4. BầN LUẬN
4.1.2. Mô hình thử trên in-vivo
4.I.2.I. Gây loét bằng phương pháp vật lý * Mô hình thắt môn vị
Mô hình Shay (thắt môn vị) thường là lựa chọn đầu tiên để khảo sát tác dụng chống loét dạ dày tá tràng của thuốc. Từ đó có thể kết luận sơ bộ thuốc có tác dụng chống loét dạ dày hay không. Tỷ lệ gây loét trên mô hình này là 40- 100% trong thời gian 18- 24 giờ sau khi thắt môn vị. Trong điều kiện của Việt Nam, mô hình này tiến hành đơn giản và cho kết quả tin cậy nên hay được áp dụng. Ngoài ý nghĩa khảo sát tác dụng chống loét dạ dày tá tràng của thuốc, mô hình còn dùng để so sánh tác dụng của thuốc trên các mô hình khác và đánh giá khả năng tiết acid dạ dày. Để giảm bớt thời gian nghiên cứu cũng như để tìm ra cơ chế của thuốc, một số tác giả đã phối hợp phương pháp thắt môn vị và một số phương pháp khác. Thắt môn vị dùng cùng acid, mô phỏng tình trạng hẹp môn vị kèm tăng tiết acid. Thắt môn vị có dùng thêm cồn mô phỏng tình trạng hẹp môn vị kèm suy giảm yếu tố bảo vệ. Hay, thắt môn vị đồng thời kẹp động mạch gây thiếu máu đã chứng minh thắt môn vị không chỉ làm chậm tháo rỗng dạ dày mà còn gây ứ trệ vi tuần hoàn, làm tổn thương mạch máu kèm theo thiếu máu. Các thuốc antacid, kháng H2, ức chế bơm proton, bảo vệ dạ dày đều có tác dụng trên mô hình này. Có thể lựa chọn thuốc đối chiếu trong mô hình này là antacid, ức chế bơm proton, kháng H2
hay sucralfat. Vì vậy, thuốc có tác dụng chống loét dạ dày trên thử nghiệm này tác dụng theo nhiều cơ chế khác nhau: antacid, ức chế bơm proton, kháng H2 hay bảo vệ (kắch thắch tiết prostaglandin và chất nhày). Từ kết quả ức chế loét của các thuốc đối chiếu ta có thể lựa chọn làm thuốc đối chiếu để so sánh với thuốc đang nghiên cứu. Nếu thuốc nghiên cứu cho kết quả tương đương
với thuốc chuẩn thì có thể thuốc đang nghiên cứu có cơ chế tác dụng như thuốc chuẩn. Trong điều kiện của Việt Nam, mô hình này hay được áp dụng do tiến hành đơn giản và kết quả nghiên cứu gợi ý cho các bước thử nghiệm tiếp theo.
* Các mô hình gây stress
Đây là mô hình thường được sử dụng tiếp theo, sau khi đã chứng minh thuốc có tác dụng chống loét dạ dày tá tràng. Kết quả sau một stress là tăng nồng độ corticoid, tăng enzym superoxidase dismutase, catalase, lipid peoxidase, đồng thời giảm sản xuất chất nhày, giảm tiết HCO3', giảm tổng hợp PG và NO. Trên mô hình gây loét cấp thì lượng corticoid lớn hcfn nhiều so với gây loét mạn. Sau một stress nhỏ liên tục (gây loét mạn), cơ thể tiết corticoid ắt và thắch nghi với lượng hormon này nên các phản ứng không ồ ạt, chỉ gây loét trợt nhỏ. Ngược lại, sau một stress mạnh và đủ dài thì lượng corticoid giải phóng với một lượng lớn, các phản ứng đáp ứng của cơ thể diễn ra mạnh mẽ gây một vết loét sâu, tổn thương mạch máu và biểu mô niêm mạc. Như vậy sau một stress, có tăng bài tiết acid (tăng yếu tố tấn công), tổn thương mạch máu, giảm tiết chất nhày, PG, NO (giảm yếu tố bảo vệ). Vì thế, mô hình gây stress cũng là một mô hình gây loét theo nhiều cách khác nhau, giảm yếu tố bảo vệ tăng yếu tố tấn công.
Ễ Mô hình gây stress bằng dòng điện kắch thắch có khả năng gây loét 40%. Thời gian thử nghiệm kéo dài nhưng hiệu quả không cao. Mặt khác với hiệu quả gây loét thấp như vậy chứng tỏ cho kết quả không ổn định. Vì vậy mô hình này hiện nay có ắt tác giả sử dụng nghiên cứu.
Ễ Mô hình gây stress bằng phương pháp gò bó (là mô hình gây ra
một stress tâm lý). Việc giam giữ chuột kéo dai) trong điều kiện thiếu ánh sáng là một stress đủ để gây loét thực nghiệm. Tiến hành giam giữ con vật trong bóng tối 24 giờ hoặc 1 2 giờ trong bóng tối 1 2 giờ ngoài ánh sáng và có khả năng gây loét từ 60- 100 %. Tuy nhiên, thử nghiệm này khá dài, gây bất tiện
cho người tiến hành thử nghiệm, đồng thời niêm mạc dạ dày có thời gian tự hồi phục, tăng sinh trở lại. Vì vậy việc đánh giá tác dụng của thuốc không còn chắnh xác.
Ễ Mô hình gây stress bằng nhúng trong nước lạnh (4- 6ổC), thời gian gây loét là 1 giờ, rút ngắn hơn mô hình trước, hiệu quả gây loét là từ 90-
100%, nên có thể gây một loét cấp. Việc đánh giá tác dụng của thuốc trên mô hình này một cách chắnh xác hơn mô hình trên do loại trừ được sự tự tăng sinh và liền vết loét niêm mạc. Mặt khác khoảng dao động bé nên kết quả ổn định và hay được áp dụng trong nghiên cứu. Như vậy, mô hình hay được áp dụng vì thuận tiện và cho kết quả tin cậy. Một số tác giả đã cải tiến bằng cách kết hợp giữa gây stress nhúng trong nước lạnh và giam giữ con vật. Hiệu quả gây loét là 100% và thời gian thực hiện thắ nghiệm trong 1-2 giờ. Với mô hình cải tiến này, có thể rút ngắn thời gian thử nghiệm, độ ổn định cao, lại cho kết quả tin cậy. Do đó, mô hình cải tiến này cũng là một trong những mô hình hay được áp dụng.
Thuốc đối chiếu được sử dụng trên mô hình này có thể thuộc nhóm antacid, kháng H2, ức chế bơm proton, bao vết loét, bảo vệ. Việc lựa chọn thuốc đối chiếu là quan trọng. Vì để tìm ra cơ chế tác dụng của thuốc nghiên cứu thì phải tiến hành so sánh kết quả chống loét giữa hai lô thử và lô đối chiếu. Nếu kết quả cho là tương tự thì có thể nhận định thuốc nghiên cứu có cơ chế tương tự như thuốc đối chiếu. Như vậy, trên mô hình gây stress có thể tìm ra cơ chế tác dụng của thuốc theo cơ chế: bảo vệ (kắch thắch tăng sinh chất nhày, dọn gốc tự do, Imi thông vi tuần hoàn tương tự misoprostol), kháng H2, ức chế bơm proton, antacid thậm chắ là an thần để ức chế loét.
* Gây loét bằng kẹp động mạch gây thiếu máu- tái truyền dịch
Kẹp động mạch dẫn đến thiếu máu, thiếu oxy ở mô, tăng tốc độ tạo gốc tự do kết quả là gây loét dạ dày tá tràng. Mô hình này đã chứng tỏ thiếu máu có thể gây loét dạ dày tá tràng. Hiệu quả gây loét của mô hình này tương tự
như mô hình gây stress- nhúng trong nước lạnh đạt 90- 100%. Tình trạng loét còn phụ thuộc vào thời gian kẹp động mạch gây thiếu máu. Thiếu máu càng lâu thì khả năng gây hoại tử mô càng lớn, vết loét sâu hơn, rộng hofn. Thử nghiệm kẹp động mạch tái tưới máu cũng như trên mô hình dùng cồn, indomethacin, thiếu máu mạn đều có xuất hiện endothelin- 1 (chất gây co mạch làm giảm vi tuần hoàn và gây loét). Để tăng hiệu quả gây loét cũng như tìm ra cơ chế tác dụng của thuốc, các tác giả đã cải tiến phương pháp bằng cách kết hợp kẹp động mạch với nhiều mô hình khác. Các mô hình kết hợp hay được áp dụng là kẹp động mạch với dùng acid, NSAIDS, cồn. Kẹp động mạch kết hợp với dùng acid mô phỏng trên những bệnh nhân có thiếu máu, tăng tiết acid. Kẹp động mạch dùng thêm NSAIDs, cồn sẽ làm giảm mạnh yếu tố bảo vệ. Kết quả sự phối hợp này là càng làm tăng yếu tố tấn công và giảm yếu tố bảo vệ của cơ thể theo nhiều cách khác nhau. Do đó, thuốc tác dụng trên mô hình thiếu máu do kẹp động mạch tạng có thể có cơ chế là antacid, ức chế bơm proton, bao vết loét, bảo vệ (tăng tiết prostaglandin, NO, chất nhày, chống oxy hóa). Thời gian tiến hành trên mô hình kẹp động mạch cũng như trên mô hình cải tiến rút ngắn đồng thời cho kết quả ổn định. Nên đây cũng là một trong những mô hình thường hay được áp dụng trong các thử nghiệm. Tuy nhiên, kĩ thuật tìm động mạch tạng và kẹp sao cho không bị vỡ mạch là một kĩ thuật khó, nên trong điều kiện của Việt Nam vẫn chưa có công trình nào nghiên cứu sử dụng mô hình này.