Ứng dụng phương phỏp trờn để định lượng 10 mẫu dược liệu đó trỡnh bày trong mục 2.1.1
Quy trỡnh:
- Tiến hành chiết xuất dược liệu bằng phương phỏp chiết siờu õm, sử dụng EtOH 70% như đó trỡnh bày trong mục 3.4.
- Tiến hành xử lớ mẫu bằng phương phỏp chiết lỏng- rắn sử dụng nhựa hấp phụ như đó trỡnh bày trong mục 3.1.
- Tiến hành phản ứng màu và đo quang theo cỏc điều kiện nờu trong mục 3.2. - Định lượng theo phương phỏp xõy dựng đường chuẩn.
Tiến hành
Quy trỡnh chiết xuất, tinh chế và định lượng saponin toàn phần trong dược liệu GCL được chỳng tụi thực hiện như sau:
Bước 1:Chuẩn bị bột dược liệu
Dược liệu được sấy khụ ở 600
C và làm nhỏ dạng bột thụ.
Bước 2: Xỏc định hàm ẩm của bột dược liệu
Hàm ẩm được xỏc định vào thời điểm cõn dược liệu trước khi chiết bằng mỏy đo độ ẩm. Lấy khoảng 1g bột mẫu đem đo, làm 3 lần, lấy kết quả trung bỡnh.
Bước 3: Chiết xuất
- Cõn chớnh xỏc khoảng 20g bột dược liệu mỗi mẫu bằng cõn phõn tớch, cho vào cốc cỏ mỏ sạch dung tớch 250ml, thấm ẩm bột dược liệu bằng lượng dung mụi EtOH 70% vừa đủ rồi thờm dung mụi đến ngập hết dược liệu.
- Tiến hành chiết 3 lần bằng mỏy siờu õm, mỗi lần 10 phỳt với cụng suất 40%. Gộp dịch chiết, lọc qua giấy lọc rồi cất thu hồi dung mụi dưới ỏp suất giảm đến cắn. Cắn thu được đem sấy ở 600
C.
Bước 4: Tinh chế
- Hũa tan cắn thu được ở bước 3 bằng lượng nước cất vừa đủ, ngõm 80g nhựa hấp phụ trong vũng 60 phỳt, vừa ngõm vừa lắc nhẹ.
- Rút nhựa lờn cột, rửa lần lượt bằng 300ml nước cất, 300ml EtOH 20% và EtOH 80% đến kiệt saponin (khoảng 800ml). Thu dịch EtOH 80%.
Bước 5: Đo quang
- Chuẩn bị mẫu thử: Hỳt chớnh xỏc 1ml dịch thu được (bước 4) vào 5 bỡnh định mức 5ml. Thờm vào cỏc bỡnh thể tớch dung dịch chuẩn nồng độ 0,1mg/ml lần lượt là 0ml; 0,2ml; 0,4ml; 0,6ml; 0,8ml và đun cỏch thủy đến cắn. Thờm 0,3 ml vanillin/acid acetic băng; 0,8ml acid perchloric, lắc đều và đặt lờn bể điều nhiệt ở 800C trong 20 phỳt. Làm lạnh nhanh bằng nước đỏ và thờm dung dịch acid acetic băng đến vạch.
- Làm song song một mẫu trắng và tiến hành đo quang ở bước súng 550nm, cu vet thạch anh l=1cm.
Bước 6: Xử lớ kết quả
Dựa vào đường chuẩn xõy dựng được tớnh hàm lượng saponin toàn phần trong mẫu dược liệu. Làm 3 lần và lấy kết quả trung bỡnh.