probiotic tiềm năng trên môi trường đồ uống malt-base
4.2.4Thí nghiệm chuyển vị
Khả năng chuyển vị vi khuẩn của B. longum BB536 được quyết định khi sử dụng những con chuột 4 tuần tuổi (BALB/cAnNCrlCrlj, SPF). 5 con chuột đực và 5 con chuột cái mội loại được chia thành nhóm thí nghiệm và nhóm kiểm chứng. Mỗi nhóm có 5 con chuột được nhốt trong một chuồng bằng thép không rỉ trong môi trường kiểm soát (nhiệt độ 20 – 24oC, độ ẩm 45 – 75%) với chu trình 12h sáng tối, và được tiếp cận tự do với thức ăn viên đã được tiệt trùng (Funabashi Farm Co., Ltd., Chiba, Nhật Bản) và nước trong suốt thời gian thí nghiệm.
Sau 7 ngày thay đổi điều kiện thích nghi, bột bifidobacteria hòa vào dung dịch muối được cung cấp cho chuột. Những con vật thí nghiệm được cung cấp B. longum BB536 9,3.1011 cfu/kg/ngày bằng miệng thông qua ống thực quản một lần một ngày trong 7 ngày. Những con chuột trong nhóm kiểm chứng được cung cấp dung dịch tinh bột khoai tây thay vì bột bifidobacteria. Quan sát những dấu hiệu chungh và đo khối lượng cơ thể được điều khiển trong suốt quá trình thí nghiệm. Vào ngày thứ tám, một ngày sau ngày cung cấp thức ăn cuối cùng, tất cả chuột đều chết sau khi máu được rút từ tim bằng cách gây mê. Sau khi quan sát chung về tất cả sự khác thường trong những cơ quan và các mô, gan, lá lách, thận, ruột hồi, ruột và mấu bạch huyết ở màng treo ruột được thu gom trong điều kiện sinh vật học sạch đối với phép phân tích chuyển vị vi khuẩn và kiểm tra mô bệnh học.
Đối với phân tích chuyển vị vi khuẩn, mỗi cơ quan được băm nhỏ bằng dao mổ tiệt trùng và các mô được băm nhỏ thì được trải trên những đĩa agar BL (Nissui Co., Ltd, Tokyo, Nhật Bản) được sử dụng cho việc phân tích hệ vi sinh vật đường ruột. Đối với máu, 0.2 ml máu được rải trên đĩa agar BL. Những đĩa agar được ủ ở 37oC trong 72h trong điều kiện kỵ khí sử dụng Anaero Pack. Đối với việc xác định mô huyết học, những phần paraffin của ruột hồi và ruột được chuẩn bị được nhuộm để quan sát trên kính hiển vi. Đối với ruột kết, chiều cao lông nhung (từ đỉnh xuống đáy), chiều sâu đáy (từ vùng mở đến đáy) và chiều dày niêm mạc ( đỉnh của lông nhung đến cơ niêm mạc) được đo bằng kính hiển vi.
Đối với ruột, chiều dày niêm mạc (bề mặt niêm mạc đến cơ niêm mạc) và hiều cao tế bào biểu mô (từ dỉnh đến màng cơ sở)được quan sát.