Độ đúng của phương pháp được đánh giá bằng cách thêm chất chuẩn diosgenin vào nền mẫu dung dịch pha từ cắn chiết và xác định tỷ lệ phần trăm thu hồi của chuẩn diosgenin theo qui trình đã xây dựng. Cách tiến hành như sau:
Tiến hành định lượng hàm lượng diosgenin có trong cắn chiết theo như mục 2.2.2a, tiến hành 3 lần ta lấy giá trị trung bình. Sau khi xác định được hàm lượng diosgenin trong cắn chiết, ta chuẩn bị một dung dịch diosgenin chuẩn với nồng độ 10mg/10ml pha trong ethanol 96%. Chuẩn bị bản mỏng như theo mục 2.2.2a, chấm dịch sắc ký 2 băng trên bản mỏng như qui trình đã xây dựng.
Băng 1: Chấm 10µL dịch chuẩn ban đầu.
Băng 2: Chấm 5µL dịch pha từ cắn chiết đã xác định được hàm lượng diosgenin + 5µL dịch chuẩn diosgenin vừa pha.
Như vậy với băng 2 ta đã thêm vào 5µg chất chuẩn diosgenin. Tiến hành định lượng và xác định lượng diosgenin tìm lại được.
Bảng 3.4: Độ thu hồi của phương pháp
Lần phân tích
Lượng chuẩn Diosgenin thêm vào
(µg)
Lượng Diosgenin
tìm lại được (µg) Độ thu hồi (%)
1 5 4,69 93,8 2 5 4,12 82,4 3 5 5,31 106,2 4 5 4,09 81,8 5 5 4,67 93,4 6 5 4,36 87,2 7 5 4,01 80,2 8 5 4,92 98,4 Trung Bình 90,43 SD 9,15 RSD (%) 10,12
Theo AOAC, độ thu hồi của phương pháp phải đạt là 80-110% [13]. Từ bảng kết quả cho thấy diosgenin có hiệu suất thu hồi trong khoảng giới hạn cho phép.
Hình 3.3: Peak sắc ký ứng với vết diosgenin chuẩn.
Hình 3.5: Peak diosgenin chuẩn.