-Dùng chất đánh dấu là chất phát huỳnh quang (khi hấp thụ 1 ánh sáng có bước sóng nhất định sẽ phát ra 1 ánh sáng có bước sóng dài hơn).
-Nguyên lý:
+Khi dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể đó đc nhuộm bằng chất phát huỳnh quang, rồi cho kết hợp với kháng nguyên cần chẩn đoán. Nếu có phức hợp kháng nguyên - kháng thể khi soi dưới kính hiển vi huỳnh quang sẽ phát sáng.
+Dùng chất phát huỳnh quang:
•Fluorescent Isothiocyanat: cho màu xanh lục •Rodamin: màu đỏ gạch
•Lixamin - Rodamin B (RB200): đỏ^ vàng da cam - Có 2 phương pháp: trực tiếp và gián tiếp.
❖ Phản ứng miễn dich huỳnh quang trưc tiếp:
-Trong phản ứng này thường dùng kháng thể đặc hiệu nhuộm chất phát huỳnh quang để phát hiện kháng nguyên chưa biết.
-Cách làm:
+Lấy bệnh phẩm cần chẩn đoán, làm thành tiêu bản (phiết bệnh phẩm lên phiến kính, cố định) để kháng nguyên gắn chặt lên phiến kính.
+Nhỏ một giọt kháng nguyên đặc hiệu đã gắn chất phát huỳnh quang lên tiêu bản.
+Để một thời gian 30 phút, rửa nước, để khô, quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang (ánh sáng tia tử ngoại). Đọc kết quả.
•Phản ứng dương tính: Có hiện tượng phát sáng do có sự kết hợp của kháng nguyên - kháng thể đó gắn chất phát huỳnh quang.
•Phản ứng âm tính: Không có phát sáng, do không có sự kết hợp kháng nguyên - kháng thể.
❖ Phản ứng miễn dich huỳnh quang gián tiếp:
-Dùng kháng kháng thể đc nhuộm chất phát huỳnh quang để phát hiện kháng nguyên cần chẩn đoán. - Phương pháp này còn gọi là kỹ thuật 2 lớp với 3 thành phần tham gia.
+Kháng nguyên cần chẩn đoán (kháng nguyên ?) +Kháng thể đặc hiệu +Kháng kháng thể đó gắn chất phát huỳnh quang.
Trong đó kháng thể đặc hiệu có 2 chức năng:
•Là kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên cần chẩn đoán
•Là kháng nguyên của kháng kháng thể đã đánh dấu (kháng kháng thể là kháng thể kháng globulin cùng loài).
-Cách làm:
+Lấy bệnh phẩm cần chuẩn đoán làm tiêu bản để kháng nguyên gắn chặt lên phiến kình. +Nhỏ một giọt kháng thể đặc hiệu lên phiến kình. Để tác động 15', rồi rửa nước.
32
+Để tác động một thời gian, rửa nước, để khô, quan sát dưới kình hiển vi huỳnh quang. Đọc kết quả. - Phản ứng dương tình: Có hiện tượng phát sáng, tức là có hiện tượng kết hợp kháng nguyên + kháng thể + kháng kháng thể gia súc mắc bệnh
-Phản ứng âm tình: Không có hiện tượng phát sáng, tức là không có hiện tượng kết hợp kháng nguyên + kháng thể + kháng kháng thể. Bởi ví kháng nguyên và kháng thể không tương ứng, không có sự kết hợp kháng nguyên - kháng thể, kháng thể bị rửa trôi.
-Phương pháp gián tiếp hay đc sử dụng ví:
+Chỉ cần một lần gắn kháng kháng thể với chất huỳnh quang ta có thể sử dụng để chẩn đoán nhiều kháng nguyên khác nhau, với điều kiện kháng thể đặc hiệu của chúng phải đc chế trên cùng một loài
vật.
+Độ nhạy của phản ứng cao hơn, bởi ví 1 phân tử kháng nguyên có thể bị nhiều kháng kháng thể bám vào ^ độ phát quang tăng lên, dễ phát hiện.