- Tác dụng kháng khuẩn: nƣớc sắc hoàng kỳ 100% có tác dụng kháng các chủng vi khuẩn lỵ Shigella, tụ cầu vàng, trực khuẩn mủ xanh, thƣơng hàn, liên cầu khuẩn
c) Định lƣợng rutin, quercetin trong chế phẩm TA bằng HPLC.
3.3.5. Độc tính bán trƣờng diễn
* Ảnh hƣởng của Toạ An đến tăng trƣởng thể trọng của chuột cống trắng
Chuột cống trắng đƣợc cân hàng tuần trong suốt quá trình thực nghiệm. Kết quả đƣợc thể hiện trên hình 3.22.
67
Hình 3.22. Biểu đồ biểu thị ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An dùng liên tục 28 ngày đến khối lƣợng cơ thể chuột cống trắng.
A. Chuột cống trắng đực B. Chuột cống trắng cái
Nhận xét:Trong suốt 4 tuần làm thực nghiệm, không có sự khác biệt về khối lƣợng cơ thể chuột giữa các lô chứng so với các lô thử tại tất cả các thời điểm nghiên cứu.
*Ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An đến các chỉ số huyết học trên chuột
Nghiên cứu ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An trên chức năng tạo máu của chuột thí nghiệm qua các thông số huyết học: số lƣợng hồng cầu (RBC), nồng độ hemoglobin (HGB), tỷ lệ hematocrit (HCT), thể tích trung bình hồng cầu (MCV), lƣợng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH), nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCHC), số lƣợng tiểu cầu (PLT), số lƣợng bạch cầu (WBC) và tỷ lệ % tế bào lympho (LYM%). Kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.18.
68
Bảng 3.18. Ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An đến các chỉ số huyết học trên chuột cống trắng Chỉ số(Đơn vị) Đực Cái Chứng n = 10 TA 2 3,75g/kg n = 10 TA 1 1,25g/kg n = 10 Chứng (n=8) TA 2 3,75g/kg n = 10 TA 1 1,25g/kg n = 10 RBC (1012/L) 8,29 ± 0,15 8,31±0,25 8,62 ± 0,50 7,46±0,16 7,21±0,21 7,61±0,19 HGB (g/dL) 14,14±0,28 13,97±0,36 14,62±0,51 13,33±0,21 13,06±0,40 13,45±0,45 HCT (%) 42,52±0,72 42,49±1,19 43,76±1,79 39,33±0,82 38,02±1,13 39,86±1,09 MCV (fL) 50,31±1,24 50,55±2,52 52,66±3,82 47,39±0,83 46,73±0,87 47,64±0,92 MCH (pg) 20,45±0,52 20,50±1,03 21,43±1,73 19,25±0,17 19,05±0,19 19,17±0,17 MCHC (g/dL) 32,41±0,88 33,23±1,68 33,79±2,35 30,49±0,34 30,75±0,54 30,58±0,35 PLT (109/L) 799,2±46,5 875,0±47,7 749,1±64,8 797,5±29,2 848,8±33,4 872,7±22,7 WBC (109/L) 7,05 ± 0,41 8,01 ± 0,79 8,62 ± 0,50 7,37 ± 0,50 8,17 ± 0,77 8,64 ± 0,76 LYM% (%) 61,77±1,33 63,49±5,13 62,69±1,62 58,34±1,61 59,02±1,67 60,11±1,08
Nhận xét: Sự khác biệt về các chỉ số huyết học giữa các lô thử nghiệm so với các lô chứng không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) sau 28 ngày dùng chế phẩm thử.
69
*Ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An đến các chỉ số hóa sinh trên chuột
Sinh hóa máu đƣợc đánh giá thông qua hai enzym chỉ thị chức năng gan là AST, ALT và các chỉ số glucose, cholesterol toàn phần, protein toàn phần và creatinin huyết thanh. Kết quả đƣợc trình bày trong bảng 3.19.
Bảng 3.19. Ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An đến các chỉ số hóa sinh trên chuột cống trắng Chỉ số (Đơn vị) Đực Cái Chứng (n=10) TA 2 3,75 g/kg (n=10) TA 1 1,25 g/kg (n=10) Chứng (n=8) TA 2 3,75 g/kg (n=10) TA 1 1,25 g/kg (n=10) AST (U/L) 151,1 ± 6,2 156,8±19,4 146,5±8,4 104,0±8,6 170,0±24,3 137,6±14,9 ALT (U/L) 62,71±2,98 68,98±3,96 72,56±5,98 50,21±4,27 68,00±8,68 60,31±5,37 Glucose (mmol/L) 3,26 ± 0,23 3,39 ± 0,25 3,29 ± 0,29 4,65 ± 0,32 3,65 ± 0,54 3,77 ± 0,30 Cholesterol TP(mmol/L) 1,28 ± 0,08 1,10 ± 0,06 1,38 ± 0,08 1,08 ± 0,06 1,42 ± 0,12 1,23 ± 0,06 Protein TP(g/L) 84,35±2,21 88,72±1,61 88,19±2,07 87,60±1,71 88,57±1,79 89,45±1,83 Creatinin (mol/L) 45,16±6,82 36,84±1,59 39,22±2,76 51,82±9,41 48,03±3,21 35,72±1,24 Acid uric (mol/L) 229,9±58,3 405,9±93,6 252,8±35,5 265,8±25,5 194,7±17,4 220,4±32,5 Albumin (g/L) 41,67±1,50 41,23±0,94 37,72±1,44 47,84±1,66 39,13±1,21 * 38,61±0,96*
* p< 0,05 khi so sánh với lô chứng cùng giống
Nhận xét:Các chỉ số AST, ALT, glucose, cholesterol toàn phần, acid uric, protein toàn phần và creatinin không có sự khác biệt giữa lô thử so với lô chứng. Ở chuột
70
cái, nồng độ albumin của cả hai lô thử thấp hơn so với chứng (p < 0,05); trong khi ở chuột đực chỉ số này không có sự khác biệt giữa 2 lô.
* Thay đổi về mô bệnh học trên chuột cống trắng
Sau khi uống thuốc 28 ngày, mổ chuột để quan sát đại thể các cơ quan. Lấy ngẫu nhiên 3 chuột ở từng lô để làm tiêu bản vi thể gan và thận.
- Về đại thể
Không thấy có sự thay đổi đại thể của các cơ quan tim, phổi, gan, lách, hệ tiêu hóa và thận của chuột ở các lô. Tỷ lệ khối lƣợng của các cơ quan so với khối lƣợng cơ thể đƣợc trình bày ở bảng 3.20.
Bảng 3.20. Ảnh hƣởng của chế phẩm Tọa An đến khối lƣợng các cơ quan của chuột cống trắng
Cơ quan
Tỷ lệ khối lƣợng cơ quan so với khối lƣợng cơ thể (%)
Đực Cái Chứng (n=8) TA 2 3,75 g/kg (n=10) TA 1 1,25 g/kg (n=10) Chứng (n=8) TA 2 3,75 g/kg (n=10) TA 1 1,25 g/kg (n=10) Tim 0,39 ± 0,03 0,38 ± 0,03 0,44 ± 0,03 0,44 ± 0,02 0,32±0,06 0,46± 0,03 Gan 3,69 ± 0,09 3,74 ± 0,10 3,46 ± 0,16 4,02 ± 0,19 3,58±0,68 4,29± 0,12 Thận 0,69 ± 0,01 0,67 ± 0,02 0,65 ± 0,02 0,69 ± 0,02 0,59±0,12 0,71± 0,02 Lách 0,33 ± 0,03 0,32 ± 0,02 0,28 ± 0,02 0,32 ± 0,03 0,24±0,05 0,31± 0,01
Nhận xét: Tỷ lệ khối lƣợng các cơ quan tim, gan, thận, lách so với khối lƣợng cơ thể của động vật ở lô thử và lô chứng không khác biệt.
- Về vi thể
Tiêu bản vi thể gan, thận đƣợc thực hiện và đánh giá tại Bộ môn Giải phẫu bệnh- Trƣờng ĐH Y Hà Nội. Kết quả trình bày trong bảng 3.21; 3.22 và hình 3.23; 3.24.
71
Bảng 3.21. Ảnh hƣởng của Toạ an đến cấu trúc vi thể gan chuột
Lô chứng Lô TA 1(1,25g/kg) Lô TA 2 (3,75g/kg)
Đực Cái Đực Cái Đực Cái
Các tiểu thùy gan có cấu trúc bình thƣờng. Tế bào gan không thoái hóa, khoảng cửa không có xâm nhập viêm, không thấy hoại tử tế bào gan. Một số tế bào gan có tổn thƣơng thoái hóa nƣớc ( tổn thƣơng hồi phục đƣợc). Một số tế bào gan thoái hóa mất nhân. Một số có hình ảnh viêm gan khoảng cửa. Các tế bào gan không bị ứ đọng quá mức glycogen.
Các tiểu thùy gan có cấu trúc bình thƣờng. Tế bào gan không thoái hóa, khoảng cửa không có xâm nhập viêm, không thấy hoại tử tế bào gan. Một số tế bào gan có tổn thƣơng thoái hóa nƣớc ( tổn thƣơng hồi phục đƣợc).
Các tiểu thùy gan có cấu trúc bình thƣờng. Tế bào gan không thoái hóa, khoảng cửa không có xâm nhập viêm, không thấy hoại tử tế bào gan. Một số tế bào gan có tổn thƣơng thoái hóa nƣớc (tổn thƣơng hồi phục đƣợc).
Kết quả do PGS.TS. Lê trung Thọ – Bộ môn Giải phẫu bệnh -Trƣờng Đại học Y Hà Nội đọc tiêu bản ngày 29 tháng 4 năm 2014.
72
Lô chứng HE x 100 TA 1 1,25g/kg, HE x 100 TA 2 3,75g/kg, HE x 100
Lô chứng HE x 400 TA 1 1,25g/kg, HE x 400. TA 2 3,75g/kg, HE x 400 Hình 3.23. Ảnh vi thể gan chuột ở các lô nghiên cứu
Nhận xét:
Kết quả cho thấy, sau 28 ngày dùng thuốc liên tục, cấu trúc vi thể gan chuột ở các lô dùng Toạ An mức liều 1,25g/kg và 3,75g/kg chuột nhìn chung đều trong giới hạn bình thƣờng, không thấy xuất hiện tổn thƣơng
73
Bảng 3.22. Ảnh hƣởng của Toạ An đến cấu trúc vi thể thận chuột
Lô chứng Lô TA 1
1,25g/kg
Lô TA 2 3,75g/kg
Đực Cái Đực Cái Đực Cái
Các tiểu cầu thận có hình thái bình thƣờng. Các tế bào của cuộn mao mạch cầu thận không tăng sinh, không có hình ảnh thoái hóa. Khoang Bowman thấy rõ, không bị mất. Các tế bào ống thận bình thƣờng, không thoái hóa, không hoại tử. Mô đệm không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm, không thấy hoại tử, không lắng đọng glycogen.
Các tiểu cầu thận có hình thái bình thƣờng. Các tế bào của cuộn mao mạch cầu thận không tăng sinh, không có hình ảnh thoái hóa. Khoang Bowman thấy rõ, không bị mất. Các tế bào ống thận bình thƣờng, không thoái hóa, không hoại tử. Mô đệm không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm, không thấy hoại tử, không lắng đọng glycogen.
Các tiểu cầu thận có hình thái bình thƣờng. Các tế bào của cuộn mao mạch cầu thận không tăng sinh, không có hình ảnh thoái hóa. Khoang Bowman thấy rõ, không bị mất. Các tế bào ống thận bình thƣờng, không thoái hóa, không hoại tử. Mô đệm không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm, không thấy hoại tử, không lắng đọng glycogen.
74
Lô chứng HE x 100 TA 1 1,25g/kg HE x 100 TA 2 3,75g/kg, HE x 100
Lô chứng HE x 400 TA 1 1,25g/kg HE x 400 TA 2 3,75g/kg, HE x 400 Hình 3.24. Ảnh vi thể thận chuột ở các lô nghiên cứu
Nhận xét: Kết quả cho thấy, sau 28 ngày dùng thuốc liên tục, cấu trúc vi thể thận chuột ở các lô dùng Toạ An mức liều 1,25g/kg và 3,75g/kg chuột nhìn chung đều trong giới hạn bình thƣờng, không thấy xuất hiện tổn thƣơng.
75