Chuẩn bị
- Bản mỏng: Silica gel 60 F254 , 6x10 cm, hoạt hóa ở 1100 C trong 60 phút. - Dung môi khai triển: Khảo sát trên các hệ:
(I) Chloroform - methanol (10:1)
(II) Chloroform - methanol - acid formic (19:1) (III) Toluen – ethylacetat ( 9:1)
(IV) Toluen – ethylacetat – acid formic (5:5:1)
- Thuốc thử hiện màu: Thuốc thử vanilin sulfuric (100 ml Vanillin 1% /EtOH 96% + 2 ml dung dịch H2SO4 đặc).
Chiết xuất:
- Dung dịch thử: Lấy 5 g cao lỏng, thêm 10ml methanol, đun hồi lưu cách thủy 20 phút, lọc lấy dịch chiết, thủy phân dịch chiết bằng HCl 5% khoảng 1 giờ, chiết bằng 5ml chloroform x 2 lần. Cô dịch chiết chloroform đến cắn, hòa tan cắn trong 1ml EtOH 96% thu được dung dịch chấm sắc ký.
- Dung dịch đối chiếu: Lấy 4 g dược liệu mỗi loại, cắt nhỏ, làm tương tự như với dung dịch thử, bắt đầu từ “thêm 10ml methanol… sắc ký”.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 6l dung dịch thử và 5µl dung dịch đối chiếu. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, quan sát dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 254, 366 nm; phun thuốc thử hiện màu, sấy ở 1200 C cho đến khi hiện rõ vết. Chụp ảnh bằng thiết bị chụp ảnh Camag, xử lý kết quả bằng phần mềm Wincats, Videoscan.
Kết quả: Trong các hệ dung môi trên, hệ (IV) cho kết quả tách vết và hiện màu
47
Hình 3.6. Sắc ký đồ CC- Cao- TM- MM sau khi hiện màu
Bảng 3.9. Kết quả phân tích sắc ký đồ của CC-Cao-TM-MM sau khi hiện màu
STT Rf Màu sắc Cát cánh Cao Thiên
môn Mạch môn 1 0,08 Đen + 2 0,15 Đên + 3 0,22 Tím ++ 4 0,25 Tím ++ + +++ ++ 5 0,30 Xanh dương ++ 6 0,32 Tím nhạt + 7 0,40 Xanh lá +++ ++ +++ 8 0,51 Tím ++ ++ ++ ++ 9 0,56 Tím nhạt + 10 0,60 Vàng ++ 11 0,73 Tím ++ ++ +++ 12 0,76 Hồng đậm +++ 13 0,79 Tím + +++ 14 0,85 Tím ++ ++ ++ ++ 15 0,95 Tím ++ ++ ++ +++ Chú thích: (+): Có vết; (++): Vết đậm; (+++): Vết rất đậm
48
Nhận xét: Kết quả phân tích sắc ký đồ cho thấy:
- Giữa cao và cát cánh có 6 vết tương đương. - Giữa cao và thiên môn có 6 vết tương đương. - Giữa cao và mạch môn có 4 vết tương đương.