ở giống khoai tõy Atlantic.
Cỏc chủng gốc Agrobacterium tumefaciens khỏc nhau cú đặc điểm di truyền khỏc nhau dẫn tới khả năng xõm nhiễm và cài gen vào tế bào thực vật của chỳng cũng khỏc nhau. Do đú chỳng tụi đó tiến hành nghiờn cứu đỏnh giỏ ảnh hưởng của cỏc chủng A. tumefaciens khỏc nhau tới khả năng chuyển gen chỉ thị vào giống khoai tõy Atlantic.
Trong thớ nghiệm này, chỳng tụi sử dụng cỏc chủng vi khuẩn A. tumefaciens EHA101, C58 và AGL-1 mang vectơ chuyển gen pCAMBIA1301 để lõy nhiễm với cỏc đoạn thõn, lỏ của giống khoai tõy Atlantic. Mẫu đoạn thõn, mẫu lỏ được cắt ra từ cỏc cõy khoai tõy nuụi cấy trờn mụi trường nhõn NC sau 2-3 tuần nuụi cấy. Kết quả thớ nghiệm được trỡnh bày ở bảng 3.12
Bảng 3.12. Lựa chọn chủng vi khuẩn thớch hợp cho chuyển gen ở giống khoai tõy Atlantic
.
2 tuần 4 tuần
6 tuần
CT Chủng vi khuẩn Mẫu lỏ Đoạn thõn Tỷ lệ biểu hiện gen gus (%) Mức độ biểu hiện Tỷ lệ biểu hiện gen gus (%) Mức độ biểu hiện 1 AGL-1 83,33 Đậm vừa 80,55 Đậm vừa
2 C58 77,77 Đậm vừa 79,44 Đậm vừa
3 EHA 101 20,55 Nhạt 28,33 Nhạt
Đ/C - 0 - 0 -
Kết quả ở bảng 3.12 cho thấy: Ở cụng thức đối chứng (Đ/C) khụng cú vi khuẩn mà thay vào đú là mụi trường LB khụng cho biểu hiện màu xanh chàm của gen
gus sau khi nhuộm X-gluc ở mẫu lỏ và đoạn thõn, dịch nhuộm trong suốt. Như vậy kết quả thớ nghiệm hoàn toàn đỏng tin cậy, hiện tượng dương tớnh giả bị loại trừ. Trong số 3 chủng vi khuẩn sử dụng trong thớ nghiệm thỡ chủng vi khuẩn AGL-1 cho tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus ở mẫu lỏ khoai tõy đạt cao nhất 83,33% mức độ biểu hiện màu xanh chàm đậm vừa. Tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus ở chủng C58 sai khỏc khụng nhiều 77,77%. Chủng EHA 101 cho tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus thấp nhất 20,55% mức độ biểu hiện nhạt hơn so với cỏc chủng vi khuẩn cũn lại. Do đú chỳng tụi lựa chọn chủng AGL-1 cho cỏc thớ nghiệm chuyển gen tiếp theo.
Hỡnh 3.12. Biểu hiện tạm thời của gen gus trờn mẫu lỏ khoai tõy Atlantic sau khi lõy nhiễm với cỏc chủng vi khuẩn A. tumefaciens khỏc nhau.
Hỡnh 3.13. Biểu hiện tạm thời của gen gus trờn đoạn thõn khoai tõy Atlantic sau khi lõy nhiễm với cỏc chủng vi khuẩn A. tumefaciens khỏc nhau.
Nghiờn cứu của Beaujean và cộng sự (1998) đó xõy dựng được quy trỡnh chuyển gen cú hiệu quả cao ở 3 giống khoai tõy Desiree, Bintje và Kaptah Vandel sử dụng
AGL-1
chủng A. tumefaciens C58 mang vector pGS Gluc 1. Điều này cho thấy việc lựa chọn chủng A. tumefaciens thớch hợp cho biến nạp vào cõy khoai tõy phụ thuộc nhiều vào giống (kiểu gen) [21].
Với cỏc mẫu đoạn thõn được biến nạp với chủng EHA101 cho biểu hiện màu xanh chàm của gen gus yếu, cú màu xanh nhạt, tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus thấp nhất đạt 28,33%. Mẫu đoạn thõn được lõy nhiễm với chủng AGL-1 chỳng tụi quan sỏt thấy mức độ biểu hiện gen gus khỏ đậm, tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gusđạt cao nhất là 80,55%. Đối với chủng C58, tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus sai khỏc khụng nhiều so với chủng AGL-1 (đạt 79,44%), tuy nhiờn mức độ biểu hiện gen gus kộm hơn. Do đú chủng AGL-1 được chỳng tụi lựa chọn cho cỏc thớ nghiệm chuyển gen tiếp theo vào cõy khoai tõy Atlantic.