h. Độ phõn giải và cỏc yếu tố ảnh hưởng (sự tỏch hai chất)
2.2.5. Cỏc loại detectơ trong HPLC
Cỏc chất tỏch ra khỏi nhau được pha động đẩy đến detectơ để đo, tớn hiệu phỏt hiện được chỉ thị sang bộ phận ghi nhận kết quả và được biểu diễn dưới dạng pớc sắc ký. Bộ phận phỏt hiện (detectơ) để phỏt hiện cỏc chất trong HPLC cú nhiều loại. Tuỳ theo tớnh chất húa lý của chất cần phõn tớch mà người ta sử dụng cỏc loại detectơ khỏc nhau. Nhưng dự theo tớnh chất nào thi nú cũng phải thoả món biểu thức mối quan hệ.
A=k.C (2.2)
Trong đú A là tớn hiệu đo của chất phõn tớch trong mẫu, k là hằng số điều kiện thực nghiệm của detectơ đó chọn.
Detectơ là bộ phận theo dừi phỏt hiện cỏc chất tan trong pha động từ cột sắc ký chảy ra một cỏch liờn tục. Nú là một bộ phận thu nhận và phỏt hiện cỏc chất hay hợp chất dựa theo một tớnh chất nào đú của chất phõn tớch. Detectơ là một trong những bộ phận quan trọng của HPLC. Một detectơ lý tưởng trong HPLC phải đạt được những yờu cầu sau: cú độ nhạy phõn tớch cao, đỏp ứng được với cỏc chất cần phõn tớch hoặc đặc trưng của chỳng, khụng phỏ huỷ mẫu, khụng nhạy cảm với cỏc thay đổi nhiệt độ và tốc độ dũng của pha động, cú thể vận hành liờn tục, cho độ lặp lại tốt và dễ sử dụng. Vỡ vậy, việc lựa chọn detectơ quyết định sự thành cụng của mỗi phương phỏp HPLC riờng biệt. Trong số cỏc detectơ được sử dụng bao gồm detectơ UV, điện húa, đo độ dẫn điện, khỳc xạ, huỳnh quang, và mỗi loại detectơ lại cú ưu điểm và nhược điểm riờng. Hầu hết cỏc chất hay hợp chất phõn tớch đều cú tớnh chất hấp thu quang trong vựng UV-VIS vỡ vậy detectơ UV-VIS hay detectơ PDA được sử dụng thụng dụng trong trong phõn tớch. Detectơ huỳnh quang cú hạn chế hơn so với UV-VIS do tớnh chất phỏt quang của cỏc chất hay nhúm hợp chất khụng phải là thụng dụng mà chỉ một số ớt cỏc chất và hợp chất cú phỏt quang. Nhưng hạn chế đú cũng là ưu điểm của detectơ huỳnh quang đối với chất hay hợp chất cú tớnh chất phỏt quang, nờn việc sử dụng detectơ huỳnh quang cho độ nhạy và độ chọn lọc cao hơn rất nhiều so với detectơ UV - VIS, đối với cỏc chất cú huỳnh quang.
- Detectơ quang phổ hấp thu phõn tử UV-VIS: ỏp dụng cho cỏc chất cú khả năng hấp thu ỏnh sỏng trong vựng tử ngoại (UV) hoặc vựng khả kiến (VIS). - Detectơ huỳnh quang RF: sử dụng để phỏt hiện cỏc chất cú khả năng phỏt
huỳnh quang. Nguyờn tắc của phộp đo huỳnh quang là chiếu một chựm tia sỏng kớch thớch cú bước súng xỏc định (EX) phự hợp vào cuvột chứa chất mẫu phõn tớch để chất phõn tớch phỏt ra chựm tia phỏt xạ (Em). Sau đú nhờ hệ thống quang học thu, phõn ly tỏch lấy tia phỏt xạ huỳnh quang thớch hợp cần đo hướng vào nhõn quang điện để đo chỳng, khuyếch đại và chỉ thị (biểu diễn) chỳng theo một cỏch nào đú. Việc phỏt hiện định lượng ở đõy là dựa trờn cơ sở trong một vựng nồng độ C nhất định của chất phõn tớch, thỡ cường độ của tia phỏt xạ huỳnh quang của chất hay sản phẩm của nú là phụ thuộc tuyến tớnh vào nồng độ của nú. Như vậy về nguyờn tắc cấu tạo thỡ detectơ huỳnh quang khỏc với detectơ UV-VIS ở chỗ là gồm hai hệ quang. Một hệ quang cung cấp chựm tia kớch thớch, một hệ quang thu nhận chựm tia phỏt xạ huỳnh quang của chất mẫu được đặt vuụng gúc với chựm tia kớch thớch. Detectơ huỳnh quang cú độ nhạy và độ chọn lọc cao. Đối với những chất khụng cú khả phỏt huỳnh quang, cần phải dẫn xuất húa chất phõn tớch, gắn nú với chất cú khả năng phỏt huỳnh quang hoặc chất phõn tớch phản ứng với thuốc thử để tạo thành sản phẩm cú khả năng phỏt huỳnh quang.
- Detectơ độ dẫn: phự hợp với cỏc chất cú hoạt tớnh điện húa: cỏc ion kim loại chuyển tiếp.
- Detectơ chỉ số khỳc xạ: hoạt động của detector theo nguyờn lý đo vi sai. Tớn hiệu đo là sự khỏc nhau giữa chỉ số khỳc xạ (RI) của pha động và của pha động hoà tan chất phõn tớch. Tớn hiệu này cú thể cú giỏ trị dương hoặc õm. - Detectơ tỏn xạ bay hơi (ELSD): Dịch rửa giải từ cột sắc ký đi vào đầu
detector được trộn lẫn với khớ nitơ ở trong bộ phận phun sương. Hỗn hợp đi qua một kim nhỏ được phõn tỏn thành đỏm sương mự kớch thước đều nhau. ở đõy dung mụi được bay hơi loại khỏi hạt sương, hạt rắn mịn được tạo thành. Cỏc hạt rắn này đi cắt ngang chựm tia laser. Chựm tia laser bị tỏn xạ bởi cỏc
hạt rắn được phỏt hiện nhờ ống nhõn quang. Chất phõn tớch được phỏt hiện nhờ ỏnh sỏng tỏn xạ tạo ra tớn hiệu điện. Đỏp ứng của detectơ liờn quan đến khối lượng của chất phõn tớch - nghĩa là diện tớch pớc sắc ký tỷ lệ thuận với khối lượng.
Ngày nay, cỏc detectơ hiện đại ngày càng được cải tiến và mở rộng, như detectơ mảng diot, detectơ khối phổ (MS), detectơ điện hoỏ đo dũng, detectơ đo dộ dẫn điện, detectơ đo thế, detectơ hấp thụ nhiệt, detectơ mảng diot phỏt quang, và nhiều detectơ khỏc như đo độ siờu, đo độ cảm ứng, đo độ linh động của chất,… giỳp người phõn tớch xỏc định chớnh xỏc chất phõn tớch theo đỳng bản chất và tớnh chất đặc trưng của nú.