Để phân lập giống nấm trước tiên chúng ta phải chuẩn bị môi trường phân lập. Môi trường phân lập giống mà chúng tôi sử dụng trong nghiên cứu này là môi trường PGA cải tiến được thực hiện như sau:
Môi trường PGA (*): - Agar 15 – 20 g/l - Glucose 20 g/l - Cao nấm men 1 – 2 g/l - Khoai tây 200 g - Cà rốt 100 g - Giá đỗ 100 g
Khoai tây, cà rốt gọt vỏ, cắt lát và giá đỗ được rửa sạch cho vào nồi đun sôi khoảng 15 – 20 phút, chiết lấy dịch (1 lít). Sau đó cho agar, glucose và cao nấm men theo tỉ lệ trên. Đun sôi rồi rót vào các ống nghiệm, khoảng ¼ ống nghiệm. Đậy nút bông, đem hấp khử trùng ở nhiệt độ 1210C, P = 1at. Sau khoảng 25 phút lấy ra để nguội tạo thạch nghiêng.
Tách phân lập giống: Mẫu nấm thu được, tách giống bằng kỹ thuật cấy mô sinh dưỡng từ mô thể quả non tươi trên môi trường PGA thông dụng (*) (Lê Xuân Thám, 2005).
Cách phân lập giống: Nấm thu hái từ tự nhiên về nên được phân lập ngay, nếu không phải được cất trong tủ lạnh đề phòng hư hỏng. Quá trình phân lập giống được mô tả như sau:
- Đầu tiên rửa sạch mẫu nấm bằng nước sạch nhiều lần, sau đó lau qua bằng cồn 70o trước khi cho mẫu phân lập vào tủ cấy vô trùng.
- Dùng dao mổ (đã được khử trùng qua đèn cồn và để nguội) tách lấy phần mô thịt nấm ở những phần kín bên trong thân nấm – nơi ít tiếp xúc với vi khuẩn và nấm mốc, sau đó đưa mẫu vào môi trường thạch.
- Quan sát các mẫu không bị nhiễm và có sợi nấm bung ra để sử dụng làm giống cho nghiên cứu.
2.4.2. Thuần khiết giống bảo tồn và khảo sát tốc độ lan tơ, đặc điểm của tơ
nấm trên môi trường thạch
