Ánh sáng
Mẫu cấy ở trên mơi trƣờng cĩ chƣa một nguồn năng lƣợng sẵn cĩ là đƣờng, đƣợc sử dụng ít hay nhiều là tùy thuộc vào khả năng quang hợp của cây.
Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu cho thấy thời gian chiếu sáng cĩ vai trị trong quá trình phát sinh hình thái của mơ nuơi cấy, thích hợp là từ 12-18 h/ngày. Cƣờng độ ánh sáng là yếu tố quan trọng tác động đến quá trình phát sinh hình thái của mơ nuơi cấy. Cƣờng độ ánh sáng thích hợp cho mơ nuơi cấy thƣờng từ 1000-7000 lux (Moresin, 1974). Cƣờng độ ánh sáng cao sẽ kích thích sự phát triển của mơ sẹo, cịn cƣờng độ ánh sáng thấp sẽ gây nên sự tạo chồi [16]. Bên cạnh đĩ, chất lƣợng ánh sáng cũng ảnh hƣởng tới sự phát sinh hình thái mơ thực vật in vitro: Ánh sáng đỏ làm tăng chiều cao thân chồi hơn so với ánh sáng trắng. Nếu mơ nuơi cấy trong ánh sáng xanh
thì sẽ ức chế sự vƣơn cao của mơ nhƣng lại ảnh hƣởng tốt tới sự sinh trƣởng của mơ sẹo. Vì vậy mà trong phịng thí nghiệm hay sử dụng ánh sáng của đèn huỳnh quang với cƣờng độ 2000 – 3000 lux.
Nhiệt độ
Nhiệt độ phịng nuơi cấy mơ - tế bào là yếu tố quan trọng ảnh hƣởng tới sự phân chia tế bào và các quá trình sinh trƣởng, phát triển của cây nuơi cấy in vitro. Nhiệt độ tối ƣu cho nhiều loại cây là trong khoảng 23- 280
C. Một số lồi cây cần nhiệt độ tối ƣu để tạo hình.
Độ ẩm
Trong bình nuơi cấy thì độ ẩm tƣơng đối luơn bằng 100% nên trong quá trình nuơi cấy ta khơng cần quan tâm nhiều đến độ ẩm.
Mơi trƣờng in vitro
Mơi trƣờng bên trên và dƣới mặt thạch trong bình nuơi cấy đƣợc gọi là mơi trƣờng in vitro, mơi trƣờng này cĩ ảnh hƣởng đến sinh trƣởng, phát triển hình thái của cây in vitro. Khi tiến hành nhân giống in vitro cần tiến hành các biện pháp cân bằng CO2, tạo mơi trƣờng thích hợp cho cây cĩ thể hấp thu và vận chuyển dinh dƣỡng...