2.2.1. Sơ ựồ nội dung nghiên cứu
Hình 2.1: Sơ ựồ khối nội dung nghiên cứu.
2.2.2. Nguồn cá thắ nghiệm
Ấu trùng cá khoang cổ cam có nguồn gốc từ sinh sản nhân tạo, ựược chuyển sang hệ thống bể thắ nghiệm ngay sau khi nở (0 ngày tuổi). Ấu trùng cá khỏe mạnh, kắch thước ựồng ựều, không bị dị hình, bơi lội nhiều hướng lên phắa mặt nước.
2.2.3. Nguồn nước và hệ thống bể thắ nghiệm
- Nguồn nước: lấy trực tiếp từ biển, sau khi lọc thô ựể loại bỏ cặn bẩn sẽ ựi vào bể chứa. Trước khi ựược sử dụng, nước ựược ựi qua hệ thống khử trùng bằng tia cực tắm.
Cá khoang cổ cam mới nở (0 ngày tuổi)
Thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn từ luân
trùng sang Artemia. (Cá 30 ngày tuổi)
Thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn từ Artemia
sang thức ăn tổng hợp. (Cá 45 ngày tuổi)
Thu thập và xử lý số liệu
Kết luận và ựề xuất ý kiến
- Hệ thống bể gồm:
Bể ấp nở: sử dụng hệ thống nước hở, gồm các bể kắnh có kắch thước 60 x 40 x 40 cm, với thể tắch 30L. Sục khắ 24/24 giờ.
Hệ thống bể thắ nghiệm: kắch thước bể là 20 x 20 x 30 cm với thể tắch 10L. Sục khắ 24/24 giờ (Hình 2.2)
Hình 2.2: Hệ thống bể thắ nghiệm.
2.2.4. Nguồn thức ăn sống 2.2.4.1. Nuôi vi tảo 2.2.4.1. Nuôi vi tảo
- Nguồn giống: 3 loại tảo Nannochloropsis oculata, Isochrysis galbana và
Tetraselmis sp. ựược thu thập từ các ựĩa thạch tại phòng lưu giữ giống tảo của Viện
Khoa học Biển Ờ đại học Burapha Ờ Thái Lan.
- Môi trường nuôi tảo: môi trường GuillardỖs F/2.
- Phương pháp nuôi: nuôi sinh khối tảo trong các bình thủy tinh 2 lắt trong phòng lạnh ở ựiều kiện vô trùng. Sục khắ 24/24 giờ, sử dụng ánh sáng nhân tạo của ựèn nê ông (5000 lux) với chế ựộ chiếu sáng 14/24 giờ (Hình 2.3)
Các yếu tố môi trường nước nuôi: pH: 7,80; nhiệt ựộ phòng 25oC; ựộ mặn 29Ẹ. Thời gian thu hoạch tảo sau 3-4 ngày khi mật ựộ tảo ựạt cực ựại ở pha sinh trưởng logarit (exponential phase).
Hình 2.3: Nuôi vi tảo.
2.2.4.2. Nuôi sinh khối luân trùng (Brachionus plicatilis)
- Nguồn giống: Giống luân trùng (Brachionus plicatilis) dòng kắch thước lớn ựược thu thập tại trại sản xuất của Viện Khoa học Biển.
- Phương pháp nuôi: Nuôi sinh khối luân trùng ngoài trời trong bể composit 200L theo phương pháp thu hoạch bán liên tục (Hình 2.4).
2.2.4.3. Ấp nở ấu trùng (nauplii) của Artemia
Trứng Artemia ựược cho ấp nở trong bể composit 100L, với sục khắ mạnh từ dưới ựáy lên ựể duy trì nồng ựộ oxy hòa tan 5mg/L liên tục trong suốt quá trình ấp. Loại bỏ vỏ và làm sạch Artemia mới nở sau 24 giờ ấp nở.
2.2.5. Nguồn thức ăn tổng hợp
Sử dụng loại thức ăn ựược sản xuất tại Viện với thành phần nguyên liệu, công thức thức ăn và hàm lượng dinh dưỡng ựược trình bày cụ thể trong Bảng 2.1.
Sau khi phối trộn các thành phần theo công thức, thức ăn sẽ ựược tạo thành viên với kắch thước từ 200-300ộm (chiều rộng) và ựược giữ ở 0oC.
Bảng 2.1: Thành phần nguyên liệu, hàm lượng dinh dưỡng và công thức thức ăn sử dụng cho thắ nghiệm chuyển ựổi từ Artemia sang thức ăn tổng hợp
Thành phần nguyên liệu Công thức thức ăn
(g/100g) Hàm lượng dinh dưỡng Bột cá Cyclop-eez Spirulina Men bánh mì Bột gạo Dầu cá Vitamin C Chất khoáng tổng hợp Vitamin tổng hợp Gluten lúa mì 59 2 3 2 20,75 6,2 0,05 1 1 5 Protein Lipid Chất xơ Chất tro Carbohydrate độ ẩm 55% 15% 0,03% 4,57% 24,5% 3,48%
2.2.6. Thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn từ luân trùng sang Artemia lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang cổ cam giai ựoạn mới nở ựến 30 ngày tuổi
- Ấu trùng cá khoang cổ cam mới nở (0 ngày tuổi) ựược chia ngẫu nhiên làm 5 nghiệm thức với 3 lần lặp, nuôi trong hệ thống nước hở gồm các bể kắnh có thể tắch 10L, 30 cá thể/bể. Thắ nghiệm kết thúc khi ấu trùng ựạt 30 ngày tuổi.
- Thời gian chuyển ựổi giữa 2 loại thức ăn từ luân trùng sang Artemia kéo dài trong 2 ngày kể từ ngày bắt ựầu sử dụng Artemia. Tỉ lệ phần trăm ựể chuyển ựổi ựược trình bày trong Bảng 2.2.
- để tắnh toán mật ựộ của Artemia và luân trùng trong 2 ngày chuyển ựổi từ phần trăm trong bảng 2.2, tác giả dựa trên 2 cơ sở:
Ớ Mật ựộ luân trùng sử dụng cho các lô thắ nghiệm là: 20 con/mL Ớ 1 con Artemia tương ựương với 10 con luân trùng về thể tắch [48].
Bảng 2.2: Tỉ lệ phần trăm chuyển ựổi giữa luân trùng và Artemia
Luân trùng Artemia
Ngày thứ 1 67% 33%
Ngày thứ 2 33% 67%
Ngày thứ 3 0% 100%
Thời ựiểm chuyển ựổi từ luân trùng sang Artemia
Cá 30 ngày tuổi
Hình 2.5: Sơ ựồ bố trắ thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi từ luân trùng sang Artemia lên tăng trưởng và tỉ lệ sống của ấu trùng.
Ấu trùng mới nở (0 ngày tuổi) 30 con/bể
Xác ựịnh tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống
Thu thập và xử lý số liệu
Kết luận
5 ngày tuổi 7 ngày tuổi 9 ngày tuổi 11 ngày tuổi 13 ngày tuổi (ựối chứng)
2.2.7. Thắ nghiệm ảnh hưởng của việc chuyển ựổi thức ăn từ Artemia sang thức ăn tổng hợp lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang cổ thức ăn tổng hợp lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang cổ cam giai ựoạn mới nở ựến 45 ngày tuổi
Thời ựiểm chuyển ựổi từ Artemia sang thức ăn tổng hợp
Cá 45 ngày tuổi
Hình 2.6: Sơ ựồ bố trắ thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi từ Artemia sang thức ăn tổng hợp lên tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng.
- Ấu trùng cá khoang cổ cam mới nở (0 ngày tuổi) ựược chia ngẫu nhiên làm 5 nghiệm thức với 3 lần lặp, nuôi trong hệ thống nước hở gồm các bể kắnh có thể tắch 10L, 30 con/bể.
- Thời gian chuyển ựổi giữa 2 loại thức ăn từ Artemia sang thức ăn tổng hợp kéo dài trong 3 ngày kể từ ngày bắt ựầu sử dụng Artemia. Tỉ lệ phần trăm ựể chuyển ựổi ựược trình bày trong Bảng 2.3.
- để so sánh tương quan về khối lượng giữa Artemia (thức ăn sống) với 1 gam thức ăn tổng hợp phục vụ cho bảng 2 trong 3 ngày chuyển ựổi thức ăn, khối lượng khô của Artemia mới nở (giai ựoạn Instar I) cần ựược xác ựịnh sử dụng máy Freeze Drier, cụ thể là: 1 gam khối lượng khô của Artemia tương ựương với 331.000 con Artemia còn sống.
Ấu trùng mới nở (0 ngày tuổi) 30 con/bể
14 ngày tuổi
Kết luận
Xác ựịnh tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống
Thu thập và xử lý số liệu
18 ngày tuổi 22 ngày tuổi 26 ngày tuổi 30 ngày tuổi (ựối chứng)
Bảng 2.3: Tỉ lệ phần trăm chuyển ựổi giữa Artemia và thức ăn tổng hợp Artemia Thức ăn tổng hợp Ngày 1 75% 25% Ngày 2 50% 50% Ngày 3 25% 75% Ngày 4 0% 100%
2.3. Chăm sóc và quản lý cá trong các thắ nghiệm 2.3.1. Quản lý các thông số môi trường 2.3.1. Quản lý các thông số môi trường
Hằng ngày xi-phông thay 30 - 50% lượng nước mới, các yếu tố môi trường như nhiệt ựộ, pH, oxy hoà tan, NH3+ và NO2- ựược duy trì ổn ựịnh trong suốt quá trình thắ nghiệm. Kiểm tra tỷ lệ sống và quan sát tình trạng sức khoẻ của cá .
2.3.2. Chế ựộ cho ăn
- Trước khi bố trắ thắ nghiệm, nguồn thức ăn sống gồm luân trùng (mật ựộ 20 con/ml), bổ sung 2 loại vi tảo Isochrysis galbana (50.000 tế bào/ml) và
Nannochloropsis oculata (50.000 tế bào/ml) theo tỉ lệ 1:1 ựược chuẩn bị sẵn ở tất cả
các lô thắ nghiệm. Mật ựộ Artemia khi sử dụng là 2 con/ml.
- Ở thắ nghiệm 2, từ ngày thứ 0 ựến ngày thứ 6 cho ăn toàn bộ luân trùng. đến ngày thứ 7 (thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn tối ưu từ kết quả của thắ nghiệm 1) bắt ựầu chuyển ựổi sang Artemia theo Bảng 2.3.
- Chế ựộ cho ăn ở 2 tuần ựầu tiên là 2 lần 1 ngày (9.00 và 15.00). Sau 2 tuần, chế ựộ cho ăn tăng thêm 1 lần vào lúc 12.00 ựể ựáp ứng nhu cầu ngày càng cao của ấu trùng.
- Trước khi cho ăn, số lượng luân trùng và Artemia còn lại của lần ăn trước ựược ựếm dưới kắnh hiển vi.
2.4. Phương pháp thu thập và xử lý số liệu
2.4.1. Các thông số môi trường trong hệ thống nuôi
Các yếu tố môi trường trong các hệ thống nuôi ựược ựo ựạc hàng ngày vào buổi sáng và chiều.
- Nhiệt ựộ và pH: ựo bằng thiết bị cầm tay pH ISE meter (HACH, sensION6), ựộ chắnh xác 1oC.
- độ muối: ựo bằng khúc xạ kế (Atago model S/Mill-E), ựộ chắnh xác 1Ẹ
- Hàm lượng nitrite và ammonia: xác ựịnh bằng Nitrit Ờ Test (Aqua Nite) và Ammonium Ờ Test (Aqua AM) sản xuất tại Thái Lan.
- Hàm lượng oxy hòa tan: sử dụng máy ựo DO (HACH, sensION6).
- Ammonia tổng số (TAN): ựược xác ựịnh bằng phương pháp phenolhypochlorite (Solórzano, 1969). Soi màu bằng thiết bị ựo ảnh phổ (Spectrophotometer) Hach DR/2000.
- Nitrite (NO2-N): ựược xác ựịnh bằng phương pháp nhuộm Azo (Strickland và Parsons, 1977). Kỹ thuật soi màu như trên.
2.4.2. Xác ựịnh tốc ựộ tăng trưởng
- Chỉ tiêu về chiều dài chuẩn (SL): là chiều dài ựược ựo từ mõm cá ựến gốc vây ựuôi.
- Tốc ựộ sinh trưởng ựặc trưng về chiều dài chuẩn (SGRSL): xác ựịnh theo công thức:
Trong ựó: SGRSL: tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng về chiều dài chuẩn (% ngày).
L1: chiều dài chuẩn của cá ở thời ựiểm t1 (mm). L2: chiều dài chuẩn của cá ở thời ựiểm t2 (mm). Cá ựược ựo bằng thước có ựộ chắnh xác 1mm.
- Chỉ tiêu về khối lượng: là khối lượng của cá ở thời ựiểm kết thúc thắ nghiệm - Tốc ựộ sinh trưởng ựặc trưng về khối lượng: xác ựịnh theo công thức
Trong ựó: SGRw: tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng về khối lượng (% ngày) W1: khối lượng cá ở thời ựiểm t1 (mg).
W2: khối lượng cá ở thời ựiểm t2 (mg). Cá ựược cân bằng cân ựiện tử có ựộ chắnh xác 0,01g.
100 SGR 1 2 1 2 SL x t t LnL LnL − − = 100 SGR 1 2 1 2 w x t t LnW LnW − − =
Phương pháp lấy mẫu cá: gây mê cá bằng dung dịch hóa chất MS-222 10% và dùng giấy thấm ựể loại bỏ hết nước trước khi cân, ựo.
2.4.3. Xác ựịnh tỷ lệ sống của cá
Tỷ lệ sống ựược xác ựịnh theo công thức sau:
S =
Sự Scx 100
Trong ựó S: Tỷ lệ sống của cá (%).
Sc: Số cá còn lại khi kết thúc thắ nghiệm (con). Sự: Số cá ban ựầu (con).
Tỷ lệ sống của cá ựược xác ựịnh bằng phương pháp ựếm trực tiếp
2.4.4. Phương pháp xử lắ số liệu
Số liệu thu thập ựược xử lý trên phần mềm MS Excel và SPSS 15.0 for window. Sử dụng phân tắch phương sai một yếu tố (one-way ANOVA) ựể ựánh giá ảnh hưởng của các thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn khác nhau lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang cổ cam. So sánh sự sai khác của các giá trị trung bình sau phân tắch phương sai (Post Hoc Test) bằng phương pháp kiểm ựịnh Duncan với ựộ tin cậy 95%.
CHƯƠNG 3 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Thắ nghiệm ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn từ luân trùng sang Artemia lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang trùng sang Artemia lên tốc ựộ tăng trưởng và tỷ lệ sống của ấu trùng cá khoang cổ cam giai ựoạn mới nở ựến 30 ngày tuổi
3.1.1 Một số yếu tố môi trường trong hệ thống bể thắ nghiệm
Các giá trị môi trường của hệ thống nuôi dao ựộng trong suốt thời gian thắ nghiệm ựược trình bày ở Bảng 3.1.
Bảng 3.1: Một số yếu tố môi trường trong hệ thống bể nuôi Nhiệt ựộ (oC) pH độ mặn Ẹ NH3+ (mg/l) NO2- (mg/l)
Oxy hoà tan (mg/l) 30 Ờ 31 8,1 Ờ 8,3 30 - 32 0 Ờ 0,01 0 Ờ 0,1 5 Ờ 6
Trong quá trình thắ nghiệm, hằng ngày các bể nuôi ựược xi phông, thay nước và vệ sinh nên lượng nước trong bể thường xuyên ựược bổ sung nước mới. Vì vậy, các yếu tố nhiệt ựộ, pH, ựộ mặn luôn luôn thay ựổi. Tuy nhiên, sự dao ựộng của pH và nhiệt ựộ không lớn. pH dao ựộng từ 8,1 Ờ 8,3, nhiệt ựộ dao ựộng từ 30 Ờ 31oC. Hàm lượng oxy hoà tan không có sự dao ựộng lớn, duy trì ở mức 5 Ờ 6 mg/l.
Các chỉ tiêu này tương tự nhau ở tất cả các lô thắ nghiệm do chế ựộ chăm sóc hằng ngày của các lô như nhau. Các yếu tố môi trường trong các bể nuôi tương ựối ổn ựịnh, nằm trong giới hạn thắch hợp cho sự sinh trưởng cá khoang cổ [8, 48, 101, 104]. Trong suốt quá trình nuôi, không có những biến ựộng ựáng kể có thể gây ảnh hưởng ựến kết quả thắ nghiệm.
3.1.2. Ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn khác nhau ựến tăng trưởng của ấu trùng cá khoang cổ cam. trưởng của ấu trùng cá khoang cổ cam.
3.1.2.1. Chỉ tiêu về chiều dài
Ấu trùng với chiều dài ban ựầu là 3,250 ổ 0,189mm, sau 30 ngày ương ựạt chiều dài trung bình: 9,93 ổ 0,24mm.
Kết quả nghiên cứu cho thấy thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn ảnh hưởng rõ rệt lên chiều dài của ấu trùng cá khoang cổ cam (Hình 3.1). Trong ựó, ấu trùng ựược cho ăn Artemia vào ngày thứ 7 cho chiều dài trung bình cao nhất (10,47 ổ 0,23mm) và khác biệt có ý nghĩa (P<0,05) so với thời ựiểm cho ăn ở các ngày thứ 9, 11 và 13 (lần lượt
là 9,86 ổ 0,07; 9,47 ổ 0,13 và 8,85 ổ 0,56 mm). Tuy nhiên, không có sự khác biệt về chiều dài của ấu trùng khi cho ăn vào ngày thứ 5 và 7.
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 5 NT 7 NT 9 NT 11 NT 13 NT
NGÀY BẮT đẦU CHUYỂN đỔI
C H IỀ U D À I C H U Ẩ N ( m m )
Hình 3.1: Ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn lên chiều dài của ấu trùng.
*
Các chữ cái khác nhau trên ựầu các cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa (P < 0,05).
3.1.2.2. Khối lượng 0.01 0.025 0.04 0.055 0.07 0.085 5 NT 7 NT 9 NT 11 NT 13 NT
NGÀY BẮT đẦU CHUYỂN đỔI
K H Ố I L Ư Ợ N G ( g )
Hình 3.2: Ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn lên khối lượng của ấu trùng.
*
Các chữ cái khác nhau trên ựầu các cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa (P < 0,05).
bc c ab a ab a a a ab b
Ấu trùng với khối lượng ban ựầu là 0,00083 ổ 0,00001g, sau 30 ngày ương ựạt trung bình: 0,044 ổ 0,003g.
Kết quả theo dõi (Hình 3.2) cho thấy: khối lượng của cá sau 30 ngày ương ở các nghiệm thức có xu hướng tương tự với chỉ tiêu về chiều dài, cụ thể là khối lượng trung bình của ấu trùng ựược cho ăn Artemia ựạt cao nhất vào ngày thứ 7 (0,067 ổ 0,006g), giảm dần và ựạt thấp nhất ở ngày thứ 13 (0,044 ổ 0,006g), tuy nhiên không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa nghiệm thức cho ăn ngày thứ 7 và 9.
3.1.2.3. Tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng
Ớ Tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng về chiều dài chuẩn (SGRSL)
Tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng về chiều dài của cá 30 ngày tuổi ựạt trung bình 3,71 ổ 0,08 %/ngày. Kết quả nghiên cứu (Hình 3.3) cho thấy ảnh hưởng ựáng kể của các thời ựiểm cho ăn Artemia khác nhau lên tăng trưởng ựặc trưng về chiều dài của ấu trùng. Ấu trùng cho ăn Artemia vào ngày thứ 7 cho tăng trưởng ựặc trưng cao nhất (4,07 ổ 0,07 %/ngày) và khác biệt có ý nghĩa so với ngày thứ 11 (3,56 ổ 0,05 %/ngày) và ngày thứ 13 (3,33ổ0,21 %/ngày) nhưng không khác biệt (P<0,05) so với ngày thứ 5 (3,89 ổ 0,11 %/ngày) và ngày thứ 9 (3,7 ổ 0,02 %/ngày).
0 1 2 3 4 5 5 NT 7 NT 9 NT 11 NT 13 NT
NGÀY BẮT đẦU CHUYỂN đỔI
S G RS L (% /n g à y )
Hình 3.3. Ảnh hưởng của thời ựiểm chuyển ựổi thức ăn lên tốc ựộ tăng trưởng ựặc trưng về chiều dài của ấu trùng.
*
Các chữ cái khác nhau trên ựầu các cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa (P < 0,05)