e. Ảnh hưởng của nồng độ muối NaCl
3.3.2.Lựa chọn dung môi tách chiết chất kháng khuẩn.
Các chất kháng khuẩn do xạ khuẩn sinh tổng hợp có thể được tiết ra môi trường nuôi cấy hoặc nằm trong sinh khối tế bào. Nếu chất kháng sinh được tiết ra môi trường lên men thì nồng độ thường thấp, dịch môi trường có nhiều tạp chất, nên khi tiến hành chiết xuất và làm tinh khiết phải trải qua nhiều giai đoạn phức tạp. Việc lựa chọn dung môi để tách chiết chất kháng sinh sau khi nuôi cấy xạ khuẩn là điều rất cần thiết để có thể thu được lượng kháng sinh lớn nhất và vẫn giữ được hoạt tính cao.
Xạ khuẩn sau khi lên men được tách riêng sinh khối và dịch lên men. Một số dung môi thường được sử dụng trong tách chiết chất kháng sinh như n-Butanol, ethyl acetate ..., được bổ sung vào dịch lên men và sinh khối. Kết quả kiểm tra hoạt tính khoanh giấy lọc với VSV kiểm định là B.subtilis ATCC 6633, nhận thấy chất kháng khuẩn do chủng xạ khuẩn HP411 sinh ra đều được chiết vào các hệ dung môi đã thử, tuy nhiên với hàm lượng khác nhau rất nhiều.
Bảng 3.18. Hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết từ dịch lên men chủng HP411 bằng các dung môi khác nhau
Các dung môi dùng để tách chiết Hoạt tính kháng khuẩn (ĐKVVK, mm)
Chlorofrom (1:1) 6 ± 0,1
n-Butanol (1:1) 10 ± 0,1
Chlorofrom: Methanol (1:1) 10± 0,1 Chlorofrom: Methanol (2:1) 6,5 ± 0,1
2-Butlnol (1:1) 9± 0,1 n-Butanol : acetic : Nước(2:1:1) 10 ± 0,1
Butyl acetate (1:1) 12± 0,1
Ethyl acetate (1:1) 15± 0,1
Methanol (1:1) -
Chlorofrom (1:1) n-Butanol (1:1) Chlorofrom: Methanol (1:1) Chlorofrom: Methanol (2:1) 2-Butlnol (1:1) n-Butanol : acetic : Nước(2:1:1)
Butyl acetate (1:1) Ethyl acetate (1:1) Methanol (1:1)
Hình 3.13. Hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết thô HP411với các dung môi
khuẩn trong dịch lên men đã được chiết sang ethyl acetat hết. Ngoài ra khi cô đặc chân không ở nhiệt độ < 600C để loại bỏ ethyl acetate thì chất này bay hơi rất nhanh. Điều này rất thuận lợi cho quá trình tinh chế tiếp theo và ethyl acetate được chọn làm dung môi tách chiết chất kháng khuẩn từ chủng HP411.