Mục đích: Dựa vào cơ sở khi nồng độ muối thấp tính hòa tan tăng, nồng độ muối cao tính tan giảm do phân tử protein được bền vững nhờ lớp vỏ nước (vỏ hydrat), nếu nồng độ muối cao chúng sẽ cạnh tranh lấy đi lớp vỏ nước của protein, các phân tử protein sẽ mất đi lớp vỏ hydrat liên hợp lại tạo kết tủa. Sử dụng muối NaCl rắn để tủa enzyme papain nhằm tách dịch chiết enzyme thành hai phần: phần rắn là tủa enzyme papain, phần dịch chứa các thành phần còn lại.
Cách tiến hành: Sau khi hòa tan tủa xong ta tiến hành thêm từ từ NaCl rắn vào trong dịch chứa enzyme theo tỉ lệ khối lượng 1:10 (tức 10g dịch chứa enzyme thì cần 1g NaCl rắn) và đồng thời khuấy đều.
3.2.9. Ly tâm lần 3
Mục đích: Loại bỏ phần dịch có chứa peptidase A, B ra khỏi tủa có chứa enzyme papain.
Cách tiến hành: Sau khi phân đoạn bằng NaCl ta tiến hành ly tâm với tốc độ 6000 vòng/phút trong vòng 1 giờ. Kết thúc quá trình ly tâm ta thu tủa của enzyme papain, loại bỏ dịch chứa peptidase A, peptidase B, Cystein, muối NaCl.
3.2.10. Hòa tan tủa
Mục đích: Nhằm hòa tan papain và hoạt hóa enzyme papain đồng thời điều chỉnh pH của dịch enzyme về 6.5, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình kết tinh.
Cách tiến hành: Tủa thu được sau ly tâm hòa tan bằng dung dịch Cystein 0,002M.
3.2.11. Kết tinh
Mục đích: Nhằm tách enzyme papain hòa tan trong dịch chiết enzyme dưới dạng tinh thể, tăng độ tinh khiết cho enzyme papain.
Cách tiến hành: Sau khi hòa tan tủa ta được dịch chiết enzyme để nguyên ở nhiệt độ phòng trong vòng 30 phút để tạo thành mầm tinh thể sau đó duy trì ở 40C trong vòng 10÷12, khi đó lượng tinh thể tạo thành là nhiều nhất, sau đó đem ly tâm lạnh.
