• Xỏc định khoảng tuyến tớnh
Chuẩn bị 8 bỡnh định mức dung tớch 5ml được đỏnh số từ 1 đến 8. Hỳt chớnh xỏc vào 7 bỡnh định mức (từ 1 đến 7) cỏc thể tớch dung dịch chuẩn lần lượt là 0,2ml, 0,6ml, 1,0ml, 1,4ml, 1,8ml, 2,2ml, 2,6ml, làm khụ đến cắn bằng đun cỏch thủy. Lần lượt cho vào cả 8 bỡnh 0,3ml thuốc thử vanillin, 0,8ml thuốc thử acid perchloric rồi đặt vào bể điều nhiệt ở 80 C trong 20 phỳt. Sau đú làm lạnh nhanh trong cốc nước
đỏ, thờm acid acetic băng đến vạch, lắc đều, đo độ hấp thụ tại 550nm. Mẫu trắng là bỡnh thứ 8.
Kết quả được trỡnh bày trong bảng 3.7.
Bảng 3.7. Kết quả xõy dựng đường chuẩn
mchuẩn (mg) 0,02 0,06 0,1 0,14 0,18 0,22 0,26
Cchuẩn (àg/ml) 4 12 20 28 36 44 52
D 0,096 0,31 0,508 0,708 0,912 1,118 1,375 Phương trỡnh hồi quy tuyến tớnh D = 0,026 x C - 0,014
Hệ số tương quan R= 0,999
Hỡnh 3.7. Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ chất chuẩn tại bước súng 550nm
Nhận xột: Như vậy trong khoảng khảo sỏt nồng độ từ 4 – 52àg/ml, tại bước súng 550nm cho thấy cú sự phụ thuộc tuyến tớnh giữa độ hấp thụ và nồng độ chất khảo sỏt với hệ số tương quan rất gần 1 (R>0.99), chứng tỏ cú sự tương quan tuyến tớnh chặt chẽ giữa độ hấp thụ và nồng độ chất khảo sỏt.
• Khảo sỏt độ lặp lại của phương phỏp
Bỡnh 1: Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch thử được chuẩn bị ở mục 2.3.3, làm khụ đến cắn bằng đun cỏch thủy
Bỡnh 2-6: Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch thử và lần lượt 0,2ml, 0,4ml, 0,6ml, 0,8ml, 1,0ml dung dịch chuẩn (tương ứng với nồng độ chuẩn lần lượt là 4-8-12-16- 20 àg/ml) làm khụ đến cắn bằng đun cỏch thủy.
Lần lượt cho vào cả 7 bỡnh 0,3ml thuốc thử vanillin, 0,8ml thuốc thử acid perchloric rồi đặt vào bể điều nhiệt ở 80 C trong 20 phỳt. Sau đú làm lạnh nhanh trong cốc nước đỏ, thờm acid acetic băng đến vạch, lắc đều, đo độ hấp thụ tại 550nm. Mẫu trắng là bỡnh thứ 7. Hàm lượng saponin được tớnh dựa vào đường chuẩn thu được.
Tiến hành lặp lại 6 lần quy trỡnh trờn. Kết quả được trỡnh bày trong bảng 3.8 và hỡnh 3.8.
Bảng 3.8. Kết quả khảo sỏt độ lặp lại của phương phỏp
Lần Mật độ quang (D) Csaponin (àg/ml) Hàm lượng saponin/ mẫu thử (àg/ml) B1 B2 B3 B4 B5 B6 1 0,496 0,605 0,683 0,81 0,914 0,998 19,8400 99,2000 2 0,511 0,608 0,736 0,819 0,961 1,091 18,0370 90,1850 3 0,502 0,584 0,713 0,828 0,943 1,007 19,2222 96,1110 4 0,509 0,589 0,705 0,834 0,924 0,989 20,2000 101,0000 5 0,512 0,601 0,699 0,836 0,912 1,072 18,3704 91,8520 6 0,504 0,597 0,694 0,818 0,929 1,022 19,0385 95,1925 Số liệu thống kờ 95,6901 S =1,074 RSD (%)=5,62
Hỡnh 3.8. Đồ thị xỏc định hàm lượng saponin toàn phần cú trong mẫu GCL theo kỹ thuật thờm đường chuẩn.
Nhận xột: Kết quả khảo sỏt độ lặp lại của phương phỏp cho thấy độ lệch chuẩn tương đối của cỏc phộp thử RSD (%) trong khoảng cho phộp. Như vậy phương phỏp cú độ lặp lại cao.
•Khảo sỏt độ đỳng của phương phỏp.
- Lấy chớnh xỏc 2 ml dung dịch chuẩn Rb1 cho vào bỡnh định mức 10ml, sau đú thờm dung dịch thử vừa đủ tới vạch, lắc đều thu được dung dịch tổng. Sử dụng dung dịch thử cú nồng độ trung bỡnh là 95,6901 àg/ml.
- Chuẩn bị 7 bỡnh định mức dung tớch 5 ml, đỏnh số từ 1 đến 7.
Bỡnh 1: cho 1ml dung dịch tổng. Bỡnh 2-6: cho 1ml dung dịch tổng và lần lượt 0,2ml; 0,4ml; 0,6ml; 0,8ml dung dịch chuẩn. Cụ cỏch thủy đến cắn. Thờm vào cả 7 bỡnh 0,3ml thuốc thử vanillin, 0,8ml thuốc thử acid perchloric rồi đặt vào bể điều nhiệt ở 80 C trong 20 phỳt. Sau đú làm lạnh nhanh trong cốc nước đỏ, thờm acid acetic băng đến vạch, lắc đều, đo độ hấp thụ tại 550nm. Bỡnh 7 là mẫu trắng.
- Tiến hành lặp lại 6 lần quy trỡnh trờn. Kết quả được tổng hợp trong bảng 3.9.
Bảng 3.9. Kết quả khảo sỏt độ đỳng của phương phỏp
Lần
Cthử trung
bỡnh
(àg/ml)
Cchuẩn
(àg/ml) Cdung dịch tổng Cchuẩn thu hồi (àg/ml) Tỷ lệ thu hồi (%) 1 15,3104 4,00 19,2800 3,9696 99,24 2 19,2573 3,9469 98.67 3 19,0768 3,7664 94.16 4 19,1512 3,8408 96.02 5 19,4036 4,0932 102.33 6 19,2172 3,9068 97.67 Trung bỡnh 96,0150 RSD (%) 3,71
Nhận xột: Kết quả khảo sỏt cho thấy phương phỏp phõn tớch đó lựa chọn cho tỷ lệ thu hồi cao, cú độ đỳng tốt.