- Mẫu M01: không tìm thấy morphin, que thử dương tắnh giả. Có các khả năng xảy ra:
+ Người này không sử dụng ma túy opiat, điều nghi ngờ của người nhà chưa đúng. Lời khuyên: sau khi nghe tư vấn, theo dõi tiếp. Nếu cần phân tắch lần 2 khi có dấu hiệu nghi ngờ.
+ Người này có sử dụng ma túy nhưng khi thu mẫu đã bị đánh tráo (việc thu mẫu không đúng quy trình giám sát thu mẫu) Ờ thực tế người nhà không khẳng định được đã giám sát được khi thu mẫu, mà đối tượng tự vào
nhà vệ sinh lấy mẫu rồi mang ra đưa cho người nhà đểđưa đi phân tắch. Cách xử lý: khuyên người nhà về thu lại mẫu ngay nếu có thể hoặc tiếp tục theo dõi
để chọn thời điểm thu lại mẫu.
+ Người này có sử dụng ma túy, nhưng lần sử dụng gần nhất quá xa thời điểm thu mẫu (thường trên 5 ngày với opiat) cho nên trong nước tiểu còn quá ắt mà không phát hiện được
- Mẫu M07: không tìm thấy Morphine, 6-MAM, que thử dương tắnh giả. Đối tượng không sử dụng ma túy. Thực tế khi đấu tranh: đây là người lái xe thuê cho 4 đối tượng kia, họ đã khai nhận không sử dụng chỉ lái xe thuê
- Mẫu M03: có Morphin, Codein, 6-MAM (xem hình 3.13). Chắc chắn
đối tượng đã sử dụng heroin không xa thời điểm thu mẫu. Có thểđối tượng có sử dụng thuốc ho chứa codein như lời khai. Nhưng cũng có thể đối tượng không sử dụng thuốc ho chứa codein mà việc tìm thấy codein là do đối tượng dùng heroin chất lượng kém (khi sản xuất codein lẫn trong morphin chưa
được tách hết, cho nên codein, acetylcodein như là tạp chất trong heroin). - Mẫu M02: có Morphin, Codein nhưng không có 6-MAM. Có các khả
năng:
+ Đối tượng chỉ sử dụng thuốc ho chứa Codein đúng như lời khai + Đối tượng sử dụng heroin chất lượng kém như nói ở trên hoặc đã sử
dụng heroin và thuốc ho chứa codein. Nhưng đối tượng đã sử dụng lần sử
dụng gần nhất quá xa thời điểm thu mẫu cho nên trong nước tiểu còn quá ắt 6- MAM mà không phát hiện được.
Như vậy, không thể phân biệt được Morphin do heroin tạo ra hay do việc uống thuốc ho chứa opiat tạo ra. Lời khuyên: Cho đối tượng về theo dõi tiếp để chọn thời điểm lấy mẫu lại.
- Mẫu M04, M05, M06, M08: Có Morphin, 6-MAM. Khẳng định chắc chắn 04 đối tượng đã sử dụng heroin trước thời điểm thu mẫu không xa. Thực tế các đối tượng vừa tổ chức sử dụng heroin thì bị phát hiện, bắt giữ.
Kết luận:
Qua phân tắch 8 mẫu nước tiểu dương tắnh với que thử miễn dịch morphin của các đối tượng nghi ngờ sử dụng ma túy đã chứng minh được ưu
điểm của phương pháp phân tắch 6-MAM trong mẫu nước tiểu bằng GC-MS so với các phương pháp truyền thống trước đây: Phương pháp khẳng định
được chắc chắn có 5 trong số 8 đối tượng có sử dụng Morphin, loại trừ được các nguyên nhân gây nhiễu như việc đối tượng có uống thuốc ho chứa Codein vvẦ
Bước đầu ứng dụng quy trình nghiên cứu vào thực tiễn cho kết quả khả
quan (nồng độ 6-MAM trong nước tiểu được tìm thấy 48 Ờ 204ng/ml), được kiểm chứng thực tiễn, chứng tỏ quy trình đã đạt được mục tiêu đề ra.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
- Đã xây dựng phương pháp phân tắch định tắnh, định lượng 6-MAM trong mẫu nước tiểu bằng tách chiết lỏng - lỏng, dẫn xuất hóa và phân tắch trên GC-MS. Cụ thể:
+ Thu mẫu: (Thực hiện giống quy trình thu mẫu nước tiểu phân tắch ma túy chung)
Dụng cụ đựng mẫu:Mẫu nước tiểu được thu vào chai, lọ thủy tinh sạch có nút kắn
Giám sát lấy mẫu: người giám sát thu mẫu phải trực tiếp (mặt đối mặt) quan sát trong suốt quá trình thu mẫu
Quan sát, đo các chỉ sổ hóa lý ban đầu: màu sắc, độ trong, pH, thể tắch Niêm phong, ghi nhãn và biên bản thu mẫu (theo mẫu quy định)
Lượng mẫu thu: tối thiểu 5ml/phép phân tắch.
+ Bảo quản, vận chuyển tới phòng thắ nghiệm:
6-MAM trong mẫu nước tiểu bị phân hủy theo thời gian. Tốt nhất phân tắch mẫu ngay sau khi thu mẫu, Nếu nơi thu mẫu xa Phòng thắ nghiệm hoặc chưa phân tắch mẫu được ngay thì phải bảo quản mẫu ở nhiệt độ lạnh (trong thùng đá hoặc ngăn đá tủ lạnh) để giảm thiểu sự phân hủy mẫu.
Xử lý mẫu: Quy trình chiết lỏng-lỏng 6-MAM trong nước tiểu và dẫn xuất hóa
Býớc 1- Lấy 5,0mL nýớc tiểu vào ống nghiệm sạch đã đánh số kắ hiệu; Býớc 2- Acid hóa bằng dung dịch HCl 5%, kiểm tra pH khoảng 2-3; Býớc 3- Chiết loại tạp bằng ether dầu hỏa cùng lýợng. Bỏ pha dung môi;
Býớc 4- Trung hòa dịch chiết bằng dung dịch NaOH 5%, kiểm tra pH bằng giấy quỳ;
Býớc 6- Lắc đều và lọc (nếu cần);
Býớc 7- Thêm 5,0mL dung môi Chloroform/Isopropanol tỷ lệ 9/1; Býớc 8- Lắc ống nghiệm trên máy lắc shaker khoảng 15 phút; Býớc 9- Ly tâm 5 phút 3000vòng/phút để tách pha;
Býớc 10- Hút pha dung môi cho qua phễu lọc chứa Na2SO4 khan, thu 4,5 mL pha dung môi sang một ống nghiệm sạch;
Býớc 11- Pha nýớc đýợc chiết lại 2 lần bằng dung môi (býớc 7 đến býớc 10); Býớc 12- Gộp 3 dung môi chiết và thổi khô dung môi bằng khắ nitõ trong lọ dẫn xuất;
Býớc 13- Thêm 50μl PFPA và dẫn xuất ở 65-700C trong 30 phút;
Býớc 14- Để nguội lọ dẫn xuất đến nhiệt độ phòng (nếu chýa phân tắch có thể bảo quản mẫu này trong khoảng 1 tháng);
Býớc 15- Đuổi PFPA dý bằng khắ nitõ ở nhiệt độ phòng;
Býớc 16- Hòa tan cặn bằng 50μl dung dịch nội chuẩn octacosan 40ng/ml trong ethylacetate, chuyển dung dịch sang lọ sắc ký (insert vial) để phân tắch GC- MS;
+ Phân tắch trên GC-MS: Sắc ký khắ ghép khối phổ tứ cực GC: - Thể tắch bõm mẫu: 1ìl
- Chế độ bõm: Không chia dòng (splitless) - Nhiệt độ inlet: 270oC
- Cột tách: Cột mao quản HP5ms: kắch thýớc: 30m x 0,32nm ID x 0,25 ìm; pha tĩnh: 5%phenyl-95%metyl-polysilosan,
- Khắ mang: heli, Tốc độ dòng khắ mang: 1,5ml/phút
- Chýõng trình nhiệt độ lò Ờ cột: Nhiệt độ đầu 150oC giữ 1 phút, tãng lên 270oC với tốc độ 10oC/phút và giữ 10 phút, Tổng thời gian phân tắch là 23 phút, MS: Nhiệt độ transfer line: 2700C
Nhiệt độ ion sourser: 2300C
Sàng lọc ion: bộ tứ cực,
Chế độ quét: Full scan 40-600m/z, SIM: 6-MAM (327, 268, 215), 6MAM-PFP (473, 414, 361), Morphin(PFP)2 (577, 414), Codein-PFP (445, 282)
- Phương pháp xây dựng cho các thông số thẩm định như sau:
- Đảm bảo tắnh đặc hiệu, tắnh chọn lọc để nhận dạng 6-MAM dạng dẫn xuất trên GC-MS theo điều kiện đã chọn
- Đảm bảo độđúng, độ chắnh xác của phương pháp định lượng dạng vết - Khoảng làm việc đã khảo sát 5-1000ng/ml, cho độ tuyến tắnh chắc chắn giữa nồng độ chất khảo sát và tỷ lệ diện tắch pic chất khảo sát với nội chuẩn
- Giới hạn phát hiện của quy trình LODPP = 6,2 ng/lắt nước tiểu và giới hạn định lượng LOQPP = 21 ng/lắt nước tiểu
- Hiệu suất thu hồi 96-112% ở nồng độ thấp; 87-96% ở nồng độ giữa và 91-102% ở nồng độ cao trong khoảng làm việc
- Bước đầu ứng dụng phân tắch 8 mẫu nước tiểu
Các mẫu nước tiểu phân tắch dương tắnh với que thử miễn dịch morphin của các đối tượng nghi ngờ sử dụng ma túy, đã phát hiện 5 mẫu có 6-MAM (nồng độ 6-MAM trong nước tiểu được tìm thấy 48 Ờ 204ng/l) và khẳng định chắc chắn 5 đối tượng tương ứng đã dùng heroin. Hai đối tượng ứng với 02 mẫu không tìm thấy morphin, 6-MAM đã không dùng ma túy tại thời điểm gần thời điểm thu mẫu hoặc bị tráo mẫu. Một mẫu tìm thấy Morphin, codein, không có 6-MAM thì chưa kết luận được đối tượng ấy có dùng heroin hay thuốc ho codein.
- Cần sớm nghiên cứu để phân biệt trường hợp dùng heroin với trường hợp dùng codein khi mẫu có codein, morphin mà đối tượng khai nhận đã dùng thuốc ho.
- Đề xuất các cơ quan chức năng sớm phê duyệt và ban hành quy trình phân tắch này để làm cơ sở pháp lý kết luận các trường hợp sử dụng heroin, Từđó, trang bị phương tiện và đào tạo tập huấn chuyển giao quy trình cho các phòng thắ nghiệm phân tắch giám định ma túy toàn quốc./.