Môi trường nuôi cấy vi khuẩn
- Vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae ựược nuôi cấy trên môi trường Wakimoto (Wakimoto, 1995).
Thành phần môi trường gồm: Khoai tây 300g; ựường saccarose 15g; peptone 5g; agar 17g; Na2HPO4.12H2O 2g; Ca2(NO3)2.4H2O 0.5g; nước cất 100ml; pH 7.0.
- Môi trường Wakimoto ựược hấp khử trùng ở nhiệt ựộ 121oC trong ống nghiệm thời gian 20 phút, tạo mặt thạch nghiêng.
Trước khi lây nhiễm nguồn vi khuẩn ựược cấy bảo quản trong môi trường Skim milk ở -30oC, ựược cấy truyền sang môi trường Wakimoto ở 28oC sau 48 Ờ 72 giờ tuổi, sau ựó pha loãng dung dịch vi khuẩn bằng nước cất vô trùng ựạt ựược nồng ựộ 108 CFU/ml ựể lây bệnh.
Phương pháp lây nhiễm
Lây bệnh theo phương pháp sát thương cơ giới cắt ựầu lá (N. Furuya, 2003): Dùng kéo ựã khử trùng nhúng vào dung dịch chứa vi khuẩn gây bệnh bạc lá (mỗi chủng vi khuẩn dùng một kéo vô trùng) cắt lên ựầu lá lúa một ựoạn dài khoảng 2 Ờ 5cm và lây nhiễm vào giai ựoạn lúa làm ựòng - trỗ, mỗi chủng một cây, trên một cây cắt toàn bộ lá xanh trên ựó.
Trước khi lây nhiễm, tiến hành làm thắ nghiệm ựể xác ựịnh khả năng duy trì ựộ ựộc tắnh của các chủng vi khuẩn trong quá trình bảo quản bằng cách lây thử lên dòng mẫm cảm IR24. Sau 5 ngày thấy ựầu lá héo xanh và tái ựi chứng tỏ các chủng vi khuẩn này có ựộ ựộc tắnh và có thể dùng ựể lây nhiễm ựược.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 40
đánh giá khả năng kháng bệnh bạc lá
Sau khi lây nhiễm ựược 18 ngày tiến hành ựo chiều dài vết bệnh theo phương pháp do N.Furuya và cộng sự, 2003 ựề xuất.
Dựa vào chiều dài của vết bệnh ựể ựánh giá tắnh kháng của giống như sau: + Chiều dài vết bệnh <8cm: Kháng bệng bạc lá (R)
+ Chiều dài vết bệnh từ 8 - 12cm: Nhiễm vừa (M) + Chiều dài vết bệnh >12cm: Nhiễm nặng (S)