Cụng thức tổng quỏt của một axớt amin như sau:
1.4.5.1.2. Phương phỏp sắc ký cột
Phương phỏp sắc ký cột là một phương phỏp sắc ký cơ bản đơn giản, nú là nền tảng của phương phỏp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sau này.
Phương phỏp sắc ký cột với dẫn xuất sau cột dựng ninhydrin đó được ỏp dụng xỏc định axớt amin từ những năm 1940 bởi Moore, S., Stein, W. H., [64, 65] và sau này được nhiều tỏc giả ỏp dụng và cải tiến và được ỏp dụng trong xỏc định axớt amin ở nhiều đối tượng khỏc nhau [17, 20, 21, 42, 43, 56, 63, 64, 65, 66, 71, 76]. Nguyờn lý cơ bản là axớt amin được tỏch ra bằng cột trao đổi ion, phản ứng với ninhydrin tạo phức chất màu vàng, đo độ hấp thụ quang của phức màu thu được bằng quang kế cú bước súng 440 nm và 570 nm cho giới hạn xỏc định đến 10 pM với hầu hết cỏc axớt amin và 50 pM với prolin. Mặc dự phương phỏp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) đó thực sự phỏt triển và ỏp dụng xỏc định axớt amin ở nhiều
đối tượng, nhưng phương phỏp sắc ký cột với dẫn xuất sau cột ninhydrin vẫn được ỏp dụng và tiếp tục hoàn thiện cho tận đến ngày nay do sử dụng thiết bị rẻ tiền, thuận tiện cho phõn tớch lượng lớn. Bằng việc thay chuẩn húa thời gian, ổn định nhiệt độ, nhiệt độ dẫn xuất, pH và mụi trường đệm chạy sắc ký, đặc biệt là thay thế dung dịch rửa giải là hỗn hợp lithi hydroxyd/axit acetic được thay thế bằng natri hydroxyt/axit acetic Shi-Wen Sun, Yi-cheng Lin & cộng sự [73] đó rỳt ngắn được thời gian chỉ cũn 30 phỳt khi tỏch và xỏc định đồng thời 10 axớt amin.
Phương phỏp sắc ký cột với dẫn xuất sau cột là o-phthalaldehyd (OPA), cỏc axớt amin sau khi được tỏch ra khỏi cột trao đổi ion được dẫn xuất bằng OPA tạo phức chất cú tớnh chất phỏt huỳnh quang, đo huỳnh quang ở bước súng kớch thớch 348nm và bước súng phỏt xạ là 450 nm. Phương phỏp cú thể tỏch và xỏc định đồng thời cỏc axớt amin bậc 1 với giới hạn phỏt hiện đạt tới 20 pM [43]. Dẫn xuất OPA cú hạn chế lớn là khụng phản ứng được với cỏc axớt amin bậc 2.
Phương phỏp tỏch sắc ký cột cổ điển là phương phỏp đơn giản cú thể ỏp dụng cho bất kỳ phũng thớ nghiệm nào. Tuy nhiờn, do thời gian tỏch lõu, khả năng tỏch khụng cao so với cỏc kỹ thuật hiện đại nờn nú chỉ được ỏp dụng trong cỏc đối tượng tỏch đơn giản.