- H2S Di ự ộng
2.4.4.2.3. Xác ựịnh kháng nguyê nH của vi khuẩn Salmonellạ
Sau khi ựã xác ựịnh kháng nguyên O của vi khuẩn Salmonella, tiếp tục tiến hành xác ựịnh kháng nguyên H của chúng.
* Xác ựịnh kháng nguyên H của vi khuẩn Salmonella (pha 1)
- Chuẩn bị:
+ Các chủng vi khuẩn Salmonella cần ựịnh typ ựược cấy trên môi trường thạch TSI hoặc thạch thường, ủ ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ.
+ Chọn những khuẩn lạc riêng rẽ, cấy vào môi trường nước BHI (5ml) ựể tủ ấm 37oC trong 2 giờ hoặc qua ựêm ở nhiệt ựộ phòng. Sau ựó, thêm vào canh trùng 5 ml dung dịch nước muối sinh lý có bổ sung Formalin (nước sinh lý + 1% Formalin) nhằm mục ựắch là ựể cố ựịnh kháng nguyên H.
+ Kháng huyết thanh nhóm H gồm: Ha, Hb, Hc, Hd, He,h, HG, Hi, Hk, HL, Hr, Hy, He,n, H1
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 44 + Nhỏ 2 giọt kháng huyết thanh từ Ha ựến H1 vào mỗi ống nghiệm.
+ Dùng Micropipet, hút 450 ộl canh trùng Salmonella ựã sử lý ở trên và cho vào ống nghiệm ựã có chứa kháng huyết thanh.
+ Lắc nhẹ ựể trộn ựều canh trùng và kháng huyết thanh trong ống nghiệm, sau ựó ựặt vào bể ủ nhiệt ở nhiệt ựộ 50oC trong 1 giờ.
- đọc kết quả: Phản ứng dương tắnh thì có ngưng kết kiểu ựám mây, các cụm ngưng kết tương ựối lỏng lẻọ Phản ứng âm tắnh thì dung dịch trong ống nghiệm ựục ựềụ
* Xác ựịnh kháng nguyên H của vi khuẩn Salmonella (pha 2)
Sau khi có kết quả xác ựịnh kháng nguyên H pha 1 của các chủng
Salmonella, chúng tôi tiến hành xác ựịnh tiếp kháng nguyên H pha 2 của chúng.
+ Hút 3,5 ml môi trường nước thịt HI hoặc BHI có chứa 0.25% thạch vào trong 1 ống nghiệm có nút vặn, có chứa sẵn 1 ống thủy tinh nhỏ hở 2 ựầụ + để ống nghiệm ựó vào bể ủ nhiệt ở 50oC trong 15 phút, sau ựó nhỏ 50 ộl kháng huyết thanh tương ứng với kết quả của pha 1 vào ống nghiệm.
+ Dùng que cấy thẳng, lấy 1 khuẩn lạc của chủng vi khuẩn cần ựịnh typ, cấy thẳng vào phắa trong của ống thủy tinh nhỏ sâu khoảng 1-1,5cm. Sau ựó ủ ở tủ ấm 37oC trong vòng 24 giờ.
+ Lấy 1 vòng que cấy của chủng vi khuẩn ựã phát triển trong môi trường (chủng này có thể di chuyển qua thạch mà không bị ức chế), cấy vào 1 ống nghiệm có chứa 5 ml BHI, ựể nghiêng týp trong tủ ấm 37oC trong vòng 6 giờ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 45 muối sinh lý + 1% Formalin), ựể ở nhiệt ựộ phòng trong 2 giờ.
+ Nhỏ 2 giọt kháng huyết thanh tương ứng với kết quả của các chủng tạo pha 2 vào mỗi ống nghiệm.
+ Dùng Micropipet hút 450 ộl canh trùng Salmonella ựã sử lý ở trên và cho vào ống nghiệm ựã có chứa kháng huyết thanh.
+ Lắc nhẹ ựể trộn ựều canh trùng và kháng huyết thanh trong ống nghiệm, sau ựó ựặt vào bể ủ nhiệt ở nhệt ựộ 50oC trong 1 giờ.
+ đọc kết quả: Phản ứng dương tắnh thì có ngưng kết kiểu ựám mây, các cụm ngưng kết tương ựối lỏng lẻọ Phản ứng âm tắnh thì dung dịch trong ống nghiệm ựục ựềụ