3.1.2.1 Tiêu chắ lựa chọn dung môi chiết
Các dung môi được lựa chọn để khảo sát trong thực tế cần đáp ứng một số tiêu chắ như sau:
- Dung môi không hòa tan trong nước - Dễ bay hơi
- Dung môi ắt độc, thông dụng, thường dùng trong các phòng thắ nghiệm phân tắch - Dung môi dễ tách pha khi chiết
Ngoài ra có thể xem xét thêm các yếu tố như an toàn cháy nổ, khả năng kắch ứng khi tiếp xúc, Ầ
3.1.2.2 Cách tiến hành
Căn cứ các tiêu chắ trên và tham khảo các tài liệu chuyên ngành về
dung môi chiết 6-MAM được lựa chọn để khảo sát bao gồm: Ethylacetate (viết tắt EtAc), Toluen, Dichlorometan (viết tắt DCM), Diethylete (viết tắt Ete), Chloroform (viết tắt Clof). Quá trình khảo sát chọn dung môi chiết được tiến hành như sau:
Býớc 1- Lấy vào 5 ống nghiệm sạch đã đánh số, mỗi ống 5,0mL nýớc tiểu khảo sát,
Býớc 2- Acid hóa bằng dung dịch HCl 5%,
Býớc 3- Chiết loại tạp bằng ether dầu hỏa cùng lýợng. Bỏ pha dung môi,
Býớc 4- Trung hòa dịch chiết bằng dung dịch NaOH 5%, Býớc 5- Thêm vào mỗi ống nghiệm NaHCO3 đến bão hòa,
Býớc 6- Lắc đều và kiểm tra pH ở mỗi ống nghiệm bằng giấy quỳ, Býớc 7- Thêm vào mỗi ống nghiệm 5,0mL dung môi khảo sát, Býớc 8- Lắc các ống nghiệm trên máy lắc shaker khoảng 15 phút, Býớc 9- Ly tâm 5 phút 3000vòng/phút để tách pha,
Býớc 10- Hút pha dung môi cho qua phễu lọc chứa Na2SO4 khan, thu 4,5 mL pha dung môi sang một ống nghiệm sạch,
Býớc 11- Thổi khô dung môi bằng khắ nitõ,
Býớc 12- Hòa tan cặn bằng 50μl dung dịch nội chuẩn, chuyển dung dịch sang lọ sắc ký (insert vial) để phân tắch theo CTSK GC-FFID.
Mỗi thắ nghiệm ở trên được lặp lại 3 lần, phân tắch trên GC-FID, tắnh tỷ
lệ diện tắch pic 6-MAM và diện tắch pic chất nội chuẩn tương ứng và lấy kết quả trung bình.
Kết qủa khảo sát dung môi chiết
Kết quả khảo sát dung môi chiết cho ở hình 3.2; 3.3; 3.4 và bảng 3.1. Trường hợp khảo sát không loại tạp là không thực hiện bước 2, 3, 4.
Hình 3.2: Phổđồ GC của mẫu chiết bằng chloroform trong trường hợp không loại tạp
Hình 3.3 : Phổ đồ GC của mẫu chiết bằng chloroform trong trường
Bảng 3.1: Kết quả khảo sát dung môi chiết trong trường hợp đã loại tạp Tỷ lệ diện tắch pic S6-MAM/ SIS
Dung môi Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình
Chloroform 0,659 0,673 0,675 0,669
DCM 0,690 0,714 0,699 0,701
EtAc 0,606 0,599 0,607 0,604
Ete 0,419 0,239 0,489 0,382
Toluen 0,319 0,329 0,303 0,317
Khảo sát hiệu suất chiết 6MAM của dung môi
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
Clof DCM EtAc Ete Toluen
Dung môi T ỷ l ệ di ệ n t ắc h pi c 6M A M so v ớ i IS
Hình 3.4: Biểu đồ biểu thị hiệu suất chiết 6-MAM của các dung môi
Từđồ thị ta nhận thấy DCM cho hiệu suất chiết tốt nhất, tuy nhiên Clof là dung môi chiết phổ biến nhất trong các phòng thắ nghiệm. Clof có nhược
điểm dễ bị nhũ hóa, do vậy khi sử dụng Clof người ta thường bổ sung thêm propanol với tỉ lệ (9/1).Dung môi được sử dụng để chiết suất trong quá trình thực hiện đề tài là Clof/Propanol tỉ lệ 9/1. Cần phải thực hiện các bước loại tạp chất trong môi trường acid trước khi kiềm hóa và chiết xuất 6-MAM từ