Trong nghiên cứu này, chúng tôi thực hiện kỹ thuật gây sa sút trí nhớ bằng cách gây thiếu máu não cục bộ tạm thời theo mô hình thắt 2 động mạch cảnh kết hợp với rút máu đuôi chuột [46], [52]:
Chuột nhắt trắng sau khi đã nuôi ổn định trong phòng thí nghiệm 7 ngày được tiến hành phẫu thuật:
- Gây mê chuột bằng pentobarbital (liều 50 mg/kg) tiêm màng bụng. - Sau khi chuột bị gây mê, bộc lộ 2 động mạch cảnh.
+ Đối với những lô thử thuốc: kẹp động mạch cảnh bằng kẹp động mạch trong 30 phút, đồng thời gây hạ huyết áp bằng cách rút 0,2 ml máu đuôi chuột trong thời gian kẹp động mạch.
+ Đối với lô chứng sinh lý: Chuột được mổ bộc lộ 2 động mạch nhưng không kẹp động mạch và không rút máu đuôi.
- Sau khi phẫu thuật, chuột được ủ ấm ở 370 C cho đến khi tỉnh dậy.
Hình 2.4. Sơ đồ phẫu thuật chuột trong thí nghiệm gây thiếu máu não cục bộ tạm thời
2.2.2.2. Test mê lộ nước Morris
Nguyên tắc:
MWM là mô hình đánh giá khả năng học tập không gian cho động vật gặm nhấm, định hướng từ vị trí bắt đầu, xung quanh chu vi của một khu vực bơi để xác định vị trí một bến đỗ nhằm tránh khỏi ngập nước dựa trên các dấu hiệu gợi ý ngoại vi [22], [26], [42].
Thiết kế thí nghiệm:
Chuột được chia làm 5 lô thí nghiệm như sau (bảng 2.2):
Bảng 2.2. Phân lô nghiên cứu đánh giá khả năng học tập và ghi nhớ in vivo
Lô n Mẫu thử/liều dùng Phác đồ dùng thuốc
Chứng sinh lý 10
Uống dung dịch Tween 80 1%
- 1 lần/ngày x 3 ngày trước khi phẫu thuật
- 1 giờ trước khi phẫu thuật - 1 giờ trước khi tiến hành thí nghiệm hàng ngày
Chứng bệnh lý 9
l-THP liều thấp 10 Uống hỗn dịch l-THP liều 0,1 mg/kg
l-THP liều cao 11 Uống hỗn dịch l-THP liều 0,3 mg/kg
Tacrin 10 Tiêm màng bụng
tacrin liều 2,5mg/kg
- 30 phút trước khi phẫu thuật - 30 phút trước khi tiến hành thí nghiệm hàng ngày
2 ngày sau khi tiến hành phẫu thuật gây thiếu máu cục bộ tạm thời, chuột bắt đầu được tiến hành đánh giá hành vi bằng test MWM. Tổng thời gian chuột phải học là 7 ngày. Các bài tập cụ thể và thời gian như sau [56]:
- Bài tập nhìn thấy bến đỗ:
2 ngày sau phẫu thuật, chuột được học bài đầu tiên là bài tập nhìn thấy bến đỗ (visible trial). Bến đỗ được đặt cao hơn mặt nước 1 cm. Mỗi chuột được bơi để tìm thấy bến đỗ 1 lần. Nếu trong 60 giây, chuột tìm thấy bến đỗ, chuột sẽ được ở lại trong 10 giây. Nếu trong 60 giây chuột không tìm thấy bến đỗ, chuột sẽ được hướng dẫn tìm đến bến đỗ và ở lại trong 15 giây. Sau đó chuột được lau khô, sưởi ấm và đưa về chuồng.
- Bài tập không nhìn thấy bến đỗ:
Từ ngày thứ 3 tới ngày thứ 7 sau khi phẫu thuật kẹp động mạch cảnh và rút máu đuôi, chuột được tập nhớ không gian với bài tập không nhìn thấy bến đỗ (training trial), khi bến đỗ được đặt dưới mặt nước 1 cm. Mỗi ngày chuột được tập 3 lần, mỗi lần ở một trong ba góc phần tư còn lại trong mê lộ nước. Nếu 60 giây chuột không tìm thấy bến đỗ, chuột sẽ được hướng dẫn cách tìm bến đỗ và ở lại bến đỗ 20 giây. Khoảng cách giữa các lần tập là 1 phút, trong thời gian này chuột được lau khô và sưởi ấm. Toàn bộ quá trình sẽ được ghi lại bằng camera, thời gian tiềm tàng chuột tìm thấy bến đỗ sẽ được phần mềm tính toán. Số liệu mỗi ngày được tính toán bằng giá trị trung bình thời gian 3 lần tập đối với mỗi chuột.
- Bài tập không có bến đỗ:
Ngày thứ 8 sau khi phẫu thuật kẹp động mạch cảnh và rút máu đuôi, chuột sẽ được tập thử lại trí nhớ (probe trial). Trong bài tập này, bến đỗ được bỏ ra ngoài, chuột được bơi trong mê lộ một lần duy nhất trong 60 giây. Chuột sẽ nhớ lại vị trí của bến đỗ và có xu hướng bơi lâu hơn tại góc phần tư của mê lộ đặt bến đỗ ở những bài tập trước. Camera sẽ ghi lại và phân tích thời gian chuột bơi ở mỗi góc phần tư của mê lộ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});