Nấm Panus tenebrosus dễ dàng được phân lập trên môi trường PGA cải tiến, các mẫu không bị nhiễm bắt đầu có sợi nấm bung ra. Sau một ngày kể từ khi cấy giống sợi nấm bắt đầu bung ra và bao phủ toàn bộ mẫu cấy, tuy nhiên các sợi nấm chưa bám vào bề mặt của môi trường, sang ngày thứ hai sợi nấm tiếp tục phát triển và ăn xuống bề mặt của môi trường, sợi nấm rất mảnh và thưa. Hệ sợi phát sinh dạng tơ bông trắng, những ngày sau hệ sợi phát triển rất mạnh, dày hơn, phát triển nhanh hơn. Sợi nấm tiếp tục phát triển đến khi lan hết bề mặt môi trường. Có trường hợp sợi nấm phát triển thành quả thể ngay trong ống nghiệm.
Như vậy chúng tôi đã phân lập thành công giống nấm Panus tenebrosus bằng phương pháp tách mô vô trùng từ quả thể. Kết quả cho thấy sợi nấm phát triển rất tốt, thích hợp phát triển trên môi trường PGA.
Từ những ống nghiệm đó ta tiến hành cấy chuyển liên tiếp trên môi trường PGA 2 – 3 lần. Sau khoảng 15 – 20 ngày thu được mẫu giống chuẩn cho loài Panus tenebrosus, sau lần cấy chuyển thứ 3 hoàn toàn sạch các khuẩn tạp nhiễm. Lựa chọn các ống giống ~ 6 –10 ngày tuổi, tơ nấm phát triển mạnh nhất cất trữ bảo quản trong tủ lạnh (5 – 80C) để bảo tồn nguồn gene phục vụ cho việc nuôi trồng và những nghiên cứu sau này.
Hình 3.7. Giống Panus tenebrosus thuần khiết 3.2.2. Khảo sát tốc độ lan tơ trên môi trường thạch
Từ ống nghiệm chứa giống nấm thuần khiết đem cấy lên môi trường PGA để khảo sát tốc độ lan tơ của nấm Panus tenebrosus tại nhiệt độ phòng (28 – 300C). Kết quả thu được như sau:
Nhận xét:
Sau một ngày kể từ khi cấy giống sợi nấm bắt đầu bung ra và bao phủ toàn bộ mẫu cấy, tuy nhiên các sợi nấm chưa bám vào bề mặt của môi trường, sang ngày thứ hai sợi nấm tiếp tục phát triển và ăn xuống bề mặt của môi trường. Về hình thái, sợi nấm rất mảnh và thưa, có hiện tượng sợi nấm vươn dài ra phía trước. Những ngày sau sợi nấm ở gần mẫu cấy bện chặt và dày hơn. Chúng tôi tiến hành khảo sát tốc độ lan tơ từ ngày thứ 4. Sau 14 ngày cấy giống vào môi trường thạch, sợi nấm ăn kín bề mặt môi trường, tổ chức sợi nấm có màu bông trắng, không còn thấy hiện tượng phân hóa về tổ chức như trước.
0 2 4 6 8 10 12 4 6 8 10 12 14 Thời gian (ngày) Đ ộ dài tơ n ấ m (cm) Ống 1 Ống 2
Hình 3.8. Đồ thị biểu diễn tốc độ phát triển của hệ sợi nấm trên môi trường PGA
Qua bảng biểu đồ trên ta nhận thấy tốc độ lan tơ của nấm ở 2 ống nghiệm những ngày đầu xấp xỉ như nhau, sợi nấm phát triển chậm, những ngày sau thì tốc độ lan tơ của nấm ở 2 ống nghiệm có sự khác nhau tuy nhiên sự sai khác đó không nhiều, từ ngày thứ 6 – 10 sợi nấm tăng trưởng mạnh nhất, trung bình khoảng ~1cm/ngày. Cần chú ý rằng nấm phát triển trong pha sợi rất kỵ ánh sáng, sợi nấm tiếp xúc nhiều với ánh sáng đặc biệt là ánh sáng trực tiếp từ mặt trời thì sợi nấm ngả vàng rất nhanh, đây là một hình thức tự bảo vệ của sợi nấm trước các bức xạ của ánh sáng mặt trời. Từ đó chúng tôi đề nghị rằng khi nhân giống nấm P. tenebrosus
thì phải để trong tối, không được để ánh sáng trực tiếp chiếu vào và thời gian giữ giống tốt nhất là 8 – 10 ngày kể từ khi cấy giống.
3.2.3. Khảo sát tốc độ lan tơ trên môi trường hạt
Để khảo sát được tốc độ lan tơ của nấm trên môi trường hạt (cũng là môi trường nhân giống trong sản xuất) chúng tôi tiến hành cấy giống nấm thuần khiết vào trong các chai có chứa môi trường hạt. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.2 (phụ lục) và biểu đồ 3.2.
Nhận xét:
Chúng tôi chọn môi trường hạt lúa để thử nghiệm làm môi trường nhân giống cho nấm Panus tenebrosus vì những lý do sau: thành phần môi trường dễ kiếm và thích hợp cho những loài nấm phá gỗ phát triển. Môi trường này có đầy đủ các chất dinh dưỡng cần thiết cho sợi nấm phát triển. Môi trường này đã được sử dụng để nhân giống thành công cho rất nhiều loài nấm.
Môi trường này cũng tỏ ra thích hợp với nấm Panus tenebrosus như những số liệu mà chúng tôi chỉ ra ở biểu đồ 3.2. Chúng tôi nhận thấy rằng sau khi cấy giống từ môi trường thạch vào thì sau hai ngày quan sát thấy mẫu cấy bắt đầu phục hồi và bám tơ xuống môi trường. Những ngày đầu sợi nấm lan rất chậm, từ ngày thứ 4 chúng tôi nhận thấy rằng tốc độ lan tơ của nấm Panus tenebrosus nhanh dần, tuy sợi nấm rất mỏng và thưa. Đến ngày thứ 6 chúng tôi thấy rằng tổ chức của tơ nấm đã bắt đầu chặt chẽ hơn, tơ dày hơn, phát triển nhanh hơn. Điều này cũng rất
phù hợp với những kết quả thu được khi khảo sát tốc độ phát triển của sợi nấm trên môi trường thạch.
Chúng tôi bắt đầu khảo sát tốc độ lan tơ của nấm từ ngày thứ 6 và nhận thấy rằng: Từ ngày thứ 6 đến ngày thứ 10 tốc độ lan tơ rất đều đặn, đồng thời cũng nhận thấy rằng tơ nấm càng ngày càng dày thêm và có tổ chức chặt chẽ hơn, sợi bện chặt, có màu bông trắng.
Ở chai thứ hai tốc độ tăng trưởng nhanh hơn chai thứ nhất, đến ngày thứ 6 chai thứ nhất mới đạt 2,8 cm trong khi đó ở chai thứ hai đã đạt được 4,6 cm. Sở dĩ có sự sai khác này là do khi xử lý chuẩn bị môi trường có sự khác nhau, môi trường ở chai thứ hai được tạo độ ẩm khoảng 85 – 95%, cao hơn chai thứ nhất (65 – 75%). Kết quả này cho thấy sợi nấm Panus tenebrosus thích hợp phát triển ở độ ẩm cao 85 – 95%.
Từ ngày thứ 10 đến hết ngày thứ 12 quan sát thấy sự phát triển của tơ nấm ở cả hai chai đều tăng lên đạt tốc độ bình quân là ~1 cm/ngày.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 6 8 10 12 14 16 18 20 Thời gian (ngày) Đ ộ dài tơ n ấ m (cm) Chai 1 Chai 2
Từ ngày thứ 12 đến 14 tốc độ lan tơ tiếp tục tăng lên: Ở chai 1 đạt tốc độ trung bình 0,8 cm/ngày, ở chai hai là 0,85 cm/ngày, sợi nấm phát triển tốt, bện chặt, tơ nấm có màu trắng bông. Ở chai thứ hai đến hết ngày thứ 20 thì tơ nấm ăn kín hết bề mặt chai lúa. Ở chai thứ hai đến tận ngày thứ 23 tơ nấm mới ăn kín hết chai lúa.
Từ những kết quả thu được chúng tôi đi đến kết luận: Môi trường hạt lúa có bổ sung thêm cám gạo là môi trường thích hợp cho việc nhân giống nấm Panus tenebrosus. Thời gian nhân giống tương đối nhanh, hệ sợi nấm thích hợp phát triển trong môi trường hạt ở nhiệt độ thường (25 – 300C) và độ ẩm cao (85 – 95%). Chúng ta có thể sử dụng giống sau ngày thứ 14 (khi tốc độ phát triển của sợi nấm mạnh nhất và ổn định, đồng thời tổ chức của sợi nấm cũng kết cấu chặt chẽ, sợi nấm bện dày) để cấy vào các bịch cơ chất nuôi trồng ra quả thể.
3.2.4. KẾT QUẢ NUÔI TRỒNG THỬ NGHIỆM
Chúng tôi tiến hành nuôi trồng ra quả thể nấm tại Trang trại nấm Dona – Củ Chi – Tp Hồ Chí Minh.
3.2.4.1. Khảo sát sự phát triển của tơ nấm trên môi trường mùn cưa cao su.
Sau khi cấy giống vào các bịch cơ chất được đem ủ trong phòng tối hoặc có ánh sáng khuếch tán ở nhiệt độ phòng để cho tơ nấm phát triển mạnh, ăn ra đến bề mặt bịch thì ta bắt đầu đo tốc độ phát triển của hệ sợi nấm. Kết quả như sau:
0 5 10 15 20 25 25 28 30 32 34 36 38 40 42
Thời gian (ngày)
Độ dài tơ n
ấm (cm) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Độ dài tơ nấm
Hình 3.12. Đồ thị biểu diễn tốc độ lan tơ nấm Panus tenebrosus trên môi trường mùn cưa cao su
Nhận xét:
Những ngày đầu sợi nấm phát triển chậm và rất thưa, sợi nấm có màu trắng Đến ngày thứ 25 chúng tôi quan sát thấy tổ chức của sợi nấm kết cấu chặt chẽ hơn, sợi nấm bện dày hơn. Chúng tôi tiến hành đo tốc độ phát triển của hệ sợi nấm. Từ
Ngày thứ 28 Ngày thứ 34
Ngày thứ 40
ngày thứ 30 quan sát thấy hệ sợi nấm phát triển mạnh và đều, trung bình ~0,8 cm/ngày. Đến ngày thứ 43 thì sợi nấm đã lan kín bịch cơ chất.
Qua số liệu thực nghiệm thu được (bảng 3.3 và biểu đồ 3.3) chúng tôi đi đến kết luận: Hệ sợi nấm Panus tenebrosus thích hợp phát triển trên môi trường cơ chất tổng hợp mùn cưa cao su. Môi trường này có thể được sử dụng để nuôi trồng ra quả thể.
Hình 3.13. Hệ sợi nấm Panus tenebrosus phát triển trên môi trường cơ chất
3.2.4.2. Qúa trình chăm sóc và đặc điểm của quả thể nuôi trồng
Khi tơ nấm đã lan kín bịch cơ chất thì tiến hành chuyển bịch sang nhà nuôi trồng, rửa bịch và tháo nút bông. Nhà nuôi trồng có cường độ ánh sáng yếu, duy trì độ ẩm từ 80 – 95% bằng cách tưới phun sương. Tùy điều kiện thời tiết mà điều chỉnh số lần tưới cho phù hợp, ngày nắng thì tưới từ 3 – 4 lần/ ngày, ngày mưa tưới từ 1 – 2 lần/ ngày.
Trên môi trường cọng sắn sau 50 ngày từ khi cấy giống thì quả thể bắt đầu xuất hiện. Quả thể trên môi trường này có đặc điểm: Thân có hình trụ tròn có đường kính ~0,5 cm, dài từ 10 – 12 cm, thịt nấm xốp, đàn hồi. Phiến nấm phát triển đều tạo cho tán nấm có dạng hình phễu đặc trưng.
Trên môi trường hạt lúa quả thể dễ hình thành hơn, sau khi cấy giống vào chai cho đến ngày thứ 37 thì quả thể bắt đầu hình thành. Môi trường này có đầy đủ chất dinh dưỡng và vitamin cần thiết để cung cấp cho sự phát triển của nấm nên quả thể nấm trên môi trường này hình thành sớm và phát triển nhanh hơn trên môi trường cọng. Đường kính của thân nấm lớn hơn rất nhiều so với trên môi trường cọng trung bình khoảng 0,8 – 1,1 cm, chiều dài của thân từ 10 – 12 cm. Thịt nấm mềm hơn nấm ngoài tự nhiên và trên môi trường cọng. Phiến nấm phát triển hoàn chỉnh tạo cho tán nấm có hình phễu đặc trưng.
Trên môi trường cơ chất tổng hợp mùn cưa cao su quả thể chưa kịp hình thành có thể là do thời gian chưa đủ để sợi nấm phát triển thành quả thể, do chất dinh dưỡng ở môi trường này nghèo hơn và có nhiều khuẩn tạp nhiễm cạnh tranh môi trường sống làm giảm tốc độ phát triển (do chế độ hấp ở 100 – 1200C chưa tiêu diệt hết được những bào tử của các khuẩn tạp nhiễm). Quá trình chăm sóc và theo dõi sự hình thành quả thể trên môi trường này vẫn còn đang được tiếp tục thực hiện.
Như vậy, chúng tôi đã hoàn thành quy trình nuôi trồng cho loài nấm Panus tenebrosus, khảo sát sự lan tơ trên môi trường PGA, môi trường hạt và môi trường tổng hợp mùn cưa cao su. Đồng thời cũng khảo sát được sự hình thành quả thể nấm hoàn chỉnh trên môi trường hạt và trên môi trường cọng. Tạo được giống thuần
khiết nhằm bảo tồn nguồn gen của loài nấm Panus tenebrosus trên môi trường PGA và môi trường hạt tại phòng thí nghiệm Trung tâm Hạt nhân Tp Hồ Chí Minh.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN Kết luận
Qua quá trình nghiên cứu về nấm phễu lông chi Panus Fr chúng tôi đi đến những kết luận sau:
1 - Chúng tôi đã thu thập và mô tả được các mẫu vật nấm của các loài thường gặp thuộc chi Panus Fr. tại Vườn Quốc Gia Cát Tiên:
+ Panus rudis Fr. (1838)
+ Panus torulosus (Pers.: Fr.) Fr., Epicrisis: 397 (1838). + Panus fulvus var. fulvus
+ Panus fulvus var. similis + Panus fulvus var. nudicolum
2 - Phát hiện và mô tả một loài nấm phễu lông mới ở Việt Nam là Panus tenebrosus, có tính tương đồng cao với các loài khác trong chi Panus.
3 - Nấm Panus tenebrosus dễ dàng được phân lập trên môi trường PGA cải tiến. Khảo sát được sự phát triển của tơ nấm P. tenebrosus trên môi trường PGA, môi trường hạt lúa thông dụng và môi trường cơ chất tổng hợp (mùn cưa cao su và các chất bổ sung).
4 - Có thể nhân và giữ giống nấm Panus tenebrosus trên môi trường giống hạt có bổ sung cám gạo để phục vụ cho các thí nghiệm về sau và cho quá trình nuôi trồng cho sản xuất nếu có. Đồng thời qua quá trình thí nghiệm cho thấy môi trường này cũng có thể dùng để nuôi trồng ra quả thể dùng cho mục đích thí nghiệm, trên môi trường này thì quả thể phát triển tốt hơn so với trên môi trường cọng và ngoài tự nhiên.
5 - Khảo sát được sự hình thành và đặc điểm quả thể hoàn chỉnh trên môi trường hạt và môi trường cọng.
Đề xuất ý kiến
Từ kết quả của quá trình nghiên cứu về nấm Panus tenebrosus chúng tôi đưa ra những đề xuất sau:
1 - Tiếp tục nghiên cứu nuôi trồng nấm Panus tenebrosus trên môi trường cơ chất tổng hợp mùn cưa cao su để khảo sát quá trình hình thành và đặc điểm của quả thể.
2 - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố môi trường để tìm ra một quy trình nuôi trồng tối ưu cho loài nấm này. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3 - Nghiên cứu sâu về sinh học phân tử để khẳng định chính xác mối quan hệ của loài Panus tenebrosus cũng như các loài khác thuộc chi Panus với các chi khác như lentinus, polyporus, pleurotus...
4 - Nghiên cứu về thành phần hóa sinh học và các chất có hoạt tính sinh học, xác định giá trị của nấm Panus tenebrosus, có thể làm thực phẩm hay dược liệu không.
Để có thể đưa một loài nấm tự nhiên như loài Panus tenebrosus vào sản xuất còn đòi hỏi rất nhiều nghiên cứu về sau. Đó là một quá trình đòi hỏi mất nhiều thời gian, công sức và tiền của tuy nhiên cần thiết để góp phần bảo tồn nguồn gen nấm của nước ta. Và nếu có thể cung cấp thêm một loại nấm thực phẩm hay dược liệu mới cho ngành công nghệ nấm thì quả là một điều tuyệt vời.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Ngô Anh, 2004: Nghiên cứu thành phần loài Nấm lớn Thừa Thiên Huế. Luận án Tiến sĩ.
2. Lê Bá Dũng, 2003: Nấm lớn Tây nguyên. Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật.
3. Nguyễn Lân Dũng, 2002: Công nghệ trồng nấm. Tập 1. Nhà xuất bản Nông
nghiệp, Hà Nội.
4. Nguyễn Lân Dũng, 2005: Công nghệ trồng nấm. Tập 2. Nhà xuất bản Nông
nghiệp, Hà Nội.
5. Trịnh Tam Kiệt, 2001: Danh lục thực vật Việt nam. Phần Nấm. Prosea. Nhà xuất bản Nông nghiệp.
6. Trần Văn Mão, 1983: Nghiên cứu thành phần loài khu hệ nấm lớn vùng Thanh Nghệ Tĩnh. Luận án Tiến sĩ.
7. Trần Văn Mão et al., 2006: Nấm lớn Cúc phương. Nhà xuất bản Nông nghiệp.
Tài liệu tiếng Anh
8. Bobbitt TF and Crang RE 1974: Light effects on fruiting in Panus tigrinus
var. tigrinus. Canad. J. Bot. 255-257.
9. Corner E.J.H. 1981: The agaric genera Lentinus, Panus, and Pleurotus. Beihefte zur Nova Hedwigia 69: 1-169.
10. Faro S. 1972: Physiological aspects of pigment production in relation to morphogenesis in Panus tigrinus. Mycologia 64: 375-387.
11. Hagara L., Antonín V. & Baier J. 2000: Les Champignons. Grund, Paris.
12. Hibbett D.S. & Vilgalys R. 1993: Phylogenetic relationships of Lentinus
(Basidiomycotina) inferred from molecular and morphological characters. Syst. Bot. 18: 409-433.
13. Hibbett DS., Murakami S., and Tsuneda A. 1993: Sporocarp ontogeny in