2.3.2.1. Mổ cá và lấy mẫu sinh học
Các mẫu cá được vận chuyển về phòng thí nghiệm sau đó phải được gây mê trước khi mổ. Đồng thời tiến hành đo các chỉ số cân nặng, chiều dài, bề rộng của cá. Tiến hành mổ cá để thu các mẫu mang, gan, thận và cơ thịt của cá (hình 2.2).
Dùng giấy thấm khô phần máu và nước đọng lại trên nội quan cá. Các mẫu mang, gan, thận được cắt nhỏ và chia thành từng phần khoảng 100 mg và đựng trong
29
các ống eppendorf. Với mẫu cơ, dùng kéo cắt bỏ một phần da ở đuôi cá, cắt lấy phần cơ thịt cá, cắt nhỏ và đựng trong các ống eppendorf. Các ống eppendorf đựng mẫu cá sau đó được bảo quản ở nhiệt độ -20ºC hoặc -80°C chờ phân tích.
Hình 2.2. Nội quan cá xương (Ảnh: John Cimbaro, FWC)
2.3.2.2. Vô cơ hóa mẫu: mẫu nước, mẫu bùn đáy và mẫu mô sinh học
* Mẫu đất
Mẫu đất có thể được sấy khô ở 70°C hoặc phơi khô dưới ánh sáng mặt trời. Mẫu đất phải được nghiền nhỏ bằng cối và chày sứ, sàng quá lưới 20 (0,85 mm mắt lưới) và cất vào 1 lọ nhựa sạch.
Để phân tích KLN tổng số trong đất, cân khoảng 100-150 mg mẫu đất vào ống nghiệm đã cân bì. Thêm 4 ml HNO3 65%vào mỗi mẫu đất khô (200 mg), lắc đều, để yên khoảng 30 phút sau đó thêm 1,5 ml HF 40%và 1 ml HCl 30% (v/v: 4:1:1). Để các ống mẫu mở trên giá ống nghiệm bằng inox ở nhiệt độ phòng trong vòng 24 h (trong tủ hút khí độc), sau đó cho thêm 500 µl H2O2 vào mỗi ống mẫu (chú ý cho từ từ để tránh bị trào bọt ra ngoài do phản ứng ô-xi-hoá mạnh) và để ở nhiệt độ phòng 5 giờ trước khi phá mẫu. Đặt giá ống nghiệm với các ống mẫu mở vào hộp phá mẫu (bio-carrier) và
30
khoá hộp lại cẩn thận trước khi đặt vào tủ sấy ở 40°C trong vòng 1 giờ và sau đó tăng lên 140°C trong 4 giờ tới khi mẫu được vô cơ hoá hoàn toàn (mẫu trong, không có bọt khí màu nâu). Sau đó mẫu vô cơ hoá sẽ được làm nguội xuống nhiệt độ phòng trong tủ hút khí độc, và sẽ được pha loãng với nước cất đến 10 ml. Lọc mẫu bằng màng lọc xen-lu-lô 0,45 µm (cellulose filter) gắn với xi lanh 20 ml. Mẫu sau đó sẽ được cất ổn định ở 4°C trong vòng 2 tháng hoặc ở -20°C trong vòng 6 tháng đến khi hàm lượng KLN được xác định bằng máy ICP-MS.
* Mẫu nước
Nước lấy từ các điểm thu mẫu được đựng trong lọ nhựa polyethylene và được bảo quản bằng 2 ml HNO3 đậm đặc/1 L mẫu.
Để phân tích KLN tổng số, chuyển 50 ml mẫu đã được axit hóa tại hiện trường sang bình tam giác. Thêm vào đó 2,5 ml HCl 30% loại tinh khiết. Mẫu đã được axit hóa sẽ được đặt trong tủ sấy ở 100ºC trong vòng 1 - 2 giờ đến khi được vô cơ hóa hoàn toàn. Cuối cùng, sử dụng màng lọc xen-lu-lô gắn với xi-lanh để lọc mẫu (điều chỉnh thể tích mẫu đến 50 ml bằng nước cất trước khi lọc). Mẫu đã vô cơ hóa được đem đi phân tích hoặc bảo quản ở 4ºC cho đến khi phân tích (trong 60 ngày).
* Mẫu sinh học
Lấy khoảng 20 - 100 mg w.wt của mẫu mô cho vào ống thuỷ tinh đựng mẫu đã chuẩn bị trước. Thêm 2 ml HNO3 65% và 0,5 ml HCL 30% (v/v: 4:1) vào mỗi mẫu mô khoảng 20 - 100 mg w.w. Để các ống mẫu mở trên giá ống nghiệm bằng inox ở nhiệt độ phòng trong vòng 24 giờ (trong tủ hút khí độc), sau đó cho thêm 200 µl H2O2vào mỗi ống mẫu và để trong ở nhiệt độ phòng 5 giờ trước khi phá mẫu. Đặt giá ống nghiệm với các ống mẫu mở vào hộp phá mẫu (bio-carrier) và khoá hộp lại cẩn thận trước khi đặt vào tủ sấy ở 40°C trong vòng 1 giờ và sau đó tăng lên 120°C trong 3 giờ tới khi mẫu được vô cơ hoá hoàn toàn (mẫu trong, không có bọt khí). Sau đó mẫu vô cơ hoá sẽ được làm nguội xuống nhiệt độ phòng trong tủ hút khí độc, và sẽ được
31
pha loãng với nước cất đến 10 ml. Lọc mẫu bằng màng lọc xen-lu-lô 0,45 µm (cellulose filter) gắn với xi lanh 10 ml. Mẫu sau đó sẽ được cất ổn định ở 4°C trong vòng 2 tháng hoặc ở -20°C trong vòng 6 tháng đến khi đo hàm lượng KLN bằng máy ICP-MS.