liệu đến khả năng tái sinh của mẫu cấy
Mục đích:
- Tìm phƣơng pháp khử trùng thích hợp
- Xác định nồng độ, thời gian khử trùng phù hợp nhất đối với quả lan. - Theo dõi biểu hiện của hạt.
Phƣơng pháp và hĩa chất sử dụng: - Phƣơng pháp đốt cồn.
- Phƣơng pháp hĩa chất: Dùng HgCl2.
Bố trí thí nghiệm:
- Quả lan đƣợc thu hái từ những cây bố mẹ khỏe mạnh, sạch bệnh và sinh trƣởng tốt ở Sapa.
- Mẫu đƣợc khử trùng thơ ở ngồi bằng dung dịch xà phịng lỗng rồi rửa sạch dƣới vịi nƣớc chảy và rửa lại bằng nƣớc cất vơ trùng.
- Đƣa mẫu vào trong box cấy rửa bằng cồn 700 trong 1 phút, sau đĩ rửa lại bằng nƣớc cất vơ trùng 2- 3 lần.
+ Đối với phƣơng pháp đốt cồn: Nhúng quả vào cồn 900
và hơ nhanh qua ngọn lửa. Nhanh chĩng đặt quả lan vào đĩa petri, đậy lắp lại.
+ Đối với phƣơng pháp dùng hĩa chất: Ngâm mẫu trong HgCl2 và thƣờng xuyên lắc mẫu. Rửa lại mẫu bằng nƣớc cất vơ trùng 3-4 lần cho sạch.
- Sau đĩ quả lan sẽ đƣợc cắt gọt hai đầu và dùng dao mổ xẻ dọc quả lan, tách làm hai.
- Dùng dao giữ lấy phần vỏ quả, dùng panh lấy hết hạt lan ra đĩa petri. - Gieo hạt vào mơi trƣờng.
- Thí nghiệm đƣợc lặp lại 3 lần, mỗi lần một quả
Chỉ tiêu theo dõi: + Tỷ lệ mẫu sống, mẫu chết, mẫu nhiễm + Tình trạng mẫu.
Bảng 2.1: Cơng thức khử trùng cho từng loại mẫu
Vật liệu CT TN Cơng thức khử trùng HgCl2 Cồn Nồng độ (%) Thời gian lần 1 (phút) Nồng độ (%) Số lần đốt Quả CT1 0,1 5 96 1 CT2 0,1 10 96 2 CT3 0,3 5 CT4 0,3 10