Quá trình tiền xử lý lõi bắp với nấm mục trắng nhằm làm tăng vùng vô định hình của cellulose, giảm sự bao bọc của lignin, hemicellulose với cellulose giúp tăng khả năng tiếp cận enzyme với cellulose.
Trƣớc khi tiền xử lý, lõi bắp đƣợc nghiền nhỏ, kích thƣớc < 5 mm. Thành phần môi trƣờng khảo sát đƣợc trình bày ở bảng sau. Môi trƣờng đƣợc chứa trong erlen 250 ml và đƣợc tiệt trùng ở 121o
C, 20 phút. Nấm mục trắng phát triển trên PGA sau 5 – 7 ngày đƣợc dùng tạo dịch bào tử. Hòa toàn bộ sinh khối trên bề mặt thạch vào nƣớc cất tiệt trùng, pha loãng dịch bào tử vừa thu đƣợc sao cho đạt mật độ khoảng 1.5×107 bào tử/ml để làm giống cấy vào môi trƣờng lên men. Mật độ bào tử đƣợc xác định bằng cách đếm trực tiếp trên buồng đếm hồng cầu và gián tiếp bằng cách đo độ hấp thu A650nm (A ~ 0.65, tƣơng ứng với 1.5x107 bào tử/ml). Tỉ lệ giống cấy là 15% tƣơng đƣơng với 2 ml dịch bào tử cho 13 g lõi bắp khan (15 g lõi bắp, ẩm 13%).
Trang 26
Bảng 3.1: Thành phần môi trƣờng dinh dƣỡng bổ sung khi lên men bán rắn lõi bắp
Lõi bắp
Khối lƣợng 15g hạt < 5mm, ẩm 13%
Vmôi trƣờng 25ml ~ 50% (khối lƣợng lõi bắp khan/ml) Độ ẩm cuối ~ 67% Thành phần môi trường (g/l) MgSO4.7H2O 1.6 KH2PO4 2 FeSO4.7H2O 0.004 NaCl 0.4 ZnSO4 0.007
Glucose 8 ứng với 0.2 g/13g cơ chất (S) (NH4)2SO4 0.12 ứng với 0.003 g/13gS
MnSO4.H2O 0.28 ứng với 0.007 g/13gS
Tiến hành lên men lõi bắp ở nồng độ C, N, Mn theo bảng trên và thu mẫu sau 7, 10, 14, 16, 18, 21, 25 ngày. Mẫu đƣợc rửa sơ bộ bằng nƣớc máy (loại lƣợng đƣờng sót tránh ảnh hƣởng đến kết quả phân tích đƣờng hóa) và sấy qua đêm ở 40 – 50oC để bảo quản mẫu cho các phân tích sau (độ ẩm nguyên liệu sau khi sấy < 15%).
Tiến hành đƣờng hóa lõi bắp đã xử lý, nồng độ nguyên liệu là 5% (5g lõi bắp khan trong 100 ml đệm citrate 0.05M pH 4.8) và nồng độ enzyme là 10%. Điều kiện tiến hành ở 50oC. Sau 24h đƣờng hóa, lấy mẫu ly tâm 12000 rpm/20 phút và phân tích hàm lƣợng đƣờng trong dịch đƣờng hóa bằng phƣơng pháp xác đinh nồng độ đƣờng tổng số hòa tan (1).