0
Tải bản đầy đủ (.pdf) (148 trang)

Phương phỏp điện di mao quản

Một phần của tài liệu NGHIÊN CỨU TỐI ƯU HOÁ CÁC ĐIỀU KIỆN ĐỂ TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ AXIT AMIN TRONG THỰC PHẨM BẰNG SẮC KHÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (Trang 32 -32 )

Cụng thức tổng quỏt của một axớt amin như sau:

1.4.5.3. Phương phỏp điện di mao quản

Phương phỏp điện di mao quản hiệu năng cao, hay cũn gọi là điện di mao quản thế cao là một kỹ thuật tỏch và xỏc định đồng thời cỏc chất trong một hỗn hợp mẫu dựa theo nguyờn lý của sự điện di của cỏc chất trong ống mao quản nhỏ cú chứa dung dịch đệm điện di với giỏ trị pH nhất định và được điều khiển bởi cường độ điện trường E do nguồn điện thế cao một chiều V(14-30 KV) đặt vào hai đầu mao quản. Phương phỏp này tỏch cỏc chất là cỏc ion hoặc cỏc chất khụng ion nhưng cú mối liờn hệ chặt chẽ với cỏc ion trong một ống mao quản hẹp đặt trong điện trường, do điện tớch và linh độ điện di của cỏc chất khỏc nhau, chỳng di chuyển với tốc độ khỏc nhau và tỏch ra khỏi nhau.

M. Ummadi, B. C. Weimer [59] đó phỏt triển phương phỏp điện di mao quản huỳnh quang laze (CE-LIF) để phỏt hiện và định lượng 17 axớt amin tại nồng độ mM. Cỏc axớt amin được dẫn xuất với 3-(4-carboxybenzoyl)-2-quinolin- carboxaldehyd trước khi phõn tớch bằng CE-LIF. Mụi trường tỏch là hệ đệm chứa: borat 6,25 mM, SDS 150 mM, và THF 10 mM (pH = 9,66) tại 25oC, điện thế 24 kV. Độ biến động của phương phỏp trong giới hạn từ 0,3 - 0,9% trong một ngày và từ 0,7 - 1,5% giữa cỏc ngày. Cỏc tỏc giả đó ứng dụng phương phỏp này để theo dừi sự thay đổi nồng độ axớt amin trong quỏ trỡnh chuyển húa vi khuẩn.

Sử dụng phương phỏp điện di mao quản vựng (CZE), G. Zunic và cộng sự [35] đó tỏch và định lượng được 30 axớt amin tự do và cỏc peptid trong cỏc dịch sinh lý học, với sự phỏt hiện giỏn tiếp thụng qua việc theo dừi tớnh chất của chất nền. Quỏ trỡnh xử lý mẫu chỉ yờu cầu bước kết tủa protein và pha loóng. Mụi trường tỏch

là đệm axit p-aminosalicylic và natri carbonat tại pH = 10,2 ± 0,1. Quỏ trỡnh điện di được thực hiện trong một mao quản (87 cm, đường kớnh 75 μm) với điện thế khụng đổi 15 kV tại 20oC, trong vũng 30 phỳt. Giới hạn phỏt hiện từ 1,93 - 20,08 pM/l (trung bỡnh 6,71 pM/l). Khoảng tuyến tớnh từ 50 - 200 pM/l.

Cũng với hệ thống điện di mao quản nhưng sử dụng detectơ điện húa (CE- ED), J-J. Xu và cộng sự [46] đó cải tiến điện cực làm việc, tỡm ra điều kiện tối ưu cho sự tỏch và định lượng cỏc axớt amin tự nhiờn, đại diện để khảo sỏt là: Arg, Thr, Glu, Cys; chất nền là Na2B4O7 5,0 mM, pH = 9,3 tại nhiệt độ phũng.

Phương phỏp điện di mao quản tuy mới ra đời vào những năm 1995, nhưng nú đó phỏt triển rất nhanh ở nhiều nước, hiện tại đó đó được ỏp dụng ở Việt Nam nhưng cú rất ớt cỏc phũng thớ nghiệm cú thiết bị này nờn chưa được phỏt triển rộng rói ở Việt Nam.

Một phần của tài liệu NGHIÊN CỨU TỐI ƯU HOÁ CÁC ĐIỀU KIỆN ĐỂ TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ AXIT AMIN TRONG THỰC PHẨM BẰNG SẮC KHÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (Trang 32 -32 )

×