e. Ảnh hưởng của nồng độ muối NaCl
3.2.4.Ảnh hưởng của tỷ lệ giống và thời gian nhân giống
Trong quá trình lên men của chủng xạ khuẩn HP411, tỷ lệ tiếp giống có ảnh hưởng mạnh đến quá trình sinh trưởng và sinh tổng hợp chất kháng khuẩn.
Bảng 3.12.Ảnh hưởng của tỉ lệ tiếp giống tới hoạt tính kháng khuẩn của HP411
Tỷ lệ giống (%) 2 3 4 5 6
ĐKVVK(D-d, mm) 14± 0,1 14± 0,1 19± 0,1 24± 0,1 21± 0,1 Với lượng giống cấy vào môi trường lên men < 3%, chủng HP411 sinh trưởng và hoạt tính kháng khuẩn thấp hơn so với khi lên men có lượng giống bổ sung là 4, 5 và 6 (%). Hoạt tính kháng khuẩn thu được cao nhất khi lượng giống tiếp vào là 5 (%) tương ứng với vòng vô khuẩn thu được đối với chủng B. subtilis ATCC 6630 là
kém hơn, do giống cần có thời gian dài hơn để thích nghi với môi trường trước khi sinh chất kháng khuẩn, do vậy thời gian lên men sẽ kéo dài mà không đạt được hiệu quả như mong muốn. Khi chuyển giống vào môi trường lên men với tỷ lệ cao hơn 5%, hoạt tính kháng khuẩn giảm đi, vì lượng giống đưa vào môi trường lên men quá nhiều sẽ tiêu hao nguồn dinh dưỡng nhanh chóng dẫn tới thiếu dinh dưỡng cho quá trình tạo sản phẩm về sau.
Bên cạnh xác định tỷ lệ giống thích hợp, chúng tôi cũng nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian nhân giống đến quá trình sinh tổng hợp chất kháng khuẩn của các chủng xạ khuẩn. Thí nghiệm được tiến hành trong bình tam giác bổ sung giống tương ứng với độ tuổi từ 36 đến 72 giờ.
Bảng 3.13. Ảnh hưởng của thời gian nhân giống đến khả năng sinh tổng hợp chất kháng khuẩn của chủng HP411
Thời gian nhân giống (giờ) 36 48 60 72
ĐKVVK(D-d, mm) 14± 0,1 24± 0,1 23± 0,1 13± 0,1 Kết quả ở bảng trên cho thấy, thời gian nhân giống thích hợp là 48-60 giờ, nếu ngắn hơn hoặc dài hơn sẽ ảnh hưởng đến sự tổng hợp chất kháng khuẩn. Trước 48 giờ, sinh khối tạo thành chưa nhiều, xạ khuẩn vừa qua giai đoạn thích nghi với môi trường. Nếu chuyển vào bình lên men thì giống phải mất một khoảng thời gian để thích nghi, bên cạnh đó lượng sinh khối quá ít có thể làm giảm hiệu suất lên men. Sau 60 giờ nuôi cấy, các tế bào xạ khuẩn đã phát triển qua pha logarit và bắt đầu pha cân bằng. Khi chuyển vào môi trường lên men, giống sẽ không phát triển mạnh, vì thế tích lũy sinh khối và kháng sinh sẽ kém. Giống ở giai đoạn 48-60 giờ đã phát triển và tạo sinh khối nhiều, sinh khối khô đạt khoảng 3,0-5,0 mg/ml tương đương 18-20 mg/ml sinh khối ướt. Khi chuyển sang môi trường lên men, giống sẽ tiếp tục phát triển mạnh, tạo điều kiện cho tổng hợp chất kháng khuẩn tốt.