Tuy phõn loại HTH-HHTB ủó cú những ủúng gúp nhất ủịnh trong việc chẩn ủoỏn và phõn loại lơ-xờ-mi cấp nhưng cũng cũn cú hạn chế. Hạn chế ủầu tiờn là do tớnh ủặc hiệu tương ủối và ủộ nhậy thấp của HHTB. Thật vậy, phương phỏp HHTB dựa trờn tớnh phản ứng của cỏc dũng tế bào với cỏc kỹ thuật nhuộm khỏc nhau ủể bộc lộ cỏc khỏc biệt sinh húa giữa cỏc dũng. Cỏc ủặc ủiểm sinh húa này khụng hoàn toàn ủặc trưng riờng cho một dũng tế bào nào mà chỉ mang tớnh khuynh hướng. Vớ dụ, phương phỏp nhuộm PAS nhằm phỏt hiện sự phõn bố glycogen trong nguyờn sinh chất của tế bàọ Glycogen cú mặt ở hầu hết cỏc dũng tế bào mỏu, với khuynh hướng tập trung thành cụm lớn ở cỏc lymphoblast ỏc tớnh và phõn tỏn ở myeloblast và monoblast. Phản ứng esterase khụng ủặc hiệu dương tớnh với cỏc hạt thụ, khụng bị ức chế bởi fluoride natrị Nhưng ủỏnh giỏ mức ủộ lan tỏa hay khu trỳ lại phụ thuộc rất nhiều vào chủ quan của người ủọc và mức ủộ phản ứng cũng thay ủổi tựy thuộc từng bệnh nhõn, thậm chớ từng tế bàọ Dự sao thỡ kỹ thuật MPO cũng cú ủộ chớnh xỏc cao hơn cỏc kỹ thuật khỏc, vỡ enzym MPO tương ủối ủặc trưng cho dũng và việc phỏt hiện ra men này chứng tỏ blast thuộc dũng tủỵ ðộ nhạy thấp của cỏc kỹ thuật HHTB chớnh là nguyờn nhõn gõy hạn chế của
phương phỏp HHTB. Nhiều bệnh nhõn ALL ủược xỏc ủịnh bằng phương phỏp miễn dịch học nhưng blast lại hoàn toàn õm tớnh với PAS. Kỹ thuật MPO và Sudan ủen õm tớnh ở thể M0 do blast chưa hỡnh thành men ủặc hiệụ Mặt khỏc, kết quả nhuộm HHTB phụ thuộc rất nhiều vào thao tỏc kỹ thuật của người làm, chất lượng húa chất cũ hay mới và ủiều kiện phũng xột nghiệm như nhiệt ủộ, ủộ ẩm, pH của nước rửa… Sau khi ủược ủiều chỉnh bằng kết quả miễn dịch học và nhuộm lại, nhiều tiờu bản HHTB õm tớnh trước ủú trở nờn dương tớnh, hoặc kết quả khỏc nhau ở cỏc phũng thớ nghiệm khỏc nhaụ
Hạn chế khỏc của phương phỏp HHTB là khả năng xỏc ủịnh cỏc thể bệnh. Lý thuyết sinh mỏu hiện ủại cho thấy ngoài cỏc dũng hồng cầu, bạch cầu hạt trung tớnh, mono và lympho, cỏc tế bào mỏu khỏc như bạch cầu hạt ưa acid, bạch cầu hạt ưa bazơ, tế bào NK… cũng ủược sinh ra từ những tế bào gốc riờng. Hơn nữa quỏ trỡnh biệt húa tế bào mỏu từ tế bào gốc toàn năng diễn ra theo mụ hỡnh cõy biệt húa, tức là qua nhiều giai ủoạn và ủược phõn tỏch dần. Lơ-xờ-mi cấp là một nhúm bệnh ung thư mỏu phức tap, tựy thuộc tổn thương tế bào ỏc tớnh xảy ra ở giai ủoạn nào, tại khõu nào của quỏ trỡnh biệt húa tế bào mỏu mà hỡnh thành thể bệnh ủú theo mụ hỡnh bệnh lý ủơn dũng. Như vậy, ta cú thể gặp nhiều thể bệnh với những ủặc ủiểm bệnh học, tiờn lượng và ủỏp ứng ủiều trị khỏc nhaụ Chớnh vỡ vậy, phõn loại HHTB thành 7 thể (ủối với AML) và 3 thể (ủối với ALL) là chưa thật ủầy ủủ, chỉ xỏc ủịnh ủược cỏc bệnh cơ bản, chưa xỏc ủịnh ủược cỏc thể bệnh hiếm gặp hoặc phức tạp. ðối với AML, chưa cú tiờu chuẩn HHTB ủể xỏc ủịnh M0 và cỏc dũng bạch cầu ưa acid, bạch cầu ưa bazơ… ðối với cỏc thể L1, L2, L3, khụng ủại diện ủược cho cỏc dũng và cỏc giai ủoạn biệt húa của lympho T và lympho B. Tuy thể L3 thường phự hợp với nguyờn bào miễn dịch, nhưng cú thể sẽ sai lầm khi xỏc ủịnh thể này chỉ ủơn thuần bằng HTH-HHTB. Cỏc thể bệnh ủặc
biệt khỏc như lơ-xờ-mi cấp tế bào gốc, lơ-xờ-mi cấp dũng NK, cỏc thể bệnh lai và cỏc thể bệnh hỗn hợp cũng khụng thể xỏc ủịnh ủược bằng phương phỏp HTH-HHTB. Cho ủến nay, phương phỏp HHTB vẫn chưa tỡm ra ủược cỏc bằng chứng ủặc trưng của cỏc thể bệnh này và ủều phải dựa vào phương phỏp miễn dịch học [41].
1.3. BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ TRONG LƠ-Xấ-MI CẤP. 1.3.1. Cỏc bất thường ở Lơ-xờ-mi cấp dũng tủỵ