23
Dựa vào công thức hóa học, tính chất lý hóa của các chất để lựa chọn chất chuẩn nội (IS), đảm bảo IS bền vững, có thể tách chiết cùng chất phân tích, đồng thời phù hợp khi phân tích cùng felodipin. Dự kiến nội chuẩn lựa chọn gồm Nifedipin (NIF) và Amlodipin (AMLO) [12], [14],[17],[24]. Hai chất này được pha trong MeOH (800 µg/ml) sau đó được pha loãng bằng MeOH thành nồng độ 4 µg/ml và được tiêm trực tiếp vào máy GC-MS để xác định mảnh phổ và thời gian lưu cùng với FEL.
Pha hỗn hợp ba chất Felodipin (1 µg/ml), Nifedipin (4 µg/ml) và Amlodipin (4 µg/ml) trong MeOH và được tiêm trực tiếp vào máy GC để xác định diện tích pic và hình ảnh pic của ba chất, từ đó lựa chọn IS phù hợp.
2.4.1.2. Khảo sát chương trình sắc ký
Qua nghiên cứu các tài liệu tham khảo, tiến hành khảo sát phương pháp phân tích trên hệ thống GC-MS với các điều kiện sắc ký như:
+ Cột mao quản, nhiệt độ cột, chương trình nhiệt độ.
+ Tiêm mẫu chia dòng, không chia dòng, nhiệt độ buồng tiêm. + Thể tích tiêm mẫu.
+ Detector, nhiệt độ Detector. +Lựa chọn khí mang: N2, H2, He. +Tốc độ khí mang.
2.4.1.3. Khảo sát quy trình xử lí mẫu
Dựa vào các tài liệu tham khảo, tiến hành khảo sát phương pháp xử lý mẫu, chiết tách felodipin từ huyết tương trên các mẫu chuẩn pha trong dung môi phù hợp; mẫu huyết tương trắng và các mẫu huyết tương chứa felodipin có nồng độ xấp xỉ Cmax,
24
bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng với dung môi hữu cơ (toluen, n-hexan, hỗn hợp toluen-n-hexan(1:1),…) [19].
Từ kết quả khảo sát, sơ bộ tiến hành lựa chọn phương pháp phân tích FEL gồm lựa chọn chất chuẩn nội, điều kiện sắc ký và quy trình xử lý mẫu phù hợp.