Từ 150 chủng vi sinh vật thu nhận được sau 3 ngày nuôi cấy ở 280
C, trên đĩa thạch chứa môi trường MPA mọc lên nhiều loại khuẩn lạc B. thurigiensis
hình tròn, có màu trắng sữa và mép nhăn hoặc không (Hình 3.1).
Hình 3.1. Hình dạng khuẩn lạc Bt trên môi trƣờng MPA sau khi nuôi ở 28ºC sau 72h (1: Khuẩn lạc Bt)
Từ mỗi đĩa nuôi cấy chúng tôi tách lấy một khuẩn lạc riêng rẽ làm tiêu bản với thuốc nhuộm fuchsin base sau đó quan sát trên kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 1000X (vật kính dầu). Kết quả cho thấy trong 150 chủng vi khuẩn thuộc nhóm Bacillus cereus đã thu thập, có 54 chủng sinh tinh thể. Kết quả này được thể hiện trong Hình 3.2, Bảng 3.1.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 3.1. Sự đa dạng hình thái tinh thể của các chủng Bt
STT Hình dạng tinh thể Số chủng Tỷ lệ % 1 Lưỡng tháp 21 39 2 Cầu 4 7 3 Lưỡng tháp và cầu 26 48 4 Lập phương 1 2 5 Cầu và lập phương 1 2 6 Không xác định 1 2 Tổng số 54 100
Hình 3.2. Hình dạng bào tử và tinh thể của Bt phóng đại 1000 lần dƣới kính hiển vi quang học (1: tinh thể, 2: bào tử)
54 chủng B. thuringiensis sinh tổng hợp các lọai protein tinh thể rất đa dạng. Trong đó, protein tinh thể hình lưỡng tháp và hình cầu chiếm tỷ lệ cao nhất 48%, sau đó là protein tinh thể lưỡng thấp chiếm 39%. Các chủng sinh tinh thể hình cầu, lập phương và đồng thời 2 loại tinh thể này chiếm tỷ lệ tương đối thấp, từ 2% đến 7%. Điều này thể hiện tính đa dạng về hình dạng tinh thể của các chủng B. thuringiensis đã phân lập. Sự khác nhau về cấu trúc cũng như hình
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
dạng tinh thể là do thành phần protein cấu tạo tinh thể tạo nên. Sự phong phú về hình dạng tinh thể là cơ sở tạo nên phổ diệt côn trùng rộng từ cánh vảy, bộ hai cánh đến bộ cánh cứng tới giun tròn thực vật.
Theo nhiều tài liệu đã công bố, dưới loài Bta mang nhiều gene trong họ gene cry1 trong đó có gene cry1C có khả năng mã hóa protein tinh thể hình lưỡng tháp và hình cầu có khả năng diệt côn trùng bộ cánh vảy với hoạt lực cao. Vì vậy, các chủng Bt phân lập được phân loại bằng huyết thanh để xác định dưới loài của chúng nhằm tìm ra các chủng Bta và thử hoạt tính diệt côn trùng bộ cánh vảy với sâu tơ.