Là kháng sinh thuộc nhóm Fluoroquynolone cáo tác dụng ức chế enzym AND gyase, enzym tham gia vào vòng xoắn AND vì vậy ức chế tổng hợp AND của vi khuẩn.
* Công thức cấu tạo
1 ethyl - 6 fluoro, 1,4 dihydro 4 oxo - 7 - (1 piperziny) - 3 - quinolone carboxylic acid. O F COOH N N C2H5 N H
Norfloxacin có tác dụng chủ yếu trên các cầu khuẩn, trực khuẩn và tụ cầu khuẩn: E.coli, Salmonella, Proteus, Yersia, Pseudomonas, Streptococcus, Staphylococcus spp…Thuốc có tác dụng kéo dài sau khi sử dụng ở một số loại vi khuẩn trên.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Chƣơng 2. ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tƣợng nghiên cứu
- Lợn nái sinh sản ở các lứa tuổi, được nuôi tại một số trang trại chăn nuôi lợn nái ngoại tập trung tại địa bàn Thành phố Thái Nguyên.
- Các loại vi khuẩn gây bệnh viêm tử cung ở lợn. - Các loại kháng sinh dùng trong nghiên cứu.
2.2. Vật liệu nghiên cứu
- Mẫu bệnh phẩm:
+ Dịch rỉ viêm tử cung, âm đạo.
+ Dịch tử cung âm đạo của lợn nái bình thường. * Vật liệu nghiên cứu:
+ Môi trường dùng cho nuôi cấy vi khuẩn: Thạch máu, thạch huyết thanh, MacConkey, Gelatin…
+ Các loại hoá chất và môi trường thử phản ứng lên men đường: Lactoza, Saccaroza, Maltoza…
+ Thuốc nhuộm Gram, dung dịch chỉ thị màu: Thuốc nhuộm tím Gentian, dung dịch fucsin kiềm…
+ Kháng huyết thanh chuẩn.
+ Các khoanh giấy thử kháng sinh.
+ Các dụng cụ, máy móc, trang thiết bị phòng thí nghiệm: Tủ ấm, tủ lạnh, kính hiển vi …
2.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
- Địa bàn nghiên cứu: Một số trang trại chăn nuôi lợn nái ngoại tập trung tại địa bàn Thành phố Thái Nguyên.
- Labor xét nghiệm: Phòng thí nghiệm khoa Vi sinh vật - Bệnh viện Đa khoa trung ương Thái Nguyên.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 7 năm 2009 đến tháng 07 năm 2010.
2.4. Nội dung nghiên cứu
2.4.1. Tình hình bệnh viêm tử cung của lợn tại thành phố Thái Nguyên tỉnh Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010 tỉnh Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010
- Tỷ lệ lợn bị bệnh viêm tử cung (tính chung).
- Tỷ lệ lợn bị bệnh viêm tử cung dục theo tuổi sinh sản. - Tỷ lệ lợn bị bệnh viêm tử cung theo các mùa trong năm.
2.4.2. Xác định thành phần và tỷ lệ các loại vi khuẩn nuôi cấy và phân lập được từ dịch tử cung, âm đạo của lợn nái bình thường và lợn nái bị bệnh được từ dịch tử cung, âm đạo của lợn nái bình thường và lợn nái bị bệnh viêm tử cung
- Thành phần và tỷ lệ các loại vi khuẩn phân lập được từ chất tiết đường sinh dục của lợn nái bình thường.
- Thành phần và tỷ lệ các loại vi khuẩn phân lập được từ dịch viêm tử cung, âm đạo của lợn bị bệnh viêm tử cung.
2.4.3. Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các loại vi khuẩn phân lập được lập được
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của cácvi khuẩn Streptococcus
phân lập được.
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn Salmonella
phân lập được.
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn E.coli phân lập được.
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn
Staphylococcus phân lập được.
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn Pseudomonas
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Xác định mức độ mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn của tập đoàn vi khuẩn trong dịch tử cung, âm đạo của lợn nái bị viêm tử cung.
2.4.4. Theo dõi sự thay đổi một số chỉ tiêu lâm sàng của lợn nái mắc bệnh viêm tử cung viêm tử cung
2.4.5. Theo dõi ảnh hưởng của bệnh viêm tử cung đến năng suất sinh sản của lợn nái của lợn nái
2.4.6. Khảo nghiệm mối quan hệ giữa tỷ lệ lợn nái mắc bệnh viêm tử cung và tỷ lệ lợn con phân trắng và tỷ lệ lợn con phân trắng
2.4.7. Thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh
2.5. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.5.1. Phương pháp điều tra số lợn, mắc bệnh viêm đường sinh dục tại các trang trại chăn nuôi lợn ngoại tập trung tại TP Thái Nguyên. trang trại chăn nuôi lợn ngoại tập trung tại TP Thái Nguyên.
Điều tra tình hình dịch bệnh viêm tử cung của lợn qua số liệu của 2 trại chăn nuôi và tự lập phiếu điều tra.
Nội dung điều tra gồm: - Xây dựng phiếu điều tra.
- Xác định số lợn mắc bệnh tại thời điểm điều tra. - Xác định số lợn chết vì bệnh tại thời điểm điều tra.
- Lợn nghi mắc bệnh được điều tra căn cứ vào triệu chứng lâm sàng và chẩn đoán bệnh tích.
2.5.2. Phương pháp lấy mẫu
* Lấy mẫu và bảo quản mẫu bệnh phẩm
Theo Nguyễn Phúc Quý và cs (1991) [27], với lợn bị bệnh đang sống và chết vì nghi mắc bệnh: lấy dịch dỉ viêm bằng tăm bông và một số dụng cụ khác, sau đó đưa mẫu vào ống nghiệm chứa dung dịch PBS, đậy nút, ghi nhãn, đánh số thứ tự, địa điểm lấy mẫu… Mẫu được bảo quản trong đá lạnh ở nhiệt độ 2 - 8°C và được mang về phòng thí nghiệm để tiến hành xét nghiệm sau 1 - 2 giờ.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.5.3. Phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn
Để xác định sự biến đổi vi khuẩn học của vi khuẩn trong dịch viêm tử cung của lợn chúng tôi tiến hành lấy mẫu dịch tử cung, âm đạo (Lợn sau đẻ 12 -24 giờ và lợn mắc bệnh). Mẫu bệnh phẩm được kiểm tra theo các phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học của các tác giả: Phạm Kim Anh (1991) [1]; Nguyễn Phúc Quý và cs (1991) [27] và Nguyễn Như Thanh (1974) [29].
Mẫu bệnh sau khi lấy về được phân lập và nuôi cấy trên các môi trường phù hợp như: Thạch máu, thạch huyết thanh, MacConkey, Gelatin… các vi khuẩn được nuôi cấy trong thời gian 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ ở 37o
C. Tùy thuộc vào loại môi trường và vi khuẩn khác nhau.
Sau khi chọn các khuẩn lạc điển hình đem xác định, kiểm tra hình thái vi khuẩn, các tính chất sinh hóa, lên men các loại đường.
2.5.4. Phương pháp làm kháng sinh đồ và xác định tính mẫn cảm với một số loại kháng sinh của các loại vi khuẩn
Phương pháp xác định khả năng mẫn cảm với các loại kháng sinh của các loại vi khuẩn được nhiều tác giả nghiên cứu như: Phạm Kim Anh (1991) [1]; Nguyễn Phúc Quý và cs (1991) [27]… Trong nghiên cứu này chúng tôi áp dụng phương pháp kháng sinh đồ trên đĩa thạch theo Kirby - Bauer, FAO (1994), dùng giấy tẩm kháng sinh của hãng Oxoid (Anh) sản xuất và một số giấy khác được sản xuất trong nước theo tiêu chuẩn của Oxoid (Anh)., Code 1332 E. Kết quả đánh giá theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
* Phương pháp tiến hành
Bước 1: Chuẩn bị môi trường thạch đĩa Muellier Hinton hoặc Nutrient agar.
Bước 2: Các chủng vi khuẩn nuôi cấy trong các môi trường thích hợp được dàn đều lên môi trường thạch đĩa Muellier Hinton hoặc Nutrient agar.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bước 3: Giấy tẩm kháng sinh của hãng Oxoid được đặt khoảng cách đều nhau trong đĩa.
Bước 4: Bồi dưỡng ở 370C trong 18 - 24 giờ, đo đường kính vòng vô khuẩn để đánh giá mức độ mẫn cảm hay kháng kháng sinh của vi khuẩn .
Bảng tiêu chuẩn đánh giá sự mẫn cảm với kháng sinh như sau:
Bảng 2.1. Tiêu chuẩn đánh giá kháng sinh đồ theo Kirby - Bauer
Loại kháng sinh Vòng vô khuẩn (đƣờng kính mm) Đề kháng (R) Trung gian (I) Mẫn cảm (S) Streptomycin 11 12 - 14 15 Neomycin 10 11 - 13 14 Doxycyclin 12 13 - 17 18 Gentamicin 12 13 - 17 18 Penicillin 10 11 - 13 14 Norfloxacin 12 13 - 17 18 Ampicillin 11 12 - 14 15 Oxytetracyclin 11 13 - 14 15 Tetracyclin 14 15 - 18 19 2.5.5. Phương pháp xử lý số liệu
Các kết quả thu được trong các thí nghiệm thu được được xử lý theo phương pháp thống kê sinh vật học của Nguyễn Văn Thiện (2002) [40] và phần mềm Microsof Exel
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.6. Bố trí thí nghiệm
2.6.1. Thí nghiệm xác định tính mẫn cảm kháng sinh của các vi khuẩn phân lập được
Hình 2.1. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tính mẫn cảm kháng sinh
Mẫu dịch
Pha loãng
Môi trường thạch thường: Quan sát hình thái, màu sắc, kích thước, đếm tổng số các loại khuẩn lạc
Thử nghiệm điều trị Nuôi cấy trên nước thịt Nuôi cấy trên
nước thịt
Nuôi cấy trên nước thịt Tính chất sinh học
Giữ trên thạch máu
Môi trường dùng cho VK Gram + Đếm số khuẩn lạc Môi trường dùng cho VK Gram -
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.6.2. Thí nghiệm ứng dụng điều trị bệnh viêm tử cung lợn nái theo các phác đồ điều trị
Thí nghiệm được tiến hành theo phương pháp chia lô ngẫu nhiên theo lứa tuổi sinh sản của lợn nái và các thể viêm khác nhau.
Mỗi mỗi lô thí nghiệm gồm 90 nái bị mắc bệnh viêm tử cung.
2.6.3. Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của bệnh viêm tử cung đến năng suất sinh sản của lợn nái
Thí nghiệm được tiến hành theo phương pháp chia lô ngẫu nhiên: Nhóm 1 gồm 90 nái sinh sản bị bệnh viêm tử cung và nhóm 2 gồm 90 nái sinh sản không mắc bệnh.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Chƣơng 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Tình hình bệnh viêm tử cung của lợn nái ngoại đƣợc nuôi ở một số trang trại tại thành phố Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010
3.1.1. Tỷ lệ mắc bệnh viêm tử cung của lợn nái ngoại tại một số trại chăn nuôi lợn tập trung của thành phố Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010
Bằng phương pháp điều tra trực tiếp và thông qua số liệu của Trạm thú y thành phố Thái Nguyên và của các cơ sở chăn nuôi chúng tôi thu được kết quả tỷ lệ nhiễm bệnh viêm tử cung của lợn nuôi tại 2 trại chăn nuôi lợn tại thành phố Thái Nguyên là Trại giống lợn Tân Thái và trang trại Chi - Hùng qua 3 năm từ 2008 đến 2010. Kết quả điều tra được thể hiện tại bảng 3.1.
Bảng 3.1. Tỷ lệ mắc bệnh viêm tử cung ở đàn lợn nái ngoại được nuôi tại thành phố Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010
Năm Số điều tra (Con) Số lợn mắc (Con) Số lợn chết (Con) n (%) n (%) 2008 868 463 53,34 12 1,38 2009 1124 587 52,22 15 1,34 2010 820 373 45,48 9 1,10 Tổng số 2812 1423 50,60 36 1,28
Chỉ tiêu này phản ánh tình hình nhiễm bệnh viêm tử cung của đàn lợn nái ngoại của các trại qua 3 năm và đánh giá hiệu quả các công tác phòng và điều trị bệnh qua các năm. Dựa vào những kết quả đánh giá để chúng tôi có thể đưa ra những khuyến cáo cho người chăn nuôi về các biện pháp phòng và điều trị bệnh viêm tử cung trên đàn lợn nái sinh sản.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Để thể hiện rõ hơn tỷ lệ nhiễm bệnh viêm tử cung ở đàn lợn nái ngoại của các trang trại qua các năm 2008 - 2010, kết quả còn được thể hiện trên hình 3.1. 40 45 50 55 60 Năm 2008 Năm 2009 Năm 2010
Hình 3.1. Biểu đồ tỷ lệ mắc bệnh viêm tử cung ở đàn lợn nái ngoại được nuôi tại thành phố Thái Nguyên trong 3 năm từ năm 2008 đến năm 2010
Qua kết quả bảng 3.1 và hình 3.1 cho thấy: Tỷ lệ mắc bệnh viêm tử cung qua các năm: 2008 tỷ lệ mắc 53,34%, tỷ lệ lợn bệnh chết 1,38%, 2009 tỷ lệ mắc 52,22% và tỷ lệ chết 1,34% và nửa đầu năm 2010 tỷ lệ lợn mắc bệnh là 45,48% trong đó chết 1,10%. Tỷ lệ mắc bệnh tính chung cho các năm điều tra là 50,60% và tỷ lệ chết của lợn bệnh qua 3 năm là 1,28%.
Kết quả điều tra cho thấy, tỷ lệ lợn nái mắc bệnh có xu hướng giảm dần qua các năm. Tuy nhiên, tỷ lệ này vẫn còn khá cao từ 45,48% (2010) đến 53,34% (2008). Điều đó chứng tỏ, bệnh viêm tử cung là một trong những bệnh sản khoa thường xuyên xảy ra với lợn sinh sản và bệnh khó được phòng và điều trị dứt điểm tại các cơ sở chăn nuôi.
Không chỉ tại riêng thành phố Thái Nguyên tỷ lệ lợn mắc bệnh viêm tử cung ở mức cao như vậy mà theo tác giả Nguyễn Văn Thanh (2007) [33], lợn nái
53,34
52,22
45,48 Tỷ lệ %
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
ngoại sinh sản nuôi tại vùng đồng bằng Sông Hồng có tỷ lệ mắc bệnh cao lên tới 50,81% cá biệt tại thị xã Thái Bình tỷ lệ lợn mắc bệnh lên tới 61,07%. Từ đó, chúng ta thấy việc kiểm soát bệnh viêm tử cung không chỉ là vấn đề riêng của một địa phương, khu vực nào mà nó là vấn đề đang gặp phải của hầu hết các cơ sở chăn nuôi.
Vì vậy, để phần nào làm giảm tỷ lệ mắc các bệnh sản khoa nói chung và bệnh viêm tử cung nói riêng các cơ sở chăn nuôi cần thực hiện công tác phòng bệnh một cách tích cực và triệt để.
- Với công tác nhân giống: Lợn đực giống là nhân tố quan trọng trong việc làm tăng nguy cơ xảy ra các bệnh nhiễm trùng ở lợn nái, là nguyên nhân làm lây lan dịch bệnh giữa các cá thể lợn nái sinh sản trong đàn. Khi thực hiện thụ tinh cho lợn nái chúng ta cần chú ý: Kiểm tra vệ sinh dụng cụ thụ tinh nhân tạo, vệ sinh cơ quan sinh dục của lợn nái trước khi tiến hành phối giống; không sử dụng lợn đực bị mắc các bệnh viêm nhiễm đường sinh dục để thụ tinh trực tiếp hoặc khai thác tinh nhân tạo, không cho đực giống phối trực tiếp với nái bị mắc các bệnh viêm đường sinh dục… Do đó, trong các trang trại chăn nuôi lợn nái sinh sản chúng ta cũng cần chú ý đến việc phòng và điều trị các bệnh sản khoa xảy ra trên lợn đực giống.
- Với công tác đỡ đẻ: tăng cường công tác vệ sinh, khử trùng tiêu độc chuồng trại thường xuyên, vệ sinh chuồng đẻ trước khi đưa lợn nái sắp sinh lên, vệ sinh bộ phận sinh dục và bầu vú của lợn nái sắp sinh bằng các dung dịch thuốc sát trùng: KMnO4, xanh methylen, Biocid - 30… khi đỡ đẻ nên dùng găng tay bảo hộ đã được sát trùng sạch sẽ và được bôi trơn bằng vazơlin, khi lợn đẻ xong nên dùng các dung dịch sát trùng thông thường để rửa sạch cơ quan sinh dục của lợn, chăm sóc tốt nhằm tăng cường sức đề kháng cho lợn nái…
- Phòng các bệnh truyền nhiễm cho lợn nái thông qua công tác vệ sinh phòng dịch và công tác tiêm phòng vacxin theo lịch trình.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
3.1.2. Tình hình bệnh viêm tử cungcủa lợn theo tuổi sinh sản
Để có thể biết lợn thường mắc bệnh viêm tử cung, âm đạo với tỷ lệ cao ở lứa đẻ nào từ đó có chế độ chăm sóc, quản lý và sử dụng hợp lý. Chúng tôi đã tiến hành theo dõi trực tiếp trên đàn lợn ở 3 nhóm tuổi sinh sản: Lợn nái hậu bị, lợn nái sinh sản lứa 2 - 4 và lợn nái sinh sản từ lứa thứ 5 trở lên. Kết quả điều tra tình hình lợn nái mắc bệnh viêm tử cung theo tuổi sinh sản được