3.2.1. Định tính các nhóm chất hữu cơ trong dược liệu hạt vải bằng phản ứng hóa học.
* Định tính alcaloid
Cho 10 g bột dƣợc liệu vào bình nón dung tích 250ml, thấm ẩm dƣợc liệu bằng dung dịch amoniac đặc, đậy bình kín trong 30 phút. Cho thêm 20 ml chloroform, lắc đều ngâm trong 24 giờ. Lọc lấy dịch chiết cho bình gạn. Lắc dịch chiết chloroform với dung dịch acid sulfuric 1N x 2 lần, mỗi lần 10 ml. Để phân lớp, gạn lấy dịch chiết acid cho vào 3 ống nghiệm để làm phản ứng.
- Ống 1: Cho 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện tủa nâu đến đỏ nâu.
- Ống 2: Cho 2-3 giọt Dragendorff. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện tủa từ vàng cam đến đỏ.
- Ống 3: cho 2-3 giọt thuốc thử Mayer. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện tủa trắng đến vàng,
Kết quả: Cả 3 ống không có tủa.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải không có alcaloid.
* Định tính glycosid tim
Cho 10g bột dƣợc liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm 100ml ethanol 25%, lắc đều, ngâm 24h. Lọc lấy dịch chiết, loại tạp bằng chì acetat 30% đến dƣ. Để lắng, lọc. Loại tạp chì acetat bằng dung dịch Na2SO4 bão hòa đến khi không còn tủa với Na2SO4 nữa. Lọc lấy dịch lọc vào bình gạn, lắc kỹ 2
30
lần với chloroform, mỗi lần 8 ml, để lắng, gạn lấy dịch chiết chloroform. Cho dịch chiết vào 4 ống nghiệm nhỏ, đem cô cách thủy đến khô để làm phản ứng.
- Phản ứng Liebermann- Burchard.
Hòa tan cắn với 0,5ml alhydrid acetic, đặt nghiêng ống nghiệm 1 góc 45o. Thêm từ từ 1ml acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm để dịch lỏng trong ống nghiệm chia thành 2 lớp. Phản ứng dƣơng tính khi mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng tím đỏ, lắc lên tạo thành dung dịch màu xanh lá.
Kết quả: Không xuất hiện vòng tím đỏ giữa 2 lớp chất lỏng. - Phản ứng Keller- Kiliani.
Hòa tan cắn trong 0,5ml ethanol 90%. Thêm vài giọt sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic. Lắc đều, nghiêng ống nghiệm 45o. Cho từ từ theo thành ống 1ml acid sulfuric đặc, tránh làm xáo trộn chất lỏng trong ống nghiệm. Phản ứng dƣơng tính khi mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng tím đỏ, lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía trên có màu xanh lá.
Kết quả: Không xuất hiện vòng tím đỏ giữa 2 lớp chất lỏng. - Phản ứng Baljet.
Hòa tan cắn trong 0,5ml ethanol 90%. Thêm thuốc thử mới pha (1 phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH 10%). Lắc đều, so sánh màu sắc với ống chứng là ống không có cắn glycosid tim. Phản ứng dƣơng tính khi ống thử xuất hiện màu đỏ cam và đậm hơn màu ống chứng.
Kết quả: Ống thử có màu giống ống chứng. - Phản ứng Legal.
Hòa tan cắn trong 0,5ml ethanol 90%. Thêm 1 giọt dung dịch natri nitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%. Lắc đều, so sánh màu sắc với ống chứng là ống không có cắn glycosid tim. Phản ứng dƣơng tính khi ống thử xuất hiện màu đỏ cam và đậm màu hơn ống chứng.
31
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải không có glycosid tim
* Định tính flavonoid
Lấy 5 g bột dƣợc liệu cho vào bình nón dung tích 100ml có nút mài, thêm 20ml ethanol 90%. Đun cách thủy 10 phút. Lọc nóng qua giấy lọc gấp nếp. Dùng dịch lọc để làm các phản ứng:
- Phản ứng Cyanidin.
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm ít bột magnesi. Nhỏ từ từ vài giọt HCl đậm đặc (2-3 giọt) vào ống nghiệm. Sau đó để yên vài phút. Phản ứng dƣơng tính khi dung dịch chuyển từ vàng sang đỏ.
Kết quả: Dung dịch chuyển từ vàng sang đỏ. - Phản ứng với kiềm.
Phản ứng với NaOH: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%, quan sát hiện tƣợng. Sau đó thêm 1ml nƣớc cất. Phản ứng dƣơng tính nếu có tủa vàng khi kiềm hóa, thêm nƣớc thì tủa tan.
Kết quả: Xuất hiện tủa vàng, thêm nƣớc tủa tan.
Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc. Để khô, quan sát dƣới ánh sáng thƣờng, sau đó hơ lên miệng amoniac đậm đặc. Nhỏ 1 giọt khác làm chứng không hơ qua amoniac. So sánh màu sắc với vết chứng. Phản ứng dƣơng tính nếu màu vết thử đậm hơn màu vết chứng.
Kết quả: Màu vết thử đậm hơn màu vết chứng. - Phản ứng với thuốc thử diazo. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa bằng dung dịch kiềm (dung dịch NaOH, KOH, Na2CO3), thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha, lắc đều, đun nóng. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: Xuất hiện tủa đỏ.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có flavonoid.
32
Lấy 5g bột dƣợc liệu cho vào bình nón dung tích 100ml có nút mài. Thêm 20 ml ethanol 90%. Đun cách thủy 10 phút, lọc nóng. Dùng dịch lọc để làm phản ứng:
- Phản ứng đóng mở vòng lacton.
Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1ml dịch chiết. + Ống 1 thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10%. + Ống 2 để nguyên.
Đun cách thủy cả 2 ống đến sôi. Để nguội, quan sát.
Thêm 2ml nƣớc cất vào cả 2 ống nghiệm. Lắc đều, quan sát. Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, quan sát.
Phản ứng dƣơng tính nếu ống1 có tủa vàng khi kiềm hóa, thêm nƣớc thì tủa tan, acid hóa lại có tủa trở lại; ống 2 có tủa đục khi thêm nƣớc.
Kết quả: Ống 1 có tủa nhƣ ống 2. - Phản ứng diazo hóa:
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2ml dung dịch NaOH 10%, đun cáh thủy đến sôi. Để nguội, thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: xuất hiện màu đỏ.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có coumarin.
* Định tính anthranoid
- Phản ứng Borntraeger.
Cho 5g bột dƣợc liệu vào bình nón 100ml, thêm 50ml dung dịch H2SO4
10%. Đun sôi cách thủy trong 10 phút. Lọc nóng, cho dịch chiết và bình gạn. Để nguội, rồi lắc với 5ml chloroform. Lấy dịch chiết chloroform làm phản ứng.
Cho vào 2 ống nghiệm:
Ống 1: 1ml dịch chiết chloroform + 1ml dung dịch NH4OH 10% Ống 2: 1ml dịch chiết chloroform + 1ml dung dịch NaOH 10%.
33
Lắc nhẹ, quan sát. Phản ứng dƣơng tính khi ống 1 lớp nƣớc có màu vàng, ống 2 có lớp nƣớc màu đỏ.
Kết quả: Lớp nƣớc ống 1 màu vàng. Lớp nƣớc ống 2 màu đỏ. - Phản ứng vi thăng hoa.
Cho 1g bột dƣợc liệu lên nắp nhôm. Hơ nhẹ trên nguồn nhiệt đến khi bay hơi hết nƣớc trong dƣợc liệu. Đặt lên miệng nắp nhôm một lam kính có để miếng bông tẩm nƣớc lạnh. Tiếp tục đốt nắp nhôm trên nguồn nhiệt. Sau 5- 10 phút lấy lam kính ra để nguội, soi dƣới kính hiển vi. Phản ứng dƣơng tính khi trên lam kính có tinh thể hình kim
Kết quả: Xuất hiện tinh thể hình kim thể hiện trên Hình 3.5.
Hình 3.5.Tinh thể hình kim. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có anthranoid.
* Định tính saponin
- Quan sát hiện tƣợng tạo bọt.
Cho 1g bột dƣợc liệu vào ống nghiệm to, thêm 5 ml nƣớc, đun sôi nhẹ, lọc nóng. Dịch lọc cho vào ống nghiệm to, thêm 5ml nƣớc. Lắc mạnh trong 5 phút theo chiều dọc ống nghiệm, để yên, quan sát. Phản ứng dƣơng tính nếu cột bọt bền trong 15 phút.
Kết quả: Cột bọt bền trong 15 phút. - Phản ứng tạo màu Sankowski. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cho vào ống nghiệm to 1g bột dƣợc liệu, thêm vào 5ml ethanol 90%, đun sôi cách thủy, lọc nóng, lấy dịch lọc. Cho 1ml dịch lọc vào 1 ống nghiệm khác. Để ống nghiệm nghiêng 45o
34
ống nghiệm, quan sát. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện vòng nâu đỏ ở mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng.
Kết quả: Xuất hiện vòng nâu đỏ giữa 2 lớp chất lỏng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có saponin.
* Định tính tanin
Cho vào cốc có mỏ 5g bột dƣợc liệu, thêm 20ml nƣớc, đun sôi cách thủy 5 phút. Lọc nóng qua giấy lọc. Lấy dịch lọc chia vào 3 ống nghiệm để định tính:
+ Ống 1: thêm 1 giọt dung dịch sắt (III) clorid 5%. + Ống 2: thêm 1 giọt dung dịch chì acetat 10%. + Ống 3: thêm vào dung dịch gelatin 1%.
Phản ứng dƣơng tính khi ống 1 có tủa màu xanh đen, ống 2 có tủa bông trắng, ống 3 có tủa bông trắng.
Kết quả: ống 1 có tủa xanh đen. ống 2 có tủa bông trắng. ống 3 có tủa bông trắng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có tanin.
* Định tính acid hữu cơ
Cho 10g bột dƣợc liệu vào ống nghiệm lớn, thêm 100ml nƣớc. Đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng. Lấy dịch lọc, để nguội. Thêm vào dịch lọc ít tinh thể Na2CO3. Phản ứng dƣơng tính khi có khí CO2 bay lên.
Kết quả: Xuất hiện khí.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có acid hữu cơ.
* Định tính acid amin
Cho 1g bột dƣợc liệu vào ống nghiệm lớn, thêm 5ml nƣớc cất. Đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng, lấy dịch lọc. Lấy 2ml dịch lọc cho vào ống nghiệm khác, thêm 3 giọt thuốc thử Nyhydrin 3%, đun sôi cách thủy 10 phút. Phản ứng dƣơng tính khi dung dịch xuất hiện màu tím.
35
Kết quả: Xuất hiện màu tím.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có acid amin.
* Định tính đường khử
Lấy 1g bột dƣợc liệu cho vào ống nghiệm lớn, thêm 5ml nƣớc, đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng, lấy dịch lọc. Cho 2ml dịch lọc vào ống nghiệm khác, thêm 3 giọt thuốc thử Felling A và 3 giọt thuốc thử Felling B. Đun sôi cách thủy 3 phút. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện tủa màu đỏ gạch.
Kết quả: Xuất hiện tủa đỏ gạch.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có đƣờng khử.
* Định tính polysaccharid
Lấy 1g bột dƣợc liệu cho vào ống nghiệm lớn, thêm 10ml nƣớc, đun sôi cách thủy vài phút, lọc nóng, lấy dịch lọc ch vào 2 ống nghiệm.
+ Ống 1: 4ml dịch chiết + 5 giọt dung dịch lugol. + Ống 2: 4ml dịch chiết + 5 giọt nƣớc.
Phản ứng dƣơng tính khi ống 1 nhạt màu hơn ống 2.
Kết quả: Màu ống 1 nhạt hơn ống 2. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có polysaccharid.
* Định tính chất béo
Cho 10g bột dƣợc liệu vào bình nón dung tích 100ml, đổ ngập ether dầu hỏa, ngâm qua đêm, lọc lấy dịch. Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên giấy lọc, hơ nóng cho bay hơi hết dung môi. Phản ứng dƣơng tính khi quan sát thấy có vết mờ trên giấy lọc.
Kết quả: Có vết mờ trên giấy lọc. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có chất béo. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Định tính sterol
- Phản ứng Lieberman-Bouchardt.
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết ether dầu hỏa trên. Bốc hơi dung môi đến khô. Thêm vào ống nghiệm 1ml alhydrid acetic, lắc kỹ. Để nghiêng
36
ống nghiệm 45o, thêm acid sulfuric đặc từ từ theo thành ống nghiệm. Phản ứng dƣơng tính khi mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng tím đỏ.
Kết quả: Xuất hiện vòng tím đỏ giữa 2 lớp chất lỏng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có sterol.
* Định tính caroten
Lấy 5ml dịch chiết ether dầu hỏa trên cho vào ống nghiệm, bốc hơi trên nồi cách thủy đến khô, thêm 1-2 giọt dung dịch acid sulfuric đặc, lắc đều. Phản ứng dƣơng tính khi dịch lỏng chuyển sang màu xanh.
Kết quả: Dịch lỏng chuyển sang màu xanh. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có caroten.
Kết quả định tính các nhóm chất đƣợc trình bày tóm tắt trong bảng 3.5. Bảng 3.5. Kết quả định tính hạt Vải bằng phản ứng hóa học
ST T Nhóm chất Phản ứng Kết quả Sơ bộ kết luận 1 Alcaloid Phản ứng với TT. Mayer - Không Phản ứng với TT. Bouchardat - Phản ứng với TT. Dragendorff - 2 Glycosid tim Phản ứng Lieberman-burchardt - Không Phản ứng Keller-Kiliani - Phản ứng Baljet - Phản ứng Legal - 3 Flavonoid Phản ứng Cyanidin + Có Phản ứng với kiềm +
Phản ứng với Sắt(III) clorid 5% +
Phản ứng với TT.diazo +
4 Coumarin Phản ứng đóng mở vòng lacton + Có
37
5 Anthranoid Phản ứng Borntrager + Có
Vi thăng hoa +
6 Saponin Hiện tƣợng tạo bọt + Có
Phản ứng Salkowski +
7 Tanin
Phản ứng với dd sắt (III) clorid 5% +
Có Phản ứng với dd chì acetat 10% +
Phản ứng với dd gelatin 1% +
8 Acid hữu cơ Phản ứng với Na2CO3 + Có
9 Acid amin Phản ứng với TT Ninhydrin 3% + Có
10 Đƣờng khử Phản ứng với TT Felling + Có
11 Polysaccarid Phản ứng void dd Lugol + Có
12 Chất béo Vết mờ trên giấy lọc + Có
13 Sterol Phản ứng Lieberman-Bouchardt + Có
14 Caroten Phản ứng với acid sulfuric đặc + Có (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ghi chú: (-): phản ứng âm tính. (+): Phản ứng dƣơng tính.
Nhận xét: Hạt Vải có một số nhóm hợp chất: flavonoid, coumarin, anthranoid, saponin, tanin, acid amin, đƣờng khử, polysaccharid, chất béo, sterol, caroten, acid hữu cơ.