GC – MS là phương pháp khá mới, được sử dụng để định tính, định lượng các chất một cách chính xác và nhanh chóng. Bên cạnh việc thỏa mãn các tiêu chí về độ đúng, độ lặp lại,… GC – MS có ưu điểm nổi trội là độ nhạy rất cao (25fg-100pg) so với các phương pháp khác. Nó được coi là một trong các phương pháp phân tích dẫn đầu trong xu hướng phát triển kỹ thuật phân tích ứng dụng tiến bộ khoa học công nghệ của các cơ sở phân tích hiện nay.
Ở Việt Nam, phương pháp GC chủ yếu được ứng dụng trong lĩnh vực xác định dư lượng thuốc bảo vật. Việc ứng dụng trong lĩnh vực phân tích thuốc trong dịch sinh học còn khá mới mẻ. Phương pháp GC-MS mà chúng tôi xây dựng là nghiên cứu đầu tiên ở Việt Nam phân tích thuốc trong dịch sinh học, góp phần quan trọng trong nghiên cứu, đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc.
So với phương pháp HPLC- MS/MS [9], [15], [16], [26], phương pháp GC-MS mặc dù có thời gian phân tích dài hơn (13,5 phút so với khoảng 2-5 phút) nhưng GC dễ kết nối với máy khối phổ hơn HPLC do đó thiết bị đơn giản, kinh tế hơn, giảm chi phí trong phân tích mẫu. Ngoài ra, GC- MS sử dụng ít dung môi, hóa chất nên đây là phương pháp thân thiện với môi trường.
Như vậy, GC-MS là phương pháp phù hợp để phân tích FEL trong huyết tương nhằm đánh giá sinh khả dụng của thuốc.
3.3.2. Về xây dựng phương pháp định lượng.
Quy trình xử lý mẫu:
Do phương pháp định lượng sử dụng kỹ thuật GC – MS nên chỉ cần một lượng rất nhỏ tạp chất có trong mẫu thì cũng có thể bị phát hiện gây ảnh hưởng tới quy trình
63
phân tích. Hơn nữa mẫu huyết tương có thành phần rất phức tạp, tỷ lệ tạp chất lớn, và nồng độ FEL trong huyết tương lại khá thấp nên cần phải tìm được phương pháp xử lý mẫu thích hợp.
Phương pháp xử lý mẫu trong đề tài của chúng tôi là chiết lỏng – lỏng bằng dung môi Toluen. So với phương pháp chiết pha rắn (SPE) của Nishioka [23], phương pháp mà chúng tôi sử dụng đơn giản hơn nhiều, không cần các trang thiết bị phức tạp, không phải sử dụng đến cột chiết pha rắn đắt tiền, do đó tiết kiệm được khá nhiều kinh phí nhất là đối với các nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học (số lượng mẫu có thể lên tới hàng nghìn mẫu).
Phương pháp cho hiệu suất chiết khá cao với FEL là 89,4% và IS là 82,1% . Phương pháp sử dụng cũng không làm mẫu bị pha loãng, mà còn có thể giúp làm giàu mẫu nhờ quá trình cô và điều chỉnh thể tích dung môi hòa tan cắn.
Lựa chọn chuẩn nội
Việc lựa chọn NIF làm chất chuẩn nội cho thời gian lưu nhỏ hơn thời gian lưu của chất cần phân tích, để sau khi phát hiện ra chất phân tích chúng ta có thể dừng quá trình phân tích lại do đó có thể giảm thiểu thời gian cần thiết để phân tích và tăng tuổi thọ của máy sắc ký. Tuy nhiên, NIF không ổn định, dễ bị phân hủy trong quá trình bảo quản do đó chuẩn nội cần được pha hằng ngày trong quá trình phân tích.