2.4.1.1. Nguyên liệu sử dụng trong nghiên cứu
- Nước lọc dùng để tẩm vào gạc đắp lên vùng đối chứng. Nước sạch dùng để rửa sạch vùng bôi thuốc.
2.4.1.2. Phương pháp nghiên cứu
Mô hình nghiên cứu được thiết kế và tiến hành dựa trên hướng dẫn của OECD (Organisation for Economic Co-operation and Development: Tổ chức Hợp tác và Phát triển kinh tế) về việc đánh giá kích ứng da dành cho các sản phẩm dược phẩm và mỹ phẩm dùng ngoài da [120], mô hình kinh điển của Draize [121] và Liên minh Châu Âu [122].
Sốlượng nghiên cứu: 03
Chế phẩm nghiên cứu: liều lượng sử dụng là 0,5g cho mỗi 6 cm2 da của thỏ. Quy trình nghiên cứu:
- Thỏđược nuôi trong lồng riêng, cho ăn bằng chếđộ ăn riêng, giữ ở nhiệt độ phòng trong vòng 1 tuần trước khi tiến hành nghiên cứu.
- Trước ngày nghiên cứu 1 ngày, thỏđược cạo lông ở phần lưng và hông. - Chia phần da cạo lông làm 2 phần, chọn mỗi phần có diện tích 6 cm2 (2,5 cm x 2,5 cm) trên mỗi thỏ được sử dụng để bôi chế phẩm nghiên cứu, phần da không bôi thuốc được sử dụng làm chứng (đắp gạc có giảdược).
- Đắp gạc (diện tích 6 cm2) lên cả hai phần bôi thuốc và phần dùng làm chứng, phần làm chứng được đắp gạc tẩm 0,5kg kem giảdược.
- Lưng thỏđược băng (không băng chặt) lại bằng băng gạc.
- Sau 4 giờ, tháo bỏ tất cả băng gạc ra khỏi lưng thỏ và rửa sạch thuốc bằng nước sạch.
- Đánh giá và tính điểm các chỉ số vềban đỏ (erythema), phù nề (oedema) tại thời điểm 1 giờ, 24, 48, 72 giờ sau khi loại bỏ thuốc. Nếu có tổn thương, theo dõi thỏ 14 ngày đểđánh giá khảnăng phục hồi. Khi tổn thương đã hồi phục thì ngừng theo dõi.
- Bảng đánh giá tính điểm cho hai triệu chứng ban đỏ và phù nề [120]:
Ban đỏ
- Không có
Điểm
- Rất nhẹ (khó nhận thấy) - Dễ nhận thấy - Nhẹđến nặng - Nặng đến hình thành vảy trên da 1 2 3 4 Phù nề - Không có - Rất nhẹ (khó nhận thấy) - Dễ nhận thấy (da dày lên) - Trung bình
- Nặng (dày hơn 1 mm hoặc ra ngoài vùng bôi)
0 1 2 3 4 - Có thể tiến hành làm giải phẫu bệnh để khẳng định tổn thương. - Ở mỗi thời điểm, sốđiểm được tính bằng cách chia trung bình. - Bảng xếp loại kích ứng da [120]: Xếp loại Điểm Không kích ứng Kích ứng nhẹ Kích ứng vừa Kích ứng nặng 0 - 0,4 0,5 - 1,9 2 - 4,9 5 - 8