qua vi khuẩn A. tumefaciens
Hai vector được sử dụng trong thớ nghiệm này là p6d35S-GUS và pCAMBIA 1301. Chủng vi khuẩn A. tumefaciens AGL-1 mang vector p6d35S-GUS (ký hiệu là AA39); và chủng AGL-1 mang vector pCAMBIA1301 (ký hiệu là AA43) được sử dụng để lõy nhiễm với cỏc đoạn thõn, lỏ của giống khoai tõy Atlantic. Mẫu đoạn thõn, mẫu lỏ được cắt ra từ cỏc cõy khoai tõy nuụi cấy trờn mụi trường nhõn NC sau 2-3 tuần nuụi cấy. Kết quả thớ nghiệm được trỡnh bày ở bảng 3.13
Bảng 3.13.
cõy khoai tõy Atlantic thụng qua vi khuẩn A. tumefaciens
CT Vector Tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus (%)
Mức độ biểu hiện
Đ/c 0 0 0
1 p6d35S-GUS 64,44 Đậm vừa
2 pCAMBIA 1301 35,55 Hơi đậm
Từ kết quả trờn bảng 3.13 cho thấy: Sử dụng vector p6d35S-GUS cho hiệu quả chuyển gen cao hơn, mức độ biểu hiện tạm thời của gen gus đối với mẫu lỏ đạt 64,44% với vựng biểu hiện rộng, mức độ biểu hiện đậm vừa. Trong khi sử dụng vector pCAMBIA1301 đạt tỷ lệ thấp hơn 35,55%, mức độ biểu hiện màu xanh
chàm nhạt hơn. Ở thớ nghiệm đối chứng chỳng tụi sử dụng mụi trường LB khụng cú vi khuẩn, và đó khụng quan sỏt thấy màu xanh của gen gus trờn mẫu lõy nhiễm (hỡnh 3.14).
Hỡnh 3.14. Lựa chọn vector chuyển gen thớch hợp vào mẫu lỏ khoai tõy Atlantic(AA39: p6d35S-GUS; AA43: pCAMBIA1301)
Bảng 3.14. Lựa chọn vector thớch hợp cho chuyển gen vào đoạn thõn cõy khoai tõy Atlantic thụng qua vi khuẩn A. tumefaciens
CT Vector chuyển gen Tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus (%)
Mức độ biểu hiện gen gus
Đ/c 0 0 0
1 p6d35S-GUS 76,11 Đậm vừa
2 pCAMBIA1301 42,22 Hơi đậm
Từ kết quả trờn bảng 3.14 cho thấy: Khi biến nạp với vector pCAMBIA1301 thỡ tỷ lệ biểu hiện gen gus tạm thời ở mẫu đoạn thõn đạt tỷ lệ thấp 42,22%, mức độ biểu hiện màu xanh chàm nhạt. Trong khi sử dụng vector p6d35S-GUS để biến nạp thỡ cho hiệu quả chuyển gen gus cao hơn, mức độ biểu hiện tạm thời của gen gus đạt 76,11%, mức độ biểu hiện tương đối tốt (màu xanh đậm) (hỡnh 3.15).
Hỡnh 3.15. Lựa chọn vector chuyển gen thớch hợp vào đoạn thõn khoai tõy Atlantic (AA39: pCAMBIA1301; AA43: p6d35S-GUS)
chuyển gen tiếp theo.