AChE là enzym xúc tác cho phản ứng phân hủy acetylcholin thành cholin và acid acetic. Acetylcholin càng tồn tại lâu trong não thì các tế bào não gợi nhắc trí nhớ càng lâu. Vì thế chất ức chế AChE có thể giúp cải thiện khả năng nhớ của bệnh nhân Alzheimer. Để nghiên cứu tác dụng ức chế enzym này, chúng tôi tiến hành thử nghiệm in vitro nhằm xác khả năng ức chế enzym AChE và giá trị IC50 của l-THP đối chiếu với chứng dương tacrin. Mỗi mẫu được thực hiện 3 lần để lấy giá trị trung bình. Kết quả được trình bày trong bảng 3.6, hình 3.7 và bảng 3.7.
Bảng 3.2. Tác dụng ức chế in vitro enzym AChE của l-THP và tacrin
STT l-THP Tacrin Nồng độ (µM) Log[nồng độ] % ức chế Nồng độ (µM) Log[nồng độ] % ức chế 1 45,23 1,655 37,20 0,27 -0,569 37,98 2 90,46 1,956 44,98 0,54 -0,270 49,91 3 175,86 2,245 63,49 1,07 0,029 67,52 4 351,72 2,546 62,46 2,13 0,328 80,00 5 703,43 2,847 71,80 4,26 0,629 89,54 % ứ c c h ế
Hình 3.6. Tác dụng ức chế enzym AChE phụ thuộc vào nồng độ
của l-THP và chất đối chiếu tacrin
Dựa vào số liệu trên, phần mềm GraphPad Prism tự động tính giá trị IC50 và các thông số khác của các mẫu nghiên cứu như sau (bảng 3.7):
Bảng 3.3. Giá trị IC50 và các thông số khác của các mẫu nghiên cứu
STT Mẫu
nghiên cứu Thông số Giá trị
1 l-THP
IC50 (µM) 61,70
Emax (X ±SE, khoảng tin
cậy 95%) 76,41± 4,01 (67,67- 85,15) R2 (tính phù hợp của mô
hình với dữ liệu) 0,9100
2 Tacrin
IC50 (µM) 0,74
Emax (X ±SE, khoảng tin
cậy 95%) 102,90 ± 1,72 (99,13 – 106,60) R2 (tính phù hợp của mô
Nhận xét:
Với thử nghiệm này, mỗi thuốc chúng tôi tiến hành với 5 nồng độ khác nhau (nồng độ của l-THP cao hơn nồng độ của tacrin khoảng 200 lần). Kết quả trong bảng 3.6 cho thấy ở tất cả các nồng độ, 2 thuốc này đều thể hiện tác dụng ức chế AChE và khả năng ức chế enzym này của l-THP và tacrin tăng khi nồng độ của chúng tăng. Với l-THP, nồng độ thấp nhất và cao nhất trong thử nghiệm có khả năng ức chế AChE lần lượt là 45,2 µM và 703,433 µM, tương ứng % enzym AChE bị ức chế là 37,20% và 71,80%. Với tacrin, nồng độ thấp nhất và cao nhất trong thử nghiệm có khả năng ức chế AChE lần lượt là 0,267 µM và 4,264 µM, tương ứng % enzym AChE bị ức chế là 37,98% và 89,54%.
Bảng 3.7 cho thấy giá trị IC50 của l-THP là 61,70 µM, giá trị IC50 của tacrin là 0,74 µM (nhỏ hơn của l-THP khoảng 83 lần).
Các kết quả trên cho thấy cả cả l-THP và tacrin đều có tác dụng ức chế enzym AChE in vitro, khả năng ức chế enzym này của chúng phụ thuộc vào nồng độ (tỷ lệ thuận với nồng độ), nhưng tacrin thể hiện khả năng ức chế AChE mạnh hơn l-THP.