩn Xác định sức đề kháng 6.1 Các yêu cầu chung sức đề kháng 6.1.1 Khả đề kháng lô chất thị sinh học cần kiểm tra để chứng minh phù hợp với yêu cầu tính quy định tiêu chuẩn phần liên quan khác TCVN 9855 (ISO 11138) 6.1.2 Đặc trưng sức đề kháng chất thị sinh học cho q trình tiệt khuẩn khơng quy định phần TCVN 9855 (ISO 11138) cần xác định cách sử dụng yếu tố điều điều kiện thử nghiệm cho trình tiệt khuẩn cần mơ tả rõ 6.1.3 Việc đánh giá xác nhận giám sát số trình tiệt khuẩn thừa nhận có trường hợp dùng chất thị sinh học không đáp ứng mật độ tối thiểu và/hoặc tiêu chuẩn sức đề kháng nêu TCVN 9855 (ISO 11138) Các chất thị sinh học chấp nhận với điều kiện là: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn a) tất yêu cầu TCVN 9855 (ISO 11138) (bao gồm phương pháp thử nghiệm mật độ sức đề kháng) đáp ứng; b) Thông tin sản phẩm bao gồm thông báo rõ ràng mật độ sức đề kháng; c) Ghi nhãn sản phẩm có thơng tin cảnh báo rõ ràng mật độ/ sức đề kháng (khi phù hợp) thấp giá trị nêu phần liên quan TCVN 9855 (ISO 11138) 6.1.4 Thử nghiệm sức đề kháng cần bao gồm việc xác định số lượng vi sinh vật sống xác định đặc trưng sức đề kháng (xem 6.3 6.4) 6.1.5 Sức đề kháng chất thị sinh học nêu thuật ngữ giá trị F BIO (xem 3.7) 6.2 Vi sinh vật thử nghiệm Vi sinh vật thử nghiệm cần nêu cụ thể 6.3 Mật độ vi sinh vật thử nghiệm 6.3.1 Số lượng vi sinh vật sống cần xác định (xem Phụ lục A) 6.3.2 Số lượng vi sinh vật sống cần khoảng 50% đến 300% so với giá trị nhà sản xuất đưa xác định nhà sản xuất quan thứ ba, giai đoạn hạn sử dụng áp dụng phương pháp quy định nhà sản xuất 6.4 Đặc trưng sức đề kháng 6.4.1 Đặc trưng sức đề kháng cần xác định cách phối hợp hai phương pháp sau: d) Xác định giá trị D qua việc xây dựng đường cong sống sót (xem Phụ lục C); e) Xác định giá trị D phương pháp phân số âm tính (xem Phụ lục D); f) Xác định đặc tính đáp ứng tồn tại/tiêu diệt (xem Phụ lục E) 6.4.2 Các giá trị thu thông qua phương pháp phải nằm giới hạn yêu cầu phần tương ứng TCVN 9855 (ISO 11138) Ít hai giá trị phải ghi nhãn chất thị sinh học (xem 4.3) 6.4.3 Giá trị D phải nằm khoảng ± 20% so với giá trị nhà sản xuất đưa xác định nhà sản xuất, giai đoạn hạn sử dụng áp dụng phương pháp quy định nhà sản xuất Đường cong sống sót lý tưởng đường cong tuyến tính bao phủ ni cấy tồn giới hạn bất hoạt Trong thực tế, sai số đường cong lý tưởng có xảy ra, phải trì tuyến tính giới hạn cho phép Việc xây dựng đường cong sống sót liệt kê thiết lập sức đề kháng cho mật độ sống sót lớn 5x101, phương pháp phân số âm thiết lập cách tính số lượng vi sinh vật sống sót dựa thống kê mức Sự tương quan tốt với giá trị D tính hai phương pháp sử dụng để khẳng định khơng có sai số lớn so với đường cong sống sót tuyến tính Các phần TCVN 9855 (ISO 11138) cần giá trị xác định khác (ví dụ giá trị z chất thị sinh học cho trình tiệt khuẩn nhiệt ẩm [TCVN 9855-3 (ISO 11138-3)] tiệt khuẩn nhiệt khô [TCVN 9855-4 (ISO 11138-4)] Đặc trưng sức đề kháng nêu rõ tiêu chuẩn phần TCVN 9855 (ISO 11138) áp dụng cho điều kiện thử nghiệm cụ thể nêu phần 6.4.4 Đường cong sống sót đường cong bán logarit log10 số lượng vi sinh vật sống xét nghiệm so với thời gian Đường cong nên tuyến tính với hệ số tương quan 0,8 (xem Phụ lục C) 6.5 Điều kiện thử nghiệm Đặc trưng sức đề kháng nên xác định cách sử dụng điều kiện thử nghiệm quy định nhà sản xuất Xem Bảng Bảng - Số lượng mẫu thử tối thiểu tùy theo phương pháp Phương pháp thử nghiệm Số lượng tối thiểu theo TCVN 9855-1 (ISO 11138- mẫu thử nghiệm 1) Số lượng vi sinh vật sống thử nghiệm ban đầua Số lượng tối thiểu điều kiện tiếp xúc Tổng số lượng tối thiểu mẫu thử nghiệm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Phương pháp thử nghiệm Số lượng tối thiểu theo TCVN 9855-1 (ISO 11138- mẫu thử nghiệm 1) Số lượng tối thiểu điều kiện tiếp xúc Tổng số lượng tối thiểu mẫu thử nghiệm Phụ lục C Phương pháp đường cong sống sót 20 Phụ lục D Phương pháp phần số âm 20 5b 100 b Phụ lục E Cửa sổ tồn - tiêu diệt 50 100 Số lượng tối thiểu phụ thuộc vào lựa chọn phối hợp phương pháp 124 204 CHÚ THÍCH Điều kiện thơng thường cho phương pháp tiệt khuẩn cụ thể xây dựng theo thời gian trình bày phần TCVN 9855 (ISO11138) a Số lượng sống chất mang cấy chưa xử lý chất thị sinh học b Các điều kiện thử nghiệm phơi nhiễm với thời gian t6 (xem Bảng D.1) không sử dụng tính tốn, điều kiện để chấp nhận kết có giá trị Điều kiện nuôi cấy 7.1 Tủ cấy 7.1.1 Tủ cấy cần đặt chế độ giám sát đảm bảo cung cấp điều kiện ni cấy cụ thể 7.1.2 Ngồi việc theo dõi nhiệt độ thường quy, phân bổ nhiệt độ tủ cấy cần đánh giá xác nhận 7.2 Môi trường nuôi cấy 7.2.1 Môi trường nuôi cấy cần xác định chứng minh hỗ trợ tăng trưởng lần chủng 100 vi sinh vật 7.2.2 Ghi nhãn cần có thơng tin điều kiện nuôi cấy sau tiếp xúc với q trình tiệt khuẩn (xem 4.3) 7.2.3 Mơi trường nuôi cấy cần kiểm định nhằm đảm bảo trung hịa chất tiệt khuẩn tồn dư, chất ảnh hưởng tới sống vi sinh vật (xem 5.2.3) 7.3 Nuôi cấy 7.3.1 Thời gian nhiệt độ nuôi cấy cần kiểm định 7.3.2 Các nhà sản xuất cần cung cấp hướng dẫn nuôi cấy (xem Bảng 1) Một giai đoạn nuôi cấy thường công nhận bảy ngày trình tiệt khuẩn thiết lập, nhiệt ẩm etylen oxit, dùng vi sinh vật có đặc tính xác định rõ Geobacillus stearothermophilus Bacillus atrophaeus Khi khơng có đủ liệu để hỗ trợ giai đoạn nuôi cấy tham chiếu bảy ngày cho phương pháp tiệt khuẩn mới, 14 ngày nên cần dùng giai đoạn nuôi cấy tham chiếu làm sở cho việc kiểm định CHÚ THÍCH Các quốc gia khu vực có yêu cầu riêng cho kiểm định giai đoạn nuôi cấy Phụ Lục A (quy định) Xác định số vi sinh vật sống A.1 Tổng quan A.1.1 Các kỹ thuật đếm để xác định số lượng vi sinh vật sống dịch treo vật liệu mang chủng, từ chất thị sinh học bao gói, cách đếm số đơn vị khuẩn lạc hình thành rõ rệt (đơn vị CFUs) Phương pháp sử dụng số lượng mong đợi vi sinh vật thử nghiệm hồi phục 5*101 đơn vị CFUs A.1.2 Các sản phẩm liên quan cần kiểm tra vi sinh vật hồi phục theo A.2 A.4 Phương pháp áp dụng cho mẫu thử xử lý chưa xử lý sử dụng để xác định số vi sinh vật sống ban đầu (mẫu chưa xử lý) việc xác định giá trị D dùng phương pháp đường cong sống sót (các mẫu chưa xử lý) A.1.3 Các phương pháp đếm thay xác nhận tương đương với kỹ thuật cấy trực tiếp LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Mật độ phục hồia=y Thời gian tiếp xúc (phút)=t www.luatminhkhue.vn log10y t2 t(log10y) (log10y)2 * Như điều C.3.7, điểm liệu nằm 0,5 logarit y1, khơng đưa vào phân tích hồi quy m = -0,5270 c) Giá trị D nghịch đảo âm độ dốc tính theo cơng thức sau: Giá trị Sử dụng cách tính tốn độ dốc trên, có kết giá trị D là: (làm tròn tới số thập phân D=1,9 min) C.3.8 Giá trị có hệ số tương quan độ tuyến tính biểu đồ sống sót khơng nhỏ 0,8 a) Hệ số tương quan độ tuyến tính biểu đồ sống sót tính tốn theo cơng thức sau: tất biến định nghĩa C.3.7a) b) Ví dụ tính tốn hệ số tương quan độ tuyến tính biểu đồ sống sót: Sử dụng giá trị từ Bảng C.2: Phụ lục D (quy định) Giá trị D tính theo phương pháp phân số âm D.1 Tổng quan D.1.1 Phương pháp xác định số lượng vi sinh vật sống sót cách đếm trực tiếp dựa số lượng vi sinh vật hồi phục xác định qua quan sát phát triển dịch môi trường nuôi cấy Phương pháp gọi “Phân tích phân số âm" phương pháp phần mẫu thử khơng mọc (không phát triển) (phạm vi phân số âm) việc tính tốn dựa kết thu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn với số liệu “Phân tích chết tồn phần" phương pháp phân số âm tất mẫu thử khơng mọc tính tốn dựa kết thu theo yêu cầu Phương pháp áp dụng số lượng vi sinh vật hồi phục 5x10° đơn vị khuẩn lạc hình thành/đơn vị đo D.1.2 Quy trình Holcomb-Spearman-Karber (xem D.3.1) Limited-Holcomb-Spearman-Karber (xem D.3.2) cần lần tiếp xúc thành công kéo dài phạm vi phân số âm CHÚ THÍCH Phương pháp khác áp dụng đặc biệt cửa sổ tồn - tiêu diệt biết Một phương pháp thay tương tự phương pháp Stumbo-Murphy-Cochran (xem D.3.3) D.1.3 Các mẫu thử cần tuân theo điều kiện tiếp xúc định với tất thông số trình xử lý, ngoại trừ thời gian, nằm cửa sổ định (trạng thái ổn định) Khi thơng số q trình xử lý chấp nhận hẹp, thời gian ký hiệu "t" Khi thơng số q trình xử lý q rộng không coi ổn định, phương pháp sát nhập sử dụng để tính thời gian tương đương "U" Cả hai thuật ngữ nêu phần xem xét tài liệu D.1.4 Số lượng mẫu tiếp xúc, n, lần tiếp xúc khoảng cách lần tiếp xúc liên tiếp, d, hai tác động đến độ tin cậy thử nghiệm D.2 Chất liệu D.2.1 Các mẫu thử cần đại diện cho dịch treo chứa bào tử, chất mang cấy, chất thị sinh học bao gói D.2.2 Sử dụng thiết bị đo tổ hợp đối chứng tương ứng CHÚ THÍCH Các phương pháp nêu phần sau TCVN 9855 (ISO 11138) Đặc điểm kỹ thuật thiết bị đo tổ hợp đối chứng nêu tiêu chuẩn thiết bị đo tổ hợp đối chứng (ISO 18472) D.2.3 Tủ cấy cần đặt chế độ cung cấp, có giám sát để khẳng định nhiệt độ yêu cầu điều kiện nuôi cấy D.2.4 Môi trường nuôi cấy cần phù hợp với tiêu chuẩn điều kiện nuôi cấy D.3 Các phương pháp D.3.1 Quy trình Holcomb-Spearman-Karber (HSKP) D.3.1.1 Giới thiệu D.3.1.1.1 Các mẫu thử cần tuân theo lần tiếp xúc phân độ theo điều kiện tiếp định với tất thơng số q trình xử lý, ngoại trừ thời gian không đổi Tổng số mẫu thử không 100 Số lượng tối thiểu 20 cần áp dụng cho lần tiếp xúc D.3.1.1.2 Cần sử dụng tối thiểu năm điều kiện tiếp xúc bao gồm mẫu thử tất mẫu mọc (phát triển), hai mẫu thử phần mẫu thử mọc hai mẫu thử, từ lần tiếp xúc kế tiếp, không mọc (không phát triển) CHÚ THÍCH Yêu cầu chi tiết thông số xử lý thiết bị đo tổ hợp đối chứng trình bày phần TCVN 9855 (ISO 11138) D.3.1.1.3 Nếu chất tiệt khuẩn để lại cặn mẫu thử, cặn cần trung hòa nhanh tốt để khỏi ảnh hưởng đến kết thử nghiệm Nếu sử dụng kỹ thuật trung hòa, kỹ thuật cần kiểm định D.3.1.1.4 Các mẫu cần nuôi cấy sau cho tiếp xúc theo phương pháp định nhà sản xuất D.3.1.1.5 Mỗi chất mang cấy chuyển vơ khuẩn sang ống nghiệm chứa thể tích mơi trường ni cấy phù hợp Thể tích mơi trường nuôi cấy tương tự cho lần lặp lại Nếu môi trường nuôi cấy nhà sản xuất cung cấp kèm theo phần không tách rời chất thị sinh học, hướng dẫn nuôi cấy nhà sản xuất cần phải tuân thủ Nhà sản xuất chất thị sinh học cần xác định cung cấp sẵn môi trường để hồi phục phù hợp và/hoặc đầy đủ liệu để chuẩn bị môi trường tương tự (xem thêm 4.3) D.3.1.1.6 Mẫu thử cần nuôi cấy theo phương pháp định nhà sản xuất, mẫu cần kiểm tra sau giai đoạn nuôi cấy khuyến cáo nhà sản xuất sau giai đoạn nuôi cấy xác nhận (xem 7.3) Sự phát triển (mọc) vi sinh vật thử nghiệm xác định qua tượng đục môi trường nước thịt, mọc bề mặt nước thịt, lắng xuống đáy ống nghiệm, phụ thuộc vào đặc điểm vi sinh vật thử nghiệm Nếu môi trường nuôi cấy phần không tách rời chất thị sinh học, ví dụ chất thị sinh học tích hợp sẵn, phát triển khơng phát triển vi sinh vật thử nghiệm cần diễn giải phù hợp với hướng dẫn LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn nhà sản xuất Sự phát triển vi sinh vật chất thị sinh tích hợp sẵn thị thay đổi màu pH D.3.1.1.7 Các kết ghi tỷ số chất mang cấy với số vi sinh vật không hồi phục tổng số chất mang thử nghiệm lần tiếp xúc mức gây chết D.3.1.2 Cách tính tốn theo phương pháp HSKP D.3.1.2.1 Tính tốn dựa tối thiểu điều kiện tiếp xúc cần bao gồm nhất: - Một mẫu thử tất mẫu thử mọc; - Hai mẫu thử phần mẫu thử mọc; - Hai mẫu thử, từ lần tiếp xúc kế tiếp, không mọc (xem Bảng D.1) CHÚ THÍCH Phương pháp HSKP tương tự phương pháp LimitedHolcomb-Spearman-Karber (xem D.3.2), ngoại trừ việc phương pháp sử dụng công thức chung không giới hạn số lần lặp lại tương tự điều kiện tiếp xúc có khoảng thời gian khơng đổi lần tiếp xúc D.3.1.2.2 Giá trị D trung bình tính tốn theo cơng thức sau: N0 số sống trung bình chất thị xác định phương pháp đếm tổng số sống (xem Phụ lục A) Số liệu cần cho việc tính tốn trình bày Bảng D.1 Bảng D.1 - Ví dụ số liệu thu thập cho phương pháp HSKP Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn Số lượng mẫu thử tiếp xúc Số lượng mẫu thử khơng có dấu hiệu phát triển t n r t1(U1) n1 r1 (r=0)a t2 n2 r2 t3 n3 r3 t4 n4 r4 t5(Uk-1) n5 r5 T6(Uk) n6 r6 (r=n6) t7 n7 r7 (r=n7)a CHÚ THÍCH t1 định nghĩa thời gian tiếp xúc dài với chất tiệt khuẩn tiếp xúc mà tất mẫu thử mọc Thời gian tiếp xúc t2 đến t5 lần tăng tiếp xúc phần phân số âm Thời gian tiếp xúc t6 t7 hai lần tiếp xúc liên tiếp mà tất mẫu thử khơng mọc a Thử nghiệm có giá trị khơng có đơn vị âm tính, ví dụ khơng mẫu thử âm tính (r=0), với tất đơn vị có mọc lần tiếp xúc trước t1 tất mẫu thử âm tính (r = n7), ví dụ khơng mẫu mọc lần tiếp xúc sau thời gian t6 D.3.1.2.3 Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn, t1 đến t6, yếu tố LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 tính tốn sau: Cơng ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn ri = số lượng mẫu thử nghiệm khơng có biểu phát triển khoảng thời gian tiếp xúc ti; ni = số lượng tiếp xúc khoảng thời gian tiếp xúc ti Tại thời điểm t1, tất mẫu thử mọc Từ cách tính giá trị trên, giá trị Ui tính cho lần tiếp xúc, ti, sau: D.3.1.2.4 Thời gian trung bình đạt vơ khuẩn, UHSK, từ mẫu thử tính tổng Ui cho thời gian tiếp xúc từ t1 đến t6: D.3.1.2.5 Khi khoảng cách lần tiếp xúc, d, khơng đổi có số mẫu thử, n, sử dụng lần tiếp xúc, thời gian trung bình đạt vơ khuẩn tính theo cơng thức sau: D.3.1.2.6 Giá trị D trung bình, , tính tốn theo cơng thức sau: CHÚ THÍCH log (hằng số Euler)=log (0,577 2)=-0,2507 Trong N0 số lượng vi sinh vật sống ban đầu mẫu thử nghiệm (xem Phụ lục A) D.3.1.2.7 95% khoảng tin cậy (p = 0,05)Dcalc, tính tốn cơng thức sau: D.3.1.2.8 Phương sai, V, tính tốn theo cơng thức sau: D.3.1.2.9 giá trị “a” cho phương sai tính tốn cơng thức sau: D.3.1.3 Ví dụ tính tốn theo phương pháp Holcomb-Spearman-Karber (HSKP) Bảng D.2 - Các ví dụ số liệu với khoảng thời gian không định số lượng mẫu thử không định Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn Số lượng mẫu thử tiếp xúc Số lượng mẫu thử không phát triển n t ri t1 = 10 n120 r10 t2 = 18 n219 r24 t3 = 28 n321 r38 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn www.luatminhkhue.vn Số lượng mẫu thử tiếp xúc Số lượng mẫu thử không phát triển n t ri t4 = 40 n420 r412 t5 = 50 n520 r516 t6 = 60 N620 r620 t7 = 70 n720 r720 D.3.1.3.1 Tính (đối với lần tiếp xúc) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn CHÚ THÍCH Để tính Điều xảy số lượng mẫu thử biểu phát triển vi sinh vật tốc độ định ví dụ D.3.1.3.2 Tính Ui cho thời gian tiếp xúc, ti: U1 = x1y1 = 14 x 0,21 = 2,94 U2 = 23 x 0,17 = 3,91 U3 = 34 x 0,22 = 7,48 U4 = 45 x 0,2 = 9,0 U5 = 55 x 0,2 = 11,0 U6 = 65 x = D.3.1.3.3 Thời gian trung bình đạt vơ khuẩn, UHSK, tính tốn theo cơng thức sau: UHSK = μ1 + μ2 + μ3 + μ4 + μ5 + μ6 UHSK = 2,94 + 3,91 + 7,48 + 9,0 + 11,0 + = 34,33 D.3.1.3.4 Giá trị D trung bình, , tính theo cơng thức sau: N0 = quần thể ban đầu 1x105; D.3.1.3.5 Khoảng tin cậy 95% cho giá trị tính theo cơng thức sau: D.3.1.3.6 Phương sai, V, tính theo cơng thức sau: D.3.1.3.7 Giá trị "a" công thức phương sai cho ti tổng cho tất kết tính tốn theo công thức sau: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn A = 0,25[2,9917 + 5,7070 + 6,1137 + 3,3684 + 0,0000] = 0,25 x 18,1808 A = 0,25 x 18,1808 = 4,5452 D.3.1.3.8 Phương sai, V, tính tốn theo cơng thức sau “a” tính: N0 = 1x105 = 4,5452 x (0,19045)2 = 4,5452 x 0,03627 V = 0,1649 D.3.1.3.9 Khoảng tin cậy 95% cho giá trị tính tốn theo cơng thức sau: D.3.1.3.10 Giới hạn khoảng tin cậy: = 6,54 + (2 x 0,406 1) = 5,73 D.3.1.3.11 Giới hạn khoảng tin cậy: = 6,54 + (2 x 406 1) = 7,35 D.3.2 Quy trình Holcomb-Spearman-Karber giới hạn (LHSKP) D.3.2 Tính tốn phương pháp LHSKP D.3.2.1.1 Các tính toán phương pháp LHSKP dựa tối thiểu lần tiếp xúc cần kèm theo điều kiện sau: - mẫu thử mà tất mẫu có biểu phát triển vi sinh vật; - hai mẫu thử phần mẫu thử có biểu vi sinh vật; - hai mẫu thử khơng có mẫu thử có biểu phát triển vi sinh vật (xem Bảng D.3) D.3.2.1.2 Quy trình LHSK tương tự HSKP (xem D.3.1), ngoại trừ việc phương pháp sử dụng công thức cần số lượng thử nghiệm lặp lại giống điều kiện tiếp xúc khoảng cách thời gian định lần tiếp xúc LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Bảng D.3 - Ví dụ số liệu thu cho quy trình LHSKP với khoảng thời gian định số lượng mẫu không đổi Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn t Số lượng mẫu thử tiếp xúc Số Iượng mẫu thử không mọc n ri T1(U1) n1 r1(r=0) t2 n2 r2 t3 n3 r3 t4 n4 r4 T5(Uk-1) n5 R5 t6(Uk) n6 R6(r=n) t7 n7 r7(r=n)a a Thử nghiệm có giá trị khơng có đơn vị ám tính nào, ví dụ khơng có mẫu âm tính (r=0), với tất mẫu không mọc lần tiếp xúc trước U1 tất mẫu lặp lại âm tính (r=n) ví dụ: khơng mẫu lặp lại mọc thời điểm tiếp xúc sau Uk D.3.2.1.3 Thời gian trung bình để đạt vơ khuẩn, U HSK, tính theo cơng thức sau: UHSK thời gian trung bình đạt vơ khuẩn; Uk tiếp xúc khơng có vi sinh vật mọc mẫu lặp lại; d thời gian khoảng thời gian lần tiếp xúc (giống hệt nhau); n số lượng mẫu lặp lại lần tiếp xúc (số nhận dạng lần tiếp xúc, ví dụ 20); N0 số lượng vi sinh vật sống trung bình đếm cho chất thị xác định phương pháp đếm tổng số sống (xem Phụ lục A); tổng giá trị âm U2 Uk-1 D.3.2.1.4 Giá trị D trung bình, , tính theo cơng thức sau: CHÚ THÍCH Khi sử dụng cơng thức trên, phương pháp LHSK cho phép tính tốn phương sai V, độ lệch chuẩn (SD) khoảng tin cậy 95% (giới hạn khoảng tin cậy) D.3.2.1.5 Phương sai V tính theo cơng thức sau: D.3.2.1.6 Độ lệch chuẩn (SD) tính theo cơng thức sau: D.3.2.1.7 Khoảng tin cậy 50% cho giá trị , tính tốn theo cơng thức sau: giới hạn D.3.2.1.8 D giới hạn khoảng tin cậy LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn D.3.2.1.9 D giới hạn khoảng tin cậy D.3.2.2 Ví dụ tính tốn theo quy trình Limited Holcomb-Spearman-Karber procedure (LHSKP) Bảng D.4 - Các ví dụ số liệu với khoảng thời gian không đổi số lượng mẫu không đổi Thời gian tiếp xúc với chất khử khuẩn t Số lượng mẫu thử tiếp xúc Số lượng mẫu thử khơng có dấu hiệu phát triển (mọc) n ri t1=20(U1) n1=20 r1=0(r=0) t2=22 n2=20 r2=1 t3=24 n3=20 r3=7 t4=26 n4=20 r4= t5=28(Uk-1) n5=20 r5= t6=30(Uk) n6=20 r6=20(r=n)a t7=32 n7=20 R7=20(r=n) a Thử nghiệm có giá trị khơng có đơn vị âm tính nào, ví dụ khơng có mẫu âm tính (r=0), với tất mẫu không mọc lần tiếp xúc trước U1 tất mẫu lặp lại âm tính (r=n) ví dụ: khơng mẫu lặp lại mọc thời điểm tiếp xúc sau Uk D.3.2.2.1 Giá trị D tính theo cơng thức sau: N0 = x 106 D.3.2.2.2 Thời gian tiếp xúc trung bình cần thiết để đạt tình trạng vơ khuẩn tính theo cơng thức sau: Uk = 30 d=2 n = 20 N0 = x 106 (làm tròn đến chữ số thập phân D= 4,0 min) D.3.2.2.3 Phương sai, V, tính theo cơng thức sau: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn D.3.2.2.4 Độ lệch chuẩn (SD) tính theo cơng thức sau: SD = SD = = 0,327 D.3.2.2.5 Khoảng tin cậy 95% giá trị , tính tốn theo cơng thức sau: D giới hạn khoảng tin cậy N0 = x 106 D giới hạn khoảng tin cậy D.3.3 Quy trình Stumbo-Murphy-Cochran-Procedure(SMCP) D.3.3.1 Giới thiệu D.3.3.1.1 Các phương pháp khác để phân tích số liệu âm tính dùng tương đương với phương pháp D.3.1 D.3.2 trình bày D.3.3.1.2 SMCP phương pháp số có khả (MPN - most probable number) áp dụng thực tế đặc điểm đáp ứng dự đốn D.3.3.1.3 Cơng thức cho phương pháp SMCP cần kết phạm vi phân số âm tính bao gồm thời gian, t, số đơn vị không mọc, r, số lần lặp lại, n, lần tiếp xúc với phạm vi phân số âm số lượng vi sinh vật ban đầu cho lần lặp lại, N0 D.3.3.1.4 Để có số liệu có giá trị cho phương pháp SMCP, giá trị D cần tính trung bình cho ba lần chạy phạm vi phân số âm để khẳng định khả lặp lại D.3.3.1.5 Chất liệu sử dụng tương tự D.2 D.3.3.1.6 Đối với khoảng tin cậy 95%, không 50 lần lặp lại cho điều kiện tiếp xúc cần tiến hành điều kiện r/n