3.4.2.1. Ứng dụng Kit CATT chế tạo từ kháng nguyên tái tổ hợp
Đây là phương pháp ngưng kết trực tiếp giữa kháng nguyên và kháng thể trên bản nhựa, được dùng để phát hiện kháng thể lưu động trong máu động vật nhiễm bệnh.
Nguyên lý: kháng nguyên tiên mao trùng đã được nhuộm màu kết hợp
với kháng thể tạo thành những đám kết tủa li ti màu xanh.
Phương pháp ứng dụng Kit CATT
* Thành phần của kit CATT:
Tube màu vàng: chứa 1,5 ml kháng nguyên RoTAT 1.2 phủ hạt latex Tube màu xanh: chứa 1 ml huyết thanh âm tính chuẩn
Tube màu đỏ: chứa 1 ml huyết thanh dương tính chẩn đặc hiệu với
Ống falcon 20 ml dung dịch pha loãng huyết thanh: 1 ống Card phản ứng: 3 card
Que khuấy: 5 cái Hướng dẫn sử dụng
* Các bước làm phản ứng CATT:
- Bước 1. Dùng micropipet lấy 10 µl kháng nguyên gắn hạt latex đặt lên khay phản ứng.
- Bước 2. Dùng micropipet lấy 10 µl kháng thể (pha loãng theo hệ số 2) nhỏ lên giọt kháng nguyên.
- Bước 3. Khuấy đều hỗn hợp kháng nguyên, kháng thể. Giữ yên trong 3 - 5 phút.
- Bước 4. Đọc phản ứng:
+ Có hiện tượng ngưng kết: phản ứng dương tính (+) → trâu đã bị nhiễm tiên mao trùng.
+ Không có hiện tượng ngưng kết: phản ứng âm tính (-) → trâu không bị nhiễm tiên mao trùng.
+ Có hiện tượng ngưng kết nhưng không rõ rệt: Nghi ngờ (±).
3.4.2.2. Phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm
Dùng máu tươi tiêm trực tiếp cho chuột bạch (không sử dụng chất chống đông). Mỗi chuột tiêm 0,2 ml máu, tiêm vào phúc mạc. Theo dõi biểu hiện của chuột thí nghiệm sau tiêm truyền. Mỗi ngày kiểm tra máu chuột thí nghiệm 1 lần để phát hiện tiên mao trùng bằng phương pháp xem tươi.
3.4.2.3. Phương pháp xem tươi (Direct smear)
Cho 1 giọt máu tươi lên phiến kính; đậy lamen lên để dàn máu thành một lớp mỏng; soi dưới kính hiển vi (10 x 20 hoặc 10 x 40) để phát hiện tiên mao trùng qua sự di chuyển của chúng (dẫn theo Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008) [10].
Kết quả: dương tính thấy tiên mao trùng di động, bơi trong huyết tương. Âm tính chỉ nhìn thấy hồng cầu.
3.4.2.4. Phương pháp nhuộm giemsa tiêu bản máu khô (Romanovsky)
Đặt một giọt máu tươi cách 1 đầu phiến kính khoảng 2 cm, đặt cạnh lamen lên giọt máu, nghiêng 450 so với phiến kính. Khi máu lan hết cạnh lamen, đẩy nhẹ lamen trên phiến kính để dàn máu thành một lớp mỏng.
Để khô, cố định bằng cồn methanol trong 2 phút. Nhuộm giemsa trong 25 phút (dung dịch giemsa mẹ pha trong nước cất theo tỷ lệ 1: 9). Để nghiêng tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ cho trôi hết giemsa thừa, để khô tiêu bản, soi dưới kính hiển vi (độ phóng đại 10 x 100) tìm tiên mao trùng.