Luân văn : Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E coly DH5α part 5 pot

... bằng 3μl elution buffer. 3.3.11 Chuyển sản phẩm nối vào tế bào vi khuẩn E. coly DH5α khả nạp (theo quy trình của Sambrook và cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực hiện biến nạp theo quy trình sau ... sau: Nồng độ ATP thấp (0.5mM), (Ferretti và Sgaramella 1981), nồng độ enzym lygase cao (50 unit/ml), lƣợng DNA insert và vector cao, tỉ lệ về số mol của vector và đ...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... Các loại enzym dùng trong thí nghiệm 25 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 3.3.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly DH5α và kiểm ... biến nạp 4 2.3 Sự biến nạp nhân tạo vào tế bào E. coly 5 2.3.1 Khái niệm sự biến nạp nhân tạo. 5 2.3.2 Sự điều hoà gen của o...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... dùng cho chiết tách DNA plasmid 58 PHẦN 5 : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5. 1 Kết luận Chúng tôi đã xây dựng đƣợc quy trình chuyển một đoạn DNA bất kỳ vào tế bào chủ DH5α. Quy trình này có thể sử ... huyền phù tế bào competen cell đã đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1 .5 ml, thêm 0 .5 l DNA plasmid vào, đảo nhẹ, giữ lạnh trong đá trong 20 phút. Bƣớc...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... đƣợc quy trình tách chiết plasmid từ vi khuẩn E. coly biến nạp, kết quả tách chiết không còn lẫn DNA genome và các tạp DC 1 2 3 4 5 1 2 DC 3 4 5 DNA plasmid 3.0kb DNA plasmid 3.0kb 54 ... (blunt end) cho đoạn DNA DC TS TS DC EcoRV DC1 DC2 DC3 DNA plasmid 3.0kb 56 Hình 4.20 Sản phẩm cắt plasmid tách chiết mẫu biến nạp đoạn DNA 629bp...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... plasmid vào tế bào vi khuẩn 4.2.1 Chọn lọc vi khuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml Hình 4.3 Kết quả cấy vi khuẩn biến nạp khi sốc nhiệt 90 giây. (a) biến nạp với tỉ lệ tế bào khả nạp ... khuẩn biến nạp ở tỉ lệ thể tích là 10 : 1. Hình 4.8 Kết quả cấy vi khuẩn biến nạp ở tỉ lệ thể tích là 3 : 0 .5. Biến nạ...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly DH5α và kiểm tra Sơ đồ 3.3 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly DH5α và ... lại quy trình trên nhƣng không cho DNA plasmid vào khả nạp để làm đối chứng. Quy trình 2 Hút 10µl dịch huyền phù tế bào compete...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... giải) 3’ 5 và exonuclease 5 3’. Enzym DNA fragment Klenow là enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ một protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease 5 3’. Do đó, enzym Klenow ... là vi khuẩn E. coly DH5α và plasmid pBluescirpt II SK ( + / - ), đoạn DNA thu đƣợc từ phản ứng PCR. 3.2.1.1 Vi khuẩn E. coly DH5α Chủng vi khuẩn đã đột biến, có...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... tƣợng biến nạp ở vi khuẩn 2.1.1 Hiện tƣợng biến nạp Biến nạp là hiện tƣợng tiếp nhận DNA từ bên ngoài vào tế bào vi khuẩn. Hiện tƣợng biến nạp đƣợc chứng minh lần đầu tiên trên vi khuẩn Streptococcus ... khi nồng độ ComK thấp. 2.3 Sự biến nạp nhân tạo vào tế bào E. coly 2.3.1 Khái niệm sự biến nạp nhân tạo. Biến nạp nhân tạo là vi...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 06:20

... Sơ đồ 3.3 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E. coly DH5α và kiểm tra. Vi khuẩn Ecoly DH5α Khả nạp + CaCl 2 Plasmid Bluescript II SK (+/-) Vi khuẩn mang plasmid Bluescript Sốc ... khi biến nạp plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn E. coly bằng phƣơng pháp Calcium chloride. Sambrook và cộng sự (1989), đƣa ra phƣơng pháp chuẩ...

Ngày tải lên: 16/11/2012, 16:15

... nối vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α khả nạp (theo quy trình của Sambrook và cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực hiện biến nạp theo quy trình sau: - Hút 10µl dịch huyền phù tế bào competent cell ... plasmid vào tế bào vi khuẩn Hình 4.1 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn ở thể tích...

Ngày tải lên: 28/07/2014, 02:21