probiotic tiềm năng trên môi trường đồ uống malt-base
4.2.6.1 Thí nghiệm thủy phân mucin
Vi khuẩn phát triển sau khi nuôi cấy trong bốn loại môi trường, các môi trường cơ sở (không có nguồn carbon), các môi trường cơ sở với chất nhầy như là nguồn carbon duy nhất, các môi trường cơ sở với glucose và các môi trường cơ sở với glucose và chất nhầy như là nguồn carbon được kiểm tra bằng đo phát xạ tại 600nm (OD600nm) và giá trị pH. Ở đây không có sự khác biệt lớn trong OD600nm và giá trị pH giữa chủng mẫu và chủng thí nghiệm của mỗi loài Bifidobacteria trong mỗi môi trường nuôi cấy, mặc dù có vài sự khác nhau giữa các loài. Tất cả các chủng Bifidobacteria cho thấy OD600nm cao hơn trong các môi trường có bổ sung glucose hoặc glucose và mucin so với trong các môi trường chỉ có mucin hoặc môi trường cơ sở, trong khi đó fecal culture cho thấy giá trị OD600nm cao trong toàn bộ môi trường. Cũng như vậy, OD600nm của các môi trường cơ sở với mucin trong hầu hết canh trường Bifidobacteria không cao hơn so OD600nm trong môi trường cơ sở. Mặc dù chỉ giống B.infantis M-63 trong môi trường cơ sở với mucin cho thấy OD600nm khá cao hơn, giá trị đó vẫn thấp hơn so với canh trường bổ sung glucose hoặc vi sinh vật của mẫu phân. Giá trị pH của mỗi canh trường ảnh hưởng đến kết quả của OD600nm. Với tất cả các chủng thí nghiệm, không có sự khác nhau trong giá trị pH giữa các môi trường cơ sở (6.17 +- 0.10) và các môi trường có glucose (6.16+-0.16) và giá trị pH của những canh trường này cao hơn so với giá trị pH của các môi trường với glucose (3.89+-0.10) và các môi trường có glucose và mucin (3.9+-0.11) sau 48 giờ nuôi cấy. Tất cả những kết quả trên với các chủng thí nghiệm hầu như là tương tự với các giá trị của những chủng mẫu trong thí nghiệm này.
Các gốc mucin trong các canh trường nuôi cấy Bifidobacteria trong các môi trường cơ sở với chất nhầy được phân tích SDS-PAGE được nhuộm với Coomassie cho các bã protein và tiếp theo đó bằng thuốc nhuộm PAS cho các bã glycoprotein. Mặc dù SDS-PAGE của fecal culture mang lại phần mucin bị thủy phân, được quan sát như phần còn lại của các kích thước đa dạng, bằng cả 2 phương pháp nhuộm màu, môi trường phân được tiệt trùng và tất cả các canh trường bifidobacteria (các chủng mẫu và chủng thí nghiệm) cho thấy không có thành phần thủy phân trong cả 2 keo nhuộm. Những sự quan sát cho thấy rằng
tất cả các chủng Bifidobacteria được kiểm tra không có hoạt động làm giảm chất nhầy, ngược lại đối với vi sinh vật trong phân.
Hơn thế nữa, nghiên cứu sự thủy phân mucin đã được thực hiện trong đĩa Petri. Sử dụng các môi trường đặc (agar medium) với chỉ chất nhầy như nguồn carbon, chí fecal sample thành cụm (formed colony) với vùng tiêu hóa (lysis zone) xung quanh cụm, trong khi mẫu tiệt trùng và tất cả các chủng Bifidobacteria (cả chủng mẫu và chủng thí nghiệm) không thành cụm (formed no colony) và không có vùng tiêu hóa quanh các điểm nuôi cấy. Sử dụng các môi trường đặc có chứa cả glucose và chất nhầy, tất cả các chủng Bifidobacteria cho thấy colonie, nhưng không tạo ra được vùng tiêu hóa xung quanh các cụm. Cũng như vậy. không vùng tiêu hóa xung quanh cụm được quan sát trong fecal culture trên môi trường với mucin và glucose.