2.3.1. Các bước tiến hành: 2.3.1.1. Khám lâm sàng: Hỏi bệnh: - Tiền sử cá nhân: + Tiền sử sản khoa. + Tiền sử dị ứng: Chàm . Viêm mũi dị ứng
Mày đay và các bệnh dị ứng khác
- Tiền sử gia đình: Ông bà, bố mẹ, anh chị em bị hen phế quản, VMDƯ.
- Dấu hiệu khò khè cò cử:
+ Từ trước đến nay có biểu hiện khò khè.
+ Trong 12 tháng qua có bao nhiêu lần khò khè.
Khám lâm sàng, thu thập dữ liệu theo mẫu bệnh án -Khò khè
- Tinh thần - Ho
- Sốt - Tím tái
- Co kéo cơ hô hấp - SaO2
- Chiều cao - Cân nặng - Nhịp thở - Mạch
- Nghe phổi: ran ẩm nhỏ hạt Ran ẩm to hạt Ran rít ran ngáy
- Sau đó xếp loại mức độ nặng nhẹ của cơn hen theo GINA 2009.
2.3.1.2. Lấy bệnh phẩm xét nghiệm:
- Được thực hiện theo qui trình của Bệnh viện Bạch Mai. Kết quả được thẩm định theo tiêu chuẩn quốc tế và ghi theo mẫu bệnh án nghiên cứu.
- Kỹ thuật lấy dịch tỵ hầu:
+ Thời gian lấy bệnh phẩm: buổi sáng sớm sau khi trẻ dậy khi chưa làm vệ sinh mũi miệng.
+ Tư thế bệnh nhân ngồi đầu được giữ ở tư thế thẳng. + Dùng sonde hút cỡ 6 – 8.
từ cánh mũi đến dái tai của trẻ.
+ Dùng bơm tiêm 5ml hút khoảng 1ml dịch tỵ hầu.
+ Cắt đầu ống sonde có chứa dịch tỵ hầu cho vào ống xét nghiệm vô khuẩn của khoa vi sinh và gửi ngay đến phòng xét nghiệm của khoa vi sinh.
2.3.1.2. Phân lập virus bằng kỹ thuật PCR dịch tỵ hầu
- Tất cả các bệnh nhân hen phế quản dưới 5 tuổi vào điều trị tại khoa Nhi Bệnh Viện Bạch Mai chúng tôi đều tiến hành làm PCR dịch tỵ hầu.
- Thiết bị và địa điểm: Nghiên cứu được tiến hành tại khoa nhi và khoa vi sinh Bệnh Viện Bạch Mai bằng kỹ thuật sinh học phân tử trên máy Bio Rad CFX96TM Real – Time System CC3071.
Các virus phân lập: Cúm, Adenovirus, RSV.
- Phương pháp RT-PCR phát hiện virus cúm, RSV, Adenovirus là một kỹ thuật hiện đại và chính xác hiện nay.Qui trình được tiến hành như sau:
TÓM TẮT QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ADENOVIRUS
THU NHẬN VÀ XỬ LÝ MẪU Nguyên lý: Dùng tăm bông và dung dịch bảo quản
TÁCH CHIẾT DNA
Nguyên lý: Phương pháp tủa ( Chomczynski & Sacchi, 1987).
THỰC HIỆN REAL – TIME PCR
Nguyên lý: Primer và Taqman probe đặc hiệu cho Adenovirus
MẪU ÂM TÍNH MẪU DƯƠNG TÍNH
TÓM TẮT QUY TRÌNH PHÁT HIỆN CÚM A – CÚM B - RSV
THU NHẬN VÀ XỬ LÝ MẪU Nguyên lý: Dùng tăm bông và dung dịch bảo quản
TÁCH CHIẾT RNA
Nguyên lý: Phương pháp tủa ( Chomczynski & Sacchi, 1987).
THỰC HIỆN RT - PCR
Nguyên lý: dùng enzyme phiên mã ngược chuyển RNA thành cDNA
THỰC HIỆN PCR Nguyên lý: Primer đặc hiệu cho mỗi tác nhân.
ĐIỆN DI TRÊN GEL AGAROSE
Hình 2.1. Hình ảnh mẫu dương tính của virus Cúm A,B, RSV.
( Mẫu 21 dương tính, mẫu 48 âm tính)
Hình 2.2. Hình ảnh mẫu dương tính của Adenovirus Giếng 1,3,4,5: Bệnh phẩm dương tính