Tiến hành sắc kí cột silicagen để phân chia cặn thô của dịch chiết bằng etyl axetat. Khi rửa giải cột bằng hệ dung môi chlorofom - metanol tỉ lệ (83:17) thu được 24 mg chất rắn vô định hình, nóng chảy ở 269-2700
C, có Rf = 0,53 trong hệ dung môi chlorofom – metanol (50:10) kí hiệu là chất DSE.8.
Quan sát phổ 13C-NMR và DEPT chất DSE.8 cho thấy có tín hiệu của 35 nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon liên kết với oxi. Ngoại trừ tín hiệu ở 78,85ppm là độ chuyển dịch hoá học của cacbon C3 còn lại 6 nguyên tử đặc trưng cho phần đường (các pic trong vùng từ 61,59 ppm đến 76,31ppm thuộc về các liên kết CHOH tương ứng với C2’ ở 73,37ppm; C3’ ở 75,70ppm; C4’ ở 70,05ppm; C5’ ở 76,31ppm và C6’ ở 61,59ppm. Đặc biệt pic ở vùng trường thấp hơn bằng 100,92 ppm đặc trưng cho liên kết C1’- glucosid). Có tín hiệu ở 140,14ppm và 121,80ppm đặc trưng cho liên kết đôi kiểu olephin. Các phổ IR và 1
H-NMR cũng xác nhận sự có mặt của liên kết đôi (1654cm-1, δH-6 = 5,37ppm) và hấp thụ của nhiều nhóm hyđroxyl (3437cm-1). Trên phổ 1
H-NMR cũng quan sát thấy một doublet xuất hiện ở 4,40 ppm với J= 8,0Hz và C’-1 tương ứng ở 100,92ppm. Phổ MS cho pic 396 m/z tương ứng pic [M-C6H12O6 ]+.
Khi thuỷ phân bằng dung dịch HCl 2N chất DSE.8 thu được β-sitosterol và đường glucose. Các số liệu phổ IR, MS, NMR và các đặc trưng hoá học cho phép nghĩ đến chất DSE.8 có công thức phân tử của glucosit C35H60O6. Khi so sánh điểm chảy của nó với điểm chảy của glycosit chuẩn của phòng thí nghiệm có thể khẳng định chất DSE.8 là β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit.
Độ dịch chuyển hoá học các nguyên tử C của DSE.8 được nêu trong
61 H3C CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 O O HO H OH H H H OH H HO 1 3 5 7 9 10 11 13 15 17 18 19 20 21 22 24 25 26 27 28 29 1' 6' 3' Hình 3.26 β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit Bảng 3.3. Số liệu phổ 13 C-NMR (CDCl3, 125Mhz) của một số sterol trong lá cây kim tiền thảo
STT -Sitosterol (ppm) 3-O- -Sitosteryl-glucopyranosit
1 37,28 t 37.04 t 2 31,69 t 27.96 t 3 71,82 d 78.85 d 4 42.35 t 38.43 t 5 140,79 s 1414 s 6 121,71 d 121.80 d 7 31,90 t 31.67 t 8 31,93 d 31.67 d 9 50,17 d 50.01 d 10 36,53 s 36.47 s 11 21,11 t 20.81 t 12 39,81 t 39.55 t 13 42,33 s 42.09 s 14 56,80 d 56.55 d
62
STT -Sitosterol (ppm) 3-O- -Sitosteryl-glucopyranosit
15 24,32 t 24.00 t 16 28, 26 t 29.33 t 17 56,10 d 55.85 d 18 11,87 q 11.48 q 19 19,41 q 19.36 q 20 36,16 d 35.89 d 21 18,80 q 18.94 q 22 33,98 t 33.72 t 23 26,14 t 25.85 t 24 45,88 d 45.67 d 25 29,20 d 28.94 d 26 19,06 q 18.61 q 27 19,82 d 18.41 d 28 23,10 t 22.81 t 29 12,00 q 11.54 q 1’ 100.92 d 2’ 73.37 d 3’ 75.70 d 4’ 70.05 d 5’ 76.31 d 6’ 61.59 t
63
Hình 3.27 Phổ 1
64
Hình 3.28 Phổ 13
65
KẾT LUẬN
1. Lần đầu tiên, cây kim tiền thảo (Desmodium styracifolium.osb.Merr. ) thuộc họ cánh bướm Fabaceae mọc hoang tại Thái Nguyên được nghiên cứu sàng lọc hóa thực vật, đã thiết lập được quy trình ngâm chiết mẫu hợp lí thu được 5 dịch chiết chọn lọc.
2. Từ thân và lá cây kim tiền thảo (Desmodium styracifolium.osb.Merr.), bằng phương pháp phân tích định tính đã khẳng định trong cây kim tiền thảo có những lớp chất: đường khử, ankaloit, steroit, flavonoit, poli phenol, cumarin và saponin.
3. Đã phân lập và xác định được cấu trúc hóa học của 5 hợp chất là: Lupepl, Dotriancontan-1ol, β-Sitosterol, axit ursolic, β-Sitosterol-3-O-β-D- glucopyranosit.
4. Đã thử hoạt tính sinh học của các dịch chiết tổng của cây kim tiền thảo
(Desmodium styracifolium.osb.Merr.) cho thấy có tác dụng kháng oxy hóa
66
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, NXB Y học, TP.Hồ Chí Minh.
2. Nguyễn Văn Đàn (1997), Các phương pháp nghiên cứu cây thuốc, NXB Y-Dược, Tp. Hồ Chí Minh.
3. Nghiêm Thị Hương, Phạm Văn Thỉnh(2010), ―Nghiên cứu một số thành phần hoá học có trong cây hàn the Desmodium heterophylium mọc hoang ở Thái Nguyên‖, Tạp chí Khoa học và Công nghệ Đại học Thái Nguyên, 65(3), tr. 100.
4. Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội.
Tiếng Anh
5. Agurell, S. et al. (1971), J. Nat. prod, 34, pp. 183.
6. Ahluwalia, V.K. et al. (1966), Indian J. Chem, 4, pp. 250.
7. Bigrit U. Jaki, Scott G Franzblau, Lucas R., Chadwick, David C. Lankin, Fangqiu Zhang, Yuehong Wang and Guido F. Pauli (2008), ―Puriy- Activity Relationships of Natural Products: The Case of Anti-TB active Ursolic Acid‖, J. Nat. Prod, 71(9), pp. 1742-1748.
8. Bohlmann, F. et al. (1980), Phytochemistry, 19, pp. 1815.
9. Botta, B. et al. (2003), Phytochemistry, 64, pp. 599-602.
10. Bruhn, J.G. et al. (1974), J. Pharm.Sci, 63, pp. 574.
11. Brunhn, J.G. et al. (1976), J. Nat. Prod, 39, pp. 175-177.
12. Cahill, W. M. et al. (1938), J. Biol. Chem, 126, pp. 29-36.
13. Chernobrovaya N.V. (1973), Khim. Prir. Soedin, 9, pp. 801.
14. Ersspamer, V. et al. (1959), Biochem. Pharmacol, 2, pp. 270.
15. Ghosal, S. et al.(1966), J.O.C, 31, pp. 2284-2288.
67
17. Ghosal, S. et al. (1973), Phytochemistry, 12, pp. 193.
18. Gven, K.C. et al. (1970), Phytochemistry, 9, pp. 1893.
19. Kalidhar, S.B. et al. (1984), J. India chem. Soc, 61, pp. 561.
20. Konno, C. et al. (1979), Planta Med, 35, pp. 150.
21. Khan, H. et al. (1974), Tetrahedron, 30, pp. 281.
22. Lam Y. K. T. et al. (1994), J. Antibiot, 47, pp. 724.
23. Lin, Y-L.et al. (1993), Heterocycles, 36, pp. 1501.
24. Lindgren, J.E. et al. (1976), J. Nat. Prod, 39, pp. 464-466.
25. Mandava, N. et al. (1974), phytochemistry, 13, pp. 2853.
26. Mizuno, M. et al. (1992), Phytochemistry, 31, pp. 361.
27. Monache, G.D. et al. (1996), Phytochemistry, 41, pp. 537.
28. Moriyasu, M. et al. (1997), J. Nat. Prod, 60, pp. 299-301.
29. Pardanani, J.H. et al. (1977), J. Nat. Prod, 40, pp. 585-590.
30. Patchter, I.J. et al. (1959), J.O.C, 24, pp. 1285-1289.
31. Purushothaman, K.K. (1975), Phytochemistry, 14, pp. 1129.
32. Ranieri, R. et al. (1976), J. Nat. Prod, 39, pp. 172-174.
33. Ranieri, R.L. et al. (1976), J. Nat. Prod, 39, pp. 172.
34. Rao, K.V. ( 1975), Planta Med, 27, pp. 31.
35. Reynolds, W. F., McLean, S., Poplawski, J. (1986), ―New triterpenoid. L. L. Tetrahedron‖Enriquez, R. G., Escobar, 42, pp. 3419.
36. Rondest, J. et al. (1968), Bull. Soc. Chim. Fr, pp. 2411-2414.
37. Roseghini, M. et al. (1976), Z. Naturforsch, 31, pp. 118-120.
38. Shure, K.B. et al. (1994), J. Agric. Food chem, 42, pp. 350.
39. Souza, M.P. et al. (1989), Phytochemistry, 28, pp. 2467.
40. Stuart, K.L. et al. (1971), Phytochemistry, 10, 460.
41. Tsanuo, M.K. et al. (2003), Phytochemistry, 64, pp. 265-273.
42. U.S. Pat. (1993), CA, 119, pp. 179344.
68
44. Wilkinson, S. (1958), J.C.S, pp. 2079-2081.
45. Yamaguchi, K. et al. (1979), J. Agric. Food chem, 27, pp. 846.
46. Yang, J. et al. (1993), Yaoxue Xuebao, 28, pp. 197-201.
47. Yang, J.S. et al. (1993), Yaoxue Xuebao, 28, pp. 197.
48. GS. Đoàn Thị Nhu (2013), Kim tiền thảo điều trị sỏi niệu, sỏi mật, viêm gan, viêm thận, http://khoe360.tienphong.vn/thuoc-hay-thay-gioi/kim-tien-
thao-dieu-tri-soi-nieu-soi-mat-viem-gan-viem-than-643498.tpo,
ngày 31/08/ 2013.
49. Thầy thuốc của bạn (2013), Vị thuốc quý của nhân loại,
Phụ lục 1
PHỤ LỤC Phụ lục 1 Các phổ của chất DSH.5
Phụ luc 1.1 Phổ dãn 1
Phụ lục 2
Phụ luc 1.2 Phổ dãn 1
Phụ lục 3
Phụ lục 1.3 Phổ dãn 13
Phụ lục 4
Phụ lục 1.4 Phổ 13
Phụ lục 5
Phụ lục 6
Phụ lục 7
Phụ lục 8
Phụ lục 2 Các phổ của chất DSH.7
Phụ luc 2.1 Phổ dãn 1
Phụ lục 9
Phụ lục 10
Phụ lục 3: Các phổ của chất DSH.10
Phụ lục 3.1 Phổ dãn 1
Phụ lục 11
Phụ lục 3.2 Phổ dãn 1
Phụ lục 12
Phục lục 3.3 Phổ dãn 13
Phụ lục 13
Phụ lục 14
Phụ luc 4: Các phổ của chất DSE.5
Phụ lục 4.1 Phổ dãn 1
Phụ lục 15
Phụ lục 4.2 Phổ dãn 1
Phụ lục 16
Phụ lục 4.3 Phổ dãn 13
Phụ lục 17
Phụ lục 18
Phụ lục 5: Các Phổ của chất DSE.8
Phụ lục 5.1 Phổ dãn 1
Phụ lục 19
Phụ lục 5.2 Phổ dãn 13
Phụ lục 21
Phụ lục 5.3 Phổ 13
Phụ lục 22
Phụ lục 5.4 Phổ 13