3.2.2.1. Kim ngân hoa
Chuẩn bị
- Bản mỏng: Silica gel 60 F254, 4x10 cm, hoạt hóa ở 1100 C trong 60 phút. - Dung môi khai triển: Khảo sát trên các hệ:
(I ) Chloroform – methanol (9:1)
(II) Toluen – ethylacetat – acid formic (5:4:1) (III) Ethylacetat – acid formic – nước (8:1:1) (IV) Chloroform – methanol – acid formic (7:2:1)
(V) Toluen – chloroform – aceton - acid formic (8:5:7:0,2) - Thuốc thử hiện màu: dung dịch KOH 5%/EtOH 96%.
Chiết xuất
- Dung dịch thử: Lấy 5g cao lỏng, thêm 30ml methanol, đun trên cách thủy 15 phút, lọc. Chiết như vậy thêm một lần nữa. Gộp dịch chiết methanol, cô trên cách thủy đến cạn. Khuấy kỹ cắn với n – butanol 2 lần, mỗi lần 10 ml. Gộp dịch chiết butanol, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa tan cắn trong 1ml methanol được dung dịch chấm sắc ký.
39
- Dung dịch đối chiếu: Lấy 2 g kim ngân hoa đã tán nhỏ vào bình nón, đậy nắp, thêm 20ml methanol, đun cách thủy trong 20 phút, lọc, cô dịch lọc đến cắn. Làm tương tự dung dịch thử bắt đầu từ “ khuấy kỹ cắn….sắc ký”.
Tiến hành
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 4 l dung dịch thử và 6 µl dung dịch đối chiếu. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, quan sát vết ở ánh sáng thường và dưới đèn UV bước sóng 254 nm, 366 nm, phun thuốc thử hiện màu, sấy ở 1200 C cho đến khi hiện rõ vết. Chụp ảnh bằng thiết bị chụp ảnh Camag, xử lý kết quả bằng phần mềm Wincats, Videoscan.
Kết quả: Trong các hệ dung môi trên, hệ (V) cho kết quả tách vết và hiện màu
tốt nhất ở bước sóng 366 nm (Bảng 3.4, Hình 3.1).
Bảng 3.4. Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và kim ngân hoa ở bước sóng 366 nm.
STT Rf Màu sắc Cao KNH 1 0,08 Xanh ++ +++ 2 0,25 Xanh ++ +++ 3 0,28 Xanh +++ +++ 4 0,32 Xanh +++ +++ 5 0,38 Xanh nhạt + 6 0,40 Tím nhạt ++ 7 0,45 Xanh nhạt + 8 0,45 Tím nhạt ++ 9 0,52 Xanh +++ 10 0,52 Tím nhạt ++ 11 0,59 Xanh ++ +++ 12 0,66 Xanh ++ Hình 3.1. Sắc ký đồ cao - KNH ở bước sóng 366 nm Chú thích: (+): Có vết; (++): Vết đậm; (+++): Vết rất đậm
40
Nhận xét: Sắc ký đồ ở bước sóng 366nm cho thấy: Có 5 vết tương đương giữa cao
và kim ngân hoa.