- H2S Di ự ộng
2.4.4. Phương pháp xác ựịnh serotype của các chủng vi khuẩn phân lập ựược.
2.4.4.1. Vi khuẩn Ẹ coli:
được thực hiện bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kắnh. Vi khuẩn Ẹ coli có nhiều serotype O khác nhau, do vậy bước quan trọng ựầu tiên là xác ựịnh ựược nhóm serotype O, sau ựó tiến hành các phản ứng ngưng kết với các kháng huyết thanh ựơn giá trong nhóm cần xác ựịnh. Những nguyên liệu cơ bản cho việc xác ựịnh serotype gồm:
- Các chủng Ẹ coli cần ựịnh type ựược giữ trên thạch máu - Các kháng huyết thanh O chuẩn (ựa giá và ựơn giá)
* Phương pháp tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kắnh như sau:
Nhỏ lên hai ựầu lam kắnh sạch, mỗi ựầu một giọt nước muối sinh lý, dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc Ẹ coli cần xác ựịnh trên môi trường thạch máu trộn ựều với 2 giọt nước muối sinh lý thành huyễn dịch vi khuẩn. Nhỏ một giọt kháng huyết thanh chuẩn vào một bên huyễn dịch và một giọt nước muối sinh lý vào bên huyễn dịch còn lại (ựối chứng). Nếu có phản ứng ngưng kết sẽ xuất hiện sau một phút.
- Phản ứng dương tắnh khi hình thành ngưng kết giữa kháng nguyên là vi khuẩn với kháng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, huyễn dịch tách ra làm 2 phần là các hạt ngưng kết và phần nước trong.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 42 - Phản ứng âm tắnh khi hỗn dịch vi khuẩn với kháng huyết thanh ựục ựều giống như bên ựối chứng.
* Với những chủng có ngưng kết với các kháng huyết thanh nhóm, tiếp tục thực hiện như vậy với các kháng huyết thanh ựơn giá thuộc nhóm ựể xác ựịnh rõ từng serotypẹ Trong trường hợp các chủng có hiện tượng ngưng kết chéo với nhiều nhóm hoặc ngưng kết với nhiều ựơn giá khác nhau, thì phải pha loãng kháng huyết thanh theo cấp số 2, kết quả sẽ lấy ngưng kết ở cấp số pha loãng cao nhất.
2.4.4.2. Vi khuẩn Salmonella sp:
Xác ựịnh serotyp của các chủng Salmonella phân lập ựược bằng các phản ứng ngưng kết trên phiến kắnh và trong ống nghiệm bằng kháng huyết thanh chuẩn (hãng Denka Seiken Cọ, Ltd. Tokyo, Nhật Bản) ựối với kháng nguyên thân O và kháng nguyên lông H. Trên cơ sở kết quả thu ựược, tiến hành ựịnh danh chủng vi khuẩn kiểm tra dựa vào bảng phân loại Kauffmann và White (Popoff, 2001[86]).
2.4.4.2.1. Xác ựịnh nhóm kháng nguyên O bằng kháng huyết thanh ựa giá nhóm Ọ