2.3.3.1. Định tính xác định nhóm hợp chất trong hạt Vải
Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học theo phƣơng pháp nghiên cứu hóa thực vật và hóa học cây thuốc [4], [5], [6], [7], [9].
- Chọn phản ứng đặc trƣng thƣờng là phản ứng màu, phản ứng kết tủa. - Chọn thuốc thử trong định tính nhóm hợp chất phải đặc hiệu, nhạy, dễ phát hiện.
2.3.3.2. Phân tích sơ bộ thành phần hóa học hạt Vải
- Xác định độ ẩm dƣợc liệu
Xác định độ ẩm theo phƣơng pháp mất khối lƣợng do làm khô (Dƣợc Điển Việt Nam IV- phụ lục 9.6) [3].
- Định lƣợng các chất tan trong n- hexan, ethyl acetat, n- butanol bằng phƣơng pháp cân. Cắn chiết các phân đoạn đem sấy ở nhiệt độ 600
C tới khối lƣợng không đổi. Xác định hàm lƣợng cắn các phân đoạn bằng phƣơng pháp cân.
Công thức tính: P(%) = M × (1 - h)a × 100 %. Trong đó: P là hàm lƣợng cắn (%). a là khối lƣợng cắn (g). M là khối lƣợng dƣợc liệu (g). h là độ ẩm dƣợc liệu (%)
21
-Định tính xác định nhóm hợp chất tan trong n- hexan, ethyl acetat, n- butanol bằng phản ứng hóa học.
- Định tính các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM).
Mẫu thử đƣợc chấm lên pha tĩnh là bản mỏng có tráng chất hấp phụ, sau đó pha động (dung môi khai triển) di chuyển dọc theo bản mỏng sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử với vận tốc khác nhau tạo thành sắc ký đồ với Rf tƣơng ứng.
Tiến hành theo Dƣợc điển Việt Nam IV- phụ lục 5.4 [3].
Pha tĩnh: Bản mỏng tráng sẵn silica gel GF254 của hãng Merck đƣợc hoạt hóa ở nhiệt độ 1050C- 1100C trong 1 giờ.
Pha động: Lựa chọn hệ dung môi thích hợp để tách tốt nhất. Pha dung môi theo đúng tỷ lệ, đổ vào bình chạy sắc ký sao cho bề mặt dung môi cách vết chấm 0,8 cm. Bão hòa dung môi trong bình chạy sắc ký, lót giấy lọc bên trong thành bình, đậy kín để yên trong 1 giờ.
Chấm sắc ký: Hoà tan cắn trong methanol, chấm với 1 lƣợng dịch phù hợp. Vết cách mép dƣới bản mỏng 1,5 cm, cách bờ ít nhất 1cm
Triển khai sắc ký: Đặt bản mỏng trong bình sắc ký, đậy kín, để yên. Khi vết dung môi cách mép trên bản mỏngkhoảng 2 cm thì lấy bản mỏng ra, đánh dấu đƣờng dung môi, để bay hơi dung môi trong tủ hốt.
Phát hiện vết: Quan sát ở 2 bƣớc sóng λ=254 nm, λ=366nm, thuốc thử hiện màu.